劉冬梅，閆曉武，王東

（1.西安市高陵區(qū)醫(yī)院，陜西 西安 710200；2.陜西省新安中心醫(yī)院，陜西 西安 710048）

梅毒是由蒼白密螺旋體（Treponema Pallidum，TP）感染所導(dǎo)致的慢性全身性傳播疾病，該病有較強(qiáng)的傳染性，可通過(guò)性接觸、輸血、母嬰垂直傳播、注射等多種途徑傳播[1]。梅毒病原體對(duì)人體的黏膜及皮膚有很強(qiáng)的親和性，可引起全身各組織和臟器的損害，從而嚴(yán)重危害人類健康[2]。而當(dāng)前梅毒發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，因此選擇理想的檢測(cè)方法對(duì)梅毒的早期診治有重要的價(jià)值[3]。血清學(xué)檢測(cè)是診斷梅毒的重要依據(jù)之一，包括膠體金法、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）法、梅毒螺旋體特異抗體測(cè)定（TPPA）法等[4-5]，其中TPPA法是疾控中心推薦的梅毒確證實(shí)驗(yàn)，但是有操作繁瑣、費(fèi)用昂貴、操作和結(jié)果判斷難以自動(dòng)化等不足，不適合在臨床工作中進(jìn)行大規(guī)模篩查[6-7]。膠體金法與ELISA法檢測(cè)都有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，可適用于大樣本篩查，但是在檢測(cè)過(guò)程中的特異性較差，容易發(fā)生抗體假陰性情況[8-9]。為了進(jìn)一步完善梅毒患者的早期診斷效果，本文觀察與分析了膠體金法和ELISA法檢測(cè)梅毒抗體假陰性情況，重點(diǎn)探討了2種方法在梅毒檢測(cè)中的效果?，F(xiàn)總結(jié)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2017年7月—2019年12月選擇在本院診治的疑似梅毒患者84例作為研究對(duì)象。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者年齡20～80歲；②自愿配合研究，并已簽署知情同意書(shū)；③本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)了此次研究；④患者臨床表現(xiàn)為生殖器四周有斑塊或丘診、硬下疳、腹股溝淋巴結(jié)可見(jiàn)腫大。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠與哺乳期婦女；②有精神疾病史者；③合并嚴(yán)重心及臟器功能障礙者；④合并惡性腫瘤者；⑤合并內(nèi)分泌疾病、血液系統(tǒng)疾病、代謝性疾病者；⑥資料不全者。

1.2 方法 抽取所有患者的空腹靜脈血2～3mL，3 500轉(zhuǎn)/min離心10 min，取上層血清，放置-20℃冰箱保存，檢測(cè)時(shí)避免反復(fù)凍融。

膠體金試劑由廣州萬(wàn)孚生物科技有限公司提供，批號(hào)為W0348114；ELISA試劑由上海生化工程股份有限公司提供，批號(hào)為20183051；TPPA試劑由珠海麗珠試劑股份有限公司提供，批號(hào)為VN80822。由陜西省皮膚病研究所提供310份檢測(cè)標(biāo)本作為室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)本，所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

膠體金法：將試紙條置于干凈平坦的臺(tái)面上，用加樣器將100 μL血清加入金標(biāo)測(cè)試卡樣品孔內(nèi)，靜置20 min左右讀取結(jié)果。

ELISA法：用TP抗原TP47和TmpA包被微孔板，加樣后37℃溫育60 min，洗板后加底物顯色，用雙波長(zhǎng)450/630 nm空白調(diào)零，讀取吸光度（OD）值。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 膠體金法：失效為對(duì)照區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶；陽(yáng)性為測(cè)試卡在檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)位置出現(xiàn)2條紫紅色條帶；陰性為測(cè)試卡只在對(duì)照區(qū)位置出現(xiàn)一條紫紅色條帶。

ELISA法：以弱陽(yáng)性對(duì)照的OD值為臨界值，≥臨界值為陽(yáng)性，初試結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)必須進(jìn)行雙孔復(fù)試，復(fù)試雙孔為陽(yáng)性時(shí)判為陽(yáng)性，雙孔為陰性時(shí)判為陰性，雙孔為陽(yáng)性時(shí)判為陽(yáng)性，一孔為陰性、一孔為陽(yáng)性時(shí)判為陽(yáng)性。

以TPPA作為金標(biāo)準(zhǔn)，所有試驗(yàn)與判斷嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 選擇SPSS 19.00，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)、百分率（例、%）表示（對(duì)比為卡方 χ2分析）；計(jì)量數(shù)據(jù)以±s表示（對(duì)比為t檢驗(yàn)，多組間對(duì)比為方差分析），P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 梅毒確診情況 經(jīng)TPPA法確診為梅毒64例，一期組（一期梅毒）38例，二期組（二期梅毒）26例，非梅毒組20例。3組的一般資料對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表 1。

2.2 檢出率對(duì)比 膠體金法和ELISA法對(duì)一期梅毒的檢出率為94.7%和97.4%，對(duì)二期梅毒的檢出率為88.5%和92.3%，對(duì)非梅毒的檢測(cè)率為5.0%和0.0%，見(jiàn)表 2。

2.3 診斷效果 膠體金法和ELISA法檢測(cè)梅毒的敏感性與特異性為 90.6%（58/64）、93.8%（60/64）和95.0%（19/20）、95.0%（19/20），見(jiàn)表 3。

表1 3組一般資料對(duì)比 （±s）

表1 3組一般資料對(duì)比 （±s）

組別 n 性別（男/女） 年齡（歲） 體質(zhì)量指數(shù)（kg/m2） 收縮壓（mmHg） 舒張壓（mmHg） 血糖（mmol/L） 心率（次/min）一期組 38 19/19 54.19±1.48 22.66±2.18 127.83±11.84 76.77±7.14 5.10±0.33 89.76±7.18二期組 26 14/12 54.87±1.38 22.76±1.74 128.09±12.47 77.01±6.28 5.08±0.12 89.14±6.56非梅毒組 20 11/9 55.02±1.11 22.56±1.22 127.88±13.11 76.76±4.10 5.12±0.13 89.28±7.88 F 0.164 0.394 0.284 0.492 0.389 0.098 0.533 P 0.921 0.533 0.679 0.322 0.539 0.873 0.413

表2 3組梅毒檢出率對(duì)比 例（%）

表3 膠體金法和ELISA法檢測(cè)梅毒的敏感性與特異性例

2.4 假陰性情況 在84例患者中，膠體金法檢測(cè)假陰性5例（一期梅毒2例，二期梅毒3例），ELISA法檢測(cè)假陰性3例（一期梅毒1例，二期梅毒2例）。

3 討論

梅毒是危害人類健康的傳播疾病之一，主要通過(guò)與感染者性接觸而被傳染，可與其他性傳播疾病協(xié)同傳播[10]。該病患者在臨床上表現(xiàn)多樣，主要以皮膚表現(xiàn)為特征，有危害大、傳染性強(qiáng)等特點(diǎn)，在臨床上極易出現(xiàn)誤診與漏診等情況。選擇有效的方法對(duì)梅毒的早期診治、控制傳播與避免不必要的醫(yī)療糾紛有重要的意義[11]。

TP侵入人體后，人體可產(chǎn)生抗心磷脂的非特異性抗體與抗菌體的特異性抗體。其中前者不是機(jī)體針對(duì)菌體本身所起的反應(yīng)，是針對(duì)菌體破壞患者組織后釋放的類脂產(chǎn)生的反應(yīng)，為此其檢出時(shí)間相對(duì)比較晚[12]。比如常規(guī)的梅毒檢測(cè)方法-快速血漿反應(yīng)素與甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)雖然有檢測(cè)迅速、檢測(cè)成本低、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果易讀等特點(diǎn)，但是由于檢測(cè)結(jié)果易受主觀因素影響，常出現(xiàn)生物學(xué)假陽(yáng)性與假陰性，靈敏度和特異性較差[13-14]。TPPA作為梅毒螺體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，有很高的敏感性與特異性，但是操作復(fù)雜、反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，不適合做大批量的篩選實(shí)驗(yàn)[15]。膠體金法采用膠體金免疫檢測(cè)技術(shù)和層析原理，可定性檢測(cè)血清樣本中的梅毒螺旋體抗體[16]。ELISA法采用用基因工程方法生產(chǎn)的抗原包被微孔板，也可檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體，準(zhǔn)確度高、靈敏度高、特異性強(qiáng)[17]。本研究結(jié)果從機(jī)制上分析，由于機(jī)體感染蒼白密螺旋體4～10周左右，血清內(nèi)才能出現(xiàn)數(shù)量不等的非特異性及特異性抗體，且經(jīng)治療后非特異性抗體可轉(zhuǎn)為陰性，所以膠體金法的敏感性較差，不適用于一期梅毒的檢測(cè)[18]。ELISA法可以重組TP的特異性抗原，檢測(cè)對(duì)象包括IgM與IgG混合抗體，一次操作即可對(duì)多樣本進(jìn)行檢測(cè)。并且ELISA法為定量檢測(cè)方法，檢測(cè)數(shù)據(jù)比較客觀，克服了肉眼判讀的主觀性缺點(diǎn)[19]。

雖然不同地區(qū)之間的梅毒流行情況差別很大，但其依舊成為了嚴(yán)重的醫(yī)學(xué)與社會(huì)問(wèn)題。有研究指出，相較于正常人群，梅毒感染者艾滋病的感染風(fēng)險(xiǎn)可提高5～10倍左右，且梅毒潛伏期較長(zhǎng)，為此在臨床上容易被忽視[20]。當(dāng)前由于用于梅毒血清學(xué)檢驗(yàn)的方法較多，不同檢測(cè)方法都有其特征，實(shí)驗(yàn)室如何更合理地選用檢測(cè)方法，對(duì)避免假陰性情況而引發(fā)的后續(xù)問(wèn)題尤為重要[21]。本研究顯示膠體金法和ELISA法檢測(cè)梅毒的敏感性與特異性為90.6%、93.8%和95.0%、95.0%。從機(jī)制上分析，膠體金法有可單份操作、簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)，適用于基層的快速檢驗(yàn)，但膠體金法為肉眼判讀結(jié)果，易漏診一些弱陽(yáng)性標(biāo)本，導(dǎo)致出現(xiàn)檢測(cè)假陰性情況。ELISA法檢測(cè)不受樣本中纖維蛋白和溶血等影響，一次上機(jī)進(jìn)行自動(dòng)化檢測(cè)，避免了主觀因素對(duì)結(jié)果的影響，結(jié)果判讀科學(xué)準(zhǔn)確，能提高梅毒的檢出率[22]。當(dāng)前也有學(xué)者對(duì)30例梅毒感染者分別應(yīng)用了膠體金法和ELISA法檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)后者的假陰性與假陽(yáng)性率明顯低于前者，主要在ELISA法檢測(cè)通過(guò)基因重組合成抗原，對(duì)梅毒感染檢測(cè)有更高的靈敏度與特異性[23]。

本研究顯示在84例患者中，膠體金法檢測(cè)假陰性5例（一期梅毒2例，二期梅毒3例），ELISA法檢測(cè)假陰性3例（一期梅毒1例，二期梅毒2例）。膠體金法是一種應(yīng)用現(xiàn)代生物工程技術(shù)制備的高度純化單克隆TP的基因工程抗原，但是該方法在臨床上的應(yīng)用存在一定的假陰性，在梅毒潛伏期尤其是一期梅毒時(shí)容易漏診[24]。ELISA法可采用雙抗原夾心法原理檢測(cè)血清中的特異性抗體，對(duì)一期梅毒與二期梅毒的檢出率較高，但是其檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性只能說(shuō)明正在或曾經(jīng)感染過(guò)梅毒，而不能判斷梅毒的活性情況。有研究顯示，當(dāng)人體標(biāo)本中的梅毒抗體濃度過(guò)高或過(guò)低時(shí)，也容易出現(xiàn)假陰性而漏檢[25]。本研究也存在一定的不足，調(diào)查的人群數(shù)量比較少，且沒(méi)有分析影響檢測(cè)結(jié)果的因素，將在后續(xù)研究中深入探討。

總之，膠體金法和ELISA法檢測(cè)梅毒抗體的敏感性與特異性都比較高，但是都有一定的假陰性情況，臨床檢測(cè)應(yīng)根據(jù)實(shí)際需要，采用聯(lián)合檢測(cè)可減少漏診情況的發(fā)生。