董曉蕊

摘要：目的：以補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素為指標(biāo)成分，分別從煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)對(duì)補(bǔ)腎活血膏中主要成分含量的影響進(jìn)行考察，為后期補(bǔ)腎活血膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定奠定基礎(chǔ)。方法：以高效液相色譜法測(cè)定補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素含量。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-水（55：45）為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為246nm;流速為1ml/min;柱溫30℃;進(jìn)樣量為10μl。結(jié)果：通過對(duì)比各實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下出膏率、相對(duì)密度及補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含量測(cè)定結(jié)果，初步確定補(bǔ)腎活血膏提取工藝為浸泡12小時(shí)，煎煮3次，第一次1h，第二次45min，第三次45min。

關(guān)鍵詞：補(bǔ)腎活血膏;提取工藝;補(bǔ)骨脂

補(bǔ)腎活血膏方是青海省中醫(yī)院肺病科專科用藥，用于慢性阻塞性肺疾?。–OPD）穩(wěn)定期的治療，在臨床已有多年使用歷史。補(bǔ)腎活血膏由炙補(bǔ)骨脂、黨參、黃芪、骨碎補(bǔ)等27味中藥組成，具有扶正固本，祛痰逐瘀，活血通脈的作用，在減輕慢性阻塞性肺疾病的臨床癥狀，遏制病情的發(fā)展，提高患者的生存質(zhì)量方面發(fā)揮著積極的作用。

1含量測(cè)定

1.1儀器與試藥

XS105DU電子天平（上海梅特勒有限公司）;BSA224S-CW電子天平（賽多利斯有限公司）;Waters2695高效液相色譜儀;Milli-Q Advantage A10超純水儀（默克密理博）。

補(bǔ)腎活血膏（批號(hào)0826-1、0826-2、0826-3）;補(bǔ)骨脂素對(duì)照品（批號(hào)21010802：，含量以99.99%計(jì)）;異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品（批號(hào)19101704：，含量以99.31%計(jì)）;對(duì)照品均購(gòu)自成都格利普生物科技有限公司。試劑均為色譜純，水為超純水。

1.2色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-水（55：45）為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為246nm;[1]流速為1ml/min;柱溫30℃;進(jìn)樣量為10μl。

1.3對(duì)照品溶液的制備

補(bǔ)骨脂素對(duì)照品（批號(hào)21010802：，含量以99.99%計(jì)）5.52mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻;異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品（批號(hào)19101704：，含量以99.31%計(jì)）5.36mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻;分別精密量取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品母液、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品母液各1ml，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

1.4供試品溶液的制備

精密量取補(bǔ)腎活血膏方濃縮液50ml，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2炙補(bǔ)骨脂陰性補(bǔ)腎活血膏的制備

由于補(bǔ)腎活血膏方中阿膠、鹿角膠、龜板膠、紫河車粉均在收膏時(shí)加入，黃酒用于膠類的烊化，均不在本次實(shí)驗(yàn)的考察范圍內(nèi)，因此在制備供試品補(bǔ)腎活血膏（陰性對(duì)照）時(shí)將上述細(xì)料藥剔除。

2.1制備方法 ?精密稱取除炙補(bǔ)骨脂、阿膠、鹿角膠、龜板膠、紫河車粉外其它處方中藥飲片1份，加水浸泡12小時(shí)，煎煮60min，提取液趁熱濾過，濾液濃縮至600ml。

3單因素考察

3.1浸泡時(shí)間

3.1.1浸泡方法 ?由于補(bǔ)腎活血膏方中阿膠、鹿角膠、龜板膠、紫河車粉均在收膏時(shí)加入，黃酒用于膠類的烊化，均不在本次實(shí)驗(yàn)的考察范圍內(nèi)，因此在制備供試品補(bǔ)腎活血膏時(shí)將上述細(xì)料藥剔除。

精密稱取除阿膠、鹿角膠、龜板膠、紫河車粉外其它處方中藥飲片3份，加入8倍量的水，分別浸泡6小時(shí)、12小時(shí)、15小時(shí)，過濾，計(jì)算飲片吸水率，結(jié)果見表1。

3.1.2結(jié)論  表1實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，浸泡時(shí)間越長(zhǎng)，飲片吸水率越大，但浸泡12小時(shí)與浸泡15小時(shí)時(shí)，吸水率變化不大，綜合考慮，選擇浸泡時(shí)間為12小時(shí)。

3.2煎煮次數(shù)

3.2.1煎煮方法 ?由于補(bǔ)腎活血膏方中阿膠、鹿角膠、龜板膠、紫河車粉均在收膏時(shí)加入，黃酒用于膠類的烊化，均不在本次實(shí)驗(yàn)的考察范圍內(nèi)，因此在制備供試品補(bǔ)腎活血膏時(shí)將上述細(xì)料藥剔除。

精密稱取除阿膠、鹿角膠、龜板膠、紫河車粉外其它處方中藥飲片4份，加水浸泡12小時(shí)，再加入5 倍量的水，分別提取1、2、3、4次，每次1小時(shí)，提取液液趁熱濾過，濾液濃縮至600ml。

3.2.2出膏率

精密稱取上述補(bǔ)腎活血膏濃縮液各30ml，置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，105℃干燥3h至恒重，置干燥器中冷卻30min，精密稱定重量，計(jì)算出膏率，結(jié)果見表2。

3.2.3相對(duì)密度

照《中國(guó)藥典》2020版四部通則0601相對(duì)密度測(cè)定法中的比重瓶法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表2。

3.2.4含量測(cè)定

照“1含量測(cè)定”下方法進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表3。

3.2.5結(jié)論 ?綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，煎煮2次時(shí)，出膏率和相對(duì)密度均變化較明顯，煎煮3、4次時(shí)，出膏率與相對(duì)密度變化不大。進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，煎煮3次時(shí)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含量明顯增加，煎煮4次時(shí)，含量基本無(wú)變化。綜合考慮，選擇煎煮次數(shù)為3次。

3.3煎煮時(shí)間

3.3.1煎煮方法 ?由于補(bǔ)腎活血膏方中阿膠、鹿角膠、龜板膠、紫河車

精密稱取除阿膠、鹿角膠、龜板膠、紫河車粉外其它處方中藥飲片4份，加水浸泡12小時(shí)，再加入5倍量的水，分別提取60min、120min、150min、200min，提取液趁熱濾過，濾液濃縮至600ml。

3.3.2出膏率

精密稱取上述補(bǔ)腎活血膏濃縮液各30ml，置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，105℃干燥3h至恒重，置干燥器中冷卻30min，精密稱定重量，計(jì)算出膏率，結(jié)果見表4。

3.3.3相對(duì)密度

照《中國(guó)藥典》2020版四部通則0601相對(duì)密度測(cè)定法中的比重瓶法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表4。

3.3.4含量測(cè)定

照“1含量測(cè)定”下方法進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表5。

3.3.5結(jié)論 ?綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，煎煮時(shí)間大于120分鐘時(shí)，出膏率與相對(duì)密度明顯增加，之后基本不變，但在含量測(cè)定時(shí)，煎煮150分鐘時(shí)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含量最高，煎煮200分鐘時(shí)變化不明顯。因此，選擇煎煮時(shí)間為150min。

4 綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合實(shí)際制劑生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，對(duì)補(bǔ)腎活血膏的生產(chǎn)工藝進(jìn)行優(yōu)化，選擇加水量為5倍，浸泡12h，煎煮3次，第一次1h，第二次45min，第三次45min。

參考文獻(xiàn)：

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2020年版（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2020：195

[2]呂天璞、張水定.從脾肺腎論治慢性阻塞性肺病緩解期[J].中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)，2016，05：42