李佳茹,張 蕊,楊郁鵬,曹韻茗,金曉飛,燕 平

(1.山西中醫(yī)藥大學(xué),山西 晉中 030619;2.山西省中醫(yī)院,山西 太原 030012)

近年來,隨著負(fù)性生活的影響,抑郁癥人群有所增加,約涉及全世界人口的21%,我國抑郁癥患病率持續(xù)升高[1]。抑郁癥患者沒有嚴(yán)重的身體癥狀表現(xiàn),主要以病理性情緒及心理變化為主,對其正常生活產(chǎn)生影響,嚴(yán)重情況下患者會(huì)有輕生想法[2]。由于該病病理因素和癥狀表現(xiàn)多樣化,機(jī)制研究尚不清楚,藥物控制和心理療法等為主要的干預(yù)手段。針刺可明顯改善抑郁癥癥狀,具有無毒副作用、無成癮依賴性、安全性高等優(yōu)勢,抑郁癥患者較易接受。實(shí)驗(yàn)研究表明,抑郁癥模型體內(nèi)的炎癥因子水平變化與該病的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[3-4]。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上檢測抑郁癥模型大鼠血清中炎癥因子與促甲狀腺激素水平,以期為日后進(jìn)一步探究抑郁癥模型及臨床運(yùn)用針灸診療該病提供更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠,雄性,體質(zhì)量(240±20)g,購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司[SCXK(京)2016-0002]。實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)溫度20～25℃,相對濕度40%～70%,通風(fēng)良好且周圍環(huán)境噪音低于60 d B,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后建立抑郁癥模型。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑和儀器 白細(xì)胞介素(IL)-1β、IL-6、促甲狀腺激素(TSH)ELISA試劑盒(上海博生工生物工程股份有限公司);SDZ-Ⅱ型電子針療儀(上海三崴醫(yī)療設(shè)備有限公司);HC-1010高速離心機(jī)(北京海天友誠科技有限公司);伯樂-5700酶標(biāo)儀(上海閃譜生物科技有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模方法 將30只大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、解郁針組,每組10只,各組大鼠均單籠飼養(yǎng)。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,模型組和解郁針組參照文獻(xiàn)采用不可預(yù)見性溫和應(yīng)激刺激(CUMS)方法造模[5],每日抽簽隨機(jī)選取1種應(yīng)激刺激,且每種方式不超過4次,共造模28 d。

2.2 治療方法 解郁針組在應(yīng)激刺激后抓取固定,常規(guī)皮膚消毒,選用0.20 mm×13 mm毫針針刺百會(huì)、神門、太沖[6],依據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》中大鼠穴位定位方法[7]取穴。百會(huì)平刺2 mm,神門和太沖直刺1～2 mm,連接SDZ-Ⅱ電針儀刺激,頻率2 Hz,每日電針30 min,持續(xù)治療28 d?？瞻捉M不做任何處理,模型組不予針刺但需抓取固定。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 觀察指標(biāo)及檢測方法 ①大鼠一般情況:觀察每組大鼠的日?；顒?dòng)狀態(tài)、色澤及二便,監(jiān)測大鼠每日的耗水量、攝食量、體質(zhì)量。②糖水消耗實(shí)驗(yàn)(SPT):在正式實(shí)驗(yàn)前3 d為大鼠適應(yīng)性補(bǔ)充糖和水。實(shí)驗(yàn)開始前1 d,每個(gè)鼠籠放置一瓶定量的蔗糖水、自來水和適量飼料。24 h后稱重余下的蔗糖水和自來水,記錄每只大鼠在24 h內(nèi)攝取的蔗糖水和自來水,采用糖水偏好度公式[8]得出每組大鼠的糖水偏好度,治療結(jié)束后再行SPT實(shí)驗(yàn),計(jì)算糖水偏好度。③IL-1β、IL-6、TSH水平:依照大鼠體質(zhì)量選取10%水合氯醛進(jìn)行麻醉,麻醉后腹腔主動(dòng)脈采血,靜置后離心(4℃,3000 rpm,15 min),取上清液,采用ELISA法檢測,操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書。

3.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù),計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,兩組組間比較采用單因素方差分析(OneWayANOVA),以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.3 結(jié)果

(1)一般情況 經(jīng)過1周的適應(yīng)性喂養(yǎng),3組大鼠毛色、反應(yīng)、飲食和排便均正常,體質(zhì)量基本無差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,空白組大鼠皮毛顏色光滑,反應(yīng)快,精神活動(dòng)狀態(tài)良好、二便正常;模型組大鼠精神狀態(tài)差,毛色粗糙,活動(dòng)少,敏感性差,飲食不良,大小便少,尿黃,體質(zhì)量有所下降;解郁針組大鼠精神狀態(tài)尚可,皮毛顏色較亮麗,反應(yīng)靈敏,大小便較正常,體質(zhì)量與空白組相比基本無差異。

(2)針刺“解郁方”對抑郁癥模型大鼠體質(zhì)量的影響實(shí)驗(yàn)前,3組大鼠體質(zhì)量比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)后,模型組體質(zhì)量明顯小于空白組(P＜0.01),提示造模成功;解郁針組體質(zhì)量明顯高于模型組(P＜0.01),說明針刺對體質(zhì)量有影響。見表1。

表1 3組大鼠實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量變化(g,±s)

表1 3組大鼠實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量變化(g,±s)

注:與空白組實(shí)驗(yàn)后比較,△△P＜0.01;與模型組實(shí)驗(yàn)后比較,▲▲P＜0.01。

組別 鼠數(shù) 實(shí)驗(yàn)前體質(zhì)量 實(shí)驗(yàn)后體質(zhì)量空白組 10 242.40±8.94 352.30±29.37模型組 10 244.20±10.65 306.90±8.14△△解郁針組 10 244.40±12.71 339.90±17.99▲▲

(3)針刺“解郁方”對抑郁癥模型大鼠糖水偏愛度的影響 實(shí)驗(yàn)前,3組大鼠糖水偏愛度比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)后,模型組糖水偏愛度明顯低于空白組(P＜0.01),解郁針組糖水偏愛度明顯高于模型組(P＜0.01)。見表2。

表2 3組大鼠實(shí)驗(yàn)前后糖水偏愛度比較(%,±s)

表2 3組大鼠實(shí)驗(yàn)前后糖水偏愛度比較(%,±s)

注:與空白組實(shí)驗(yàn)后比較,△P＜0.01;與模型組實(shí)驗(yàn)后比較,▲▲P＜0.01。

組別 鼠數(shù) 實(shí)驗(yàn)前糖水偏愛度 實(shí)驗(yàn)后糖水偏愛度空白組 10 95.70±3.83 95.70±3.30模型組 10 93.10±3.10 65.80±17.66△△解郁針組 10 95.90±3.14 91.80±3.39▲▲

(4)針刺“解郁方”對抑郁癥模型大鼠血清IL-1β、IL-6、TSH水平的影響 實(shí)驗(yàn)后,模型組血清IL-1β、IL-6水平明顯高于空白組(P＜0.01),TSH水平明顯低于空白組(P＜0.01);解郁針組血清IL-1β、IL-6水平明顯低于模型組(P＜0.01),TSH水平明顯高于模型組(P＜0.01)。見表3。

表3 3組大鼠實(shí)驗(yàn)前后血清白細(xì)胞介素-1β、白細(xì)胞介素-6、促甲狀腺激素水平比較(pg·ml-1,±s)

表3 3組大鼠實(shí)驗(yàn)前后血清白細(xì)胞介素-1β、白細(xì)胞介素-6、促甲狀腺激素水平比較(pg·ml-1,±s)

注:與空白組實(shí)驗(yàn)后比較,△△P＜0.01;與模型組實(shí)驗(yàn)后比較,▲▲P＜0.01。

組別 鼠數(shù) IL-1β水平 IL-6水平 TSH水平空白組 10 45.74±7.96 54.76±6.70 13.56±0.66模型組 10 86.96±4.32△△ 112.37±4.36△△ 8.40±0.17△△解郁針組 10 50.59±1.93▲▲ 59.76±4.88▲▲ 12.91±0.70▲▲

4 討論

中醫(yī)稱抑郁癥為“郁證”,郁證臨床常見證型有肝郁氣滯、肝郁脾虛等[9]。文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn),肝郁氣滯證常見于腦卒中患者及不同年齡段的女性患者,肝郁脾虛證常見于體質(zhì)虛弱的老年人或更年期郁證患者,合并心腦血管疾病等基礎(chǔ)疾病的郁證患者多表現(xiàn)為心腎不交證[10]。臨證時(shí)可根據(jù)郁證不同的臨床表現(xiàn)辨證施治。腧穴“解郁方”由百會(huì)、神門、太沖組成,是由燕平教授研究團(tuán)隊(duì)通過大量早期實(shí)驗(yàn)選取的、治療抑郁癥最有效的腧穴方。百會(huì)主一身之宗,為百神之會(huì),可協(xié)調(diào)陰陽、調(diào)和五臟精神、通調(diào)髓海;神門是體表與體內(nèi)氣血物質(zhì)交匯的門戶,可安神定志、補(bǔ)益心氣,對情志、意識(shí)的調(diào)節(jié)具有重要作用;太沖屬肝經(jīng)原穴,可調(diào)節(jié)三焦郁證,治療嘆息、目赤頭痛、胸悶脅痛、失眠多夢、郁證、狂躁等病證。諸穴合用,可調(diào)和陰陽、醒神明目,達(dá)到疏肝解郁的功效。臨證治療抑郁癥患者時(shí),可以以“解郁方”為主穴方,根據(jù)不同癥狀選擇相應(yīng)的配穴進(jìn)行治療。

IL-1、IL-6水平升高是誘導(dǎo)抑郁癥發(fā)生的原因之一[11]。研究表明,當(dāng)應(yīng)激刺激引起病變反應(yīng)時(shí),免疫細(xì)胞接收巨噬細(xì)胞及單核細(xì)胞發(fā)出的信號,在發(fā)生炎癥時(shí)介導(dǎo)炎癥反應(yīng)[12]。炎癥反應(yīng)發(fā)生時(shí),IL-1、IL-6水平升高,宏觀表現(xiàn)為對食欲、睡眠、情緒和其他生理活動(dòng)的影響。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn),慢性輕度應(yīng)激刺激大鼠和給予小鼠脂多糖(LPS)均能增加其前額葉皮質(zhì)和海馬的促炎細(xì)胞因子水平及類似抑郁癥的行為,抗抑郁藥可以使IL-1、IL-6明顯下降,直至恢復(fù)正常[13-14]。TSH具有促進(jìn)甲狀腺激素合成和釋放的功能,當(dāng)下丘腦-垂體-甲狀腺軸的功能異常時(shí)TSH無法正常釋放。抑郁癥患者腦功能異常改變時(shí),下丘腦無法正常釋放TSH,甲狀腺激素也隨之減少,造成免疫系統(tǒng)紊亂,表現(xiàn)為情緒不佳或認(rèn)知障礙等[15]。本研究結(jié)果顯示,解郁針組血清IL-1、IL-6水平低于模型組,TSH水平高于模型組,證實(shí)電針腧穴“解郁方”對抑郁癥有良好的診治效果。

針刺治療抑郁癥無明顯不良反應(yīng),療效快,安全性較高,通過對抑郁癥多層次、多靶點(diǎn)的綜合調(diào)節(jié),可以更好地改善焦慮、睡眠障礙和其他相關(guān)癥狀。本實(shí)驗(yàn)還存在不足之處,如分組較少,僅有陽性對照組而沒有設(shè)置干預(yù)對照組,實(shí)驗(yàn)樣本量較少,可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性,同時(shí)實(shí)驗(yàn)檢測的指標(biāo)及檢測手段較為簡單,在以后的研究中仍然需要大量實(shí)驗(yàn)以更深層次探究該疾病的病變機(jī)制。

綜上所述,電針腧穴“解郁方”能改善慢性應(yīng)激刺激誘導(dǎo)的抑郁癥模型大鼠抑郁癥行為學(xué)表現(xiàn)和認(rèn)知功能障礙,可為臨床應(yīng)用和機(jī)制探究提供數(shù)據(jù)支持。