李麗麗

摘要：本文對球毛殼菌Cg-1菌株應用于水果采摘后病害的防治進行了綜述，包括防治機理、防治效果、防治的優(yōu)勢。球毛殼菌Cg-1是一種植物內生菌，該菌株能生活在植物體內，經(jīng)誘導產(chǎn)生的粗酶液和抗生物質粗提液均具能明顯抑制多種植物病菌菌絲的生長和孢子萌發(fā)，使采后水果延長保質期。試驗表明該菌株對水果采摘后防病抑病優(yōu)于假絲酵母，無毒、無污染，對多種病害具有較好的抑制效果。

關鍵詞： 內生真菌;采后病害;抑制效果

Abstract： the application of Chaetomium globosum Cg-1 strain in the prevention and control of diseases after fruit picking was reviewed， including prevention and control mechanism， prevention and control effect and advantages. Chaetomium globosum Cg-1 is a kind of endophytic bacteria， which can live in plants. The crude enzyme solution and antibiotic crude extract produced by induction can obviously inhibit the growth of hyphae and spore germination of various plant pathogens， and prolong the shelf life of postharvest fruits. Experiments show that the strain is superior to Candida spp. in preventing and suppressing diseases after fruit picking， and it is non-toxic and pollution-free， and has a good inhibitory effect on various diseases.

Key words： endophytic fungi; Postharvest diseases; Inhibition effect

引言

水果采摘后腐爛大多由真菌引起，水果在采收、包裝、貯存和運輸過程中若受到機械損傷[1]，霉菌很容易通過傷口侵蝕水果，并在水果上大量生長，從而造成水果的腐爛。真菌則是水果最主要的致腐病原菌，前人制定出諸如低溫冷藏、氣調貯藏、減壓貯藏等對抑制真菌病害行之有效的環(huán)境控制措施[2]?，F(xiàn)今社會，對水果新鮮度的要求更為嚴格，對保鮮技術更為重視，基于此，球毛殼菌Cg-1就目前我國國內水果采摘后的保鮮和貯存致病菌的防治具有非常好的抑制效果。

1.水果采后真菌病害的分離和鑒定

1.1從健康組織中分離潛伏侵染病原菌

在貯運的水果中選取侵染病菌的果實，取病變的組織部位進行分離[3]。

1.1.1分離方法：在無菌超凈工作臺上，將所取病變組織部位首先放入70%的酒精中浸泡30s，迅速用滅菌濾紙吸除酒精后，移入2%的次氯酸鈉溶液浸泡1min，再用滅菌水清洗3次（本操作可在滅過菌的培養(yǎng)皿或20ml小燒杯中進行），取出后用濾紙吸干組織塊，植入PDA平板培養(yǎng)基中25℃下培養(yǎng)2～3d，當培養(yǎng)出的菌落直徑生長至1cm時，用接種針挑取菌絲尖端植入另一皿PDA培養(yǎng)基內培養(yǎng)同上;重復上述操作3次即可作為純化菌種回接種果實，進行病原致病性能的再鑒定，最后轉接入試管，4℃冰箱保存，并鑒定到屬和種。

1.1.2對分離菌株進行病原致病性再鑒定

分離純化后的菌株必須經(jīng)過再次回接寄主試驗才能確認它們是否具有導致水果采后腐爛的致病性能。即將分離菌株回接在寄主水果上，如果發(fā)病癥狀與貯運中腐敗癥狀相符合，

便可作為采后病原菌進一步研究其致病條件與控制方法。采用已純化后的病原菌株回接被測果實，通過接種觀察病斑發(fā)展速度和發(fā)病程度，可判斷被接菌株致病能力的大小。

2水果的選擇和予處理

2.1水果的選擇

選擇市場上常見的秋子梨，拉丁學名：Pyrus ussuriensis Maxim.，選擇大小均勻一致、外觀無病害的購買。

2.2予處理

將梨先用自來水清洗，再侵泡在0.1%的次氯酸鈉溶液中消毒1分鐘，取出，用自來水沖洗，沖掉殘余次氯酸鈉，再用在酒精燈上滅過菌的打孔器打洞，位置選在果實的赤道部位，打一個直徑5毫米深5毫米的洞。

3球毛殼菌Cg-1對水果致病菌的抑制效果實驗

3.1球毛殼菌Cg-1的培養(yǎng)：

球毛殼菌Cg-1菌株的子囊孢子產(chǎn)孢培養(yǎng)基組成：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂18g，水1000ml，pH值自然。新鮮馬鈴薯去皮后，切成邊長0.5cm的小方塊，加水1000ml，煮沸后再加熱30min，然后用四層紗布過濾，保留濾液，加入20g葡萄糖，18g瓊脂，定容1000ml，121℃滅菌25min備用。將活化的球毛殼菌Cg-1菌株的菌絲餅接種于PDA平板上，25℃培養(yǎng)12-15天，可獲得大量子囊孢子;經(jīng)過一段時間的低溫冷藏后，子囊孢子即可用1/2濃度的馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基配制成濃度為1*106的孢子菌懸液備用。

3.2病原菌及孢子懸液制備：

梨灰霉?。˙otytis cinerea Pers）

用接種環(huán)在培養(yǎng)好的梨灰霉病試管斜面上刮取適量孢子，轉移至無菌生理鹽水中，用血球計數(shù)板計數(shù)，并用無菌生理鹽水調整濃度至所需要的濃度，待用。

3.3抑制病斑過程：

將球毛殼菌Cg-1分別配置1*106，1*107，1*108的濃度，以假絲酵母和無菌水做對照。果實打孔后，按要求用移液槍加入上述各濃度的球毛殼菌Cg-1菌懸液30ul，放置一小時后再加入15ul的致病菌孢子懸浮液，其中梨的傷口處加入5*104個/ml的梨灰霉孢子懸浮液。果實風干后置于塑料筐中，用保鮮膜進行封閉，以保持筐內的濕度。將果實置于培養(yǎng)室內進行貯藏，其中，梨果的貯藏溫度為25℃[4]，貯藏7天。

每個處理分三組，每組隨機挑選5個水果，實驗重復三次。經(jīng)過若干天的培養(yǎng)，用游標卡尺測定水果病斑，記錄病斑直徑并計算發(fā)病率。

抑制率=（CK病斑直徑-處理病斑直徑）/CK病斑直徑*100%

4.結果與分析

4.1在設定的濃度下，待清水對照組梨的病斑直徑長到40mm大，分別將試驗組梨取出培養(yǎng)箱，用游標卡尺量取病斑直徑。病斑直徑大小見表1，球毛殼菌Cg-1對梨灰霉病的抑制效果隨著濃度的增大病斑直徑明顯減小。在使用濃度1*108下，抑制率達到58.91%，抑制效果非常明顯（可見附圖）。

4.2在國內，范青等研究了假絲酵母對水果灰霉病的抑制，當接種灰霉孢子濃度為1*105個/mL時，在25℃，1*108CFU/mL的酵母懸浮液能完全抑制病害。球毛殼菌Cg-1與對照組假絲酵母在相同的抑菌濃度下，Cg-1組的病斑直徑明顯小于假絲酵母對照組的。表明球毛殼Cg-1對水果灰霉病的抑制效果優(yōu)于假絲酵母。

4.3接種濃度為1*108球毛殼菌Cg-1的梨子，25℃貯存30天未見病斑，相同條件下對照組超過20天則出現(xiàn)病斑。

參考文獻

[1]孫儷，仇農(nóng)學，吳競爽.蘋果貯運時的機械損傷的預測模型[J]，農(nóng)業(yè)工程學報，1996，12（4）：208～212.

[2]范青，田世平，徐勇.假絲酵母對蘋果采后灰霉病和青霉病抑制效果的影響[J]，中國農(nóng)業(yè)科學，2001，34（2）：163～168.

[3]范青，田世平，徐勇，等.季也蒙假絲酵母對采后桃果食軟腐病的抑制效果[J]，植物學報，2000，42（10）：1033～1038.

[4]范青，田世平，姜愛麗，等.采摘后果實病害生物防治拮抗菌的篩選和分離[J]，中國環(huán)境科學，2001，21（4）：313～316.