李 雪，康 路

（1.盤錦市大洼區(qū)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展中心，遼寧 盤錦 124200；2.盤錦市大洼區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧 盤錦 124200）

豬瘟主要是一種由豬瘟病毒引發(fā)的高度傳染性疾病，該病死亡率極高，類型較多，診斷困難，一旦診治不及時(shí)，容易導(dǎo)致生豬的群體性死亡，對(duì)生豬養(yǎng)殖的危害極大。本文通過對(duì)豬瘟病毒分離與鑒定實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的分析，為生豬養(yǎng)殖業(yè)豬瘟疫病的診斷提供參考，以確保豬瘟疫病防治工作的有效性。

生豬養(yǎng)殖業(yè)受豬瘟的影響，直接經(jīng)濟(jì)損失非常大。因此，要想徹底根除豬瘟，除了要建立完整的生物安全制度，認(rèn)真研究豬瘟的流行病學(xué)外，還必須通過豬瘟病毒實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的研究，以確定不同豬瘟病毒檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)和缺點(diǎn)，篩選出檢測(cè)準(zhǔn)確度高、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度快、成本較低的檢測(cè)技術(shù)。

1 豬瘟病毒ELISA實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是檢測(cè)抗體的一項(xiàng)技術(shù)，在大型養(yǎng)豬場(chǎng)應(yīng)用較多，結(jié)合ELISA的實(shí)驗(yàn)原理，在其基礎(chǔ)上發(fā)展出了多種檢測(cè)方法?，F(xiàn)階段在豬瘟病毒抗體和抗原檢測(cè)中，已經(jīng)形成多種ELISA檢測(cè)方法，在生豬養(yǎng)殖疫病研究和防治中起到了關(guān)鍵性的作用。

1.1 間接ELISA抗體檢測(cè)方法

該檢測(cè)方法是將已知的豬瘟病毒抗原進(jìn)行包被，將制備好的血清加入孔中，等到反應(yīng)完全后，滴入帶有過氧化物酶標(biāo)記的葡萄球蛋白A，待血清變色后，讀取酶標(biāo)記，得出檢驗(yàn)的結(jié)果。研究人員使用豬瘟兔化弱毒株進(jìn)行間接ELISA 實(shí)驗(yàn)，提取HCLV 的E2 基因，然后插入到pEI-32a 原核，建立一個(gè)新的pEI-2e，使其變成一個(gè)宿主菌BL21（DE3），最后在不同的誘導(dǎo)條件下，進(jìn)行TPTG 表達(dá)，獲取多個(gè)誘導(dǎo)結(jié)果。通過對(duì)誘導(dǎo)蛋白結(jié)果的比對(duì)，得到最好的誘導(dǎo)條件，以保證菌體蛋白總量達(dá)到實(shí)驗(yàn)的預(yù)期結(jié)果。并將在最佳誘導(dǎo)條件下獲取的蛋白CSFV 抗原進(jìn)行包被，到此完成間接ELISA 抗體檢測(cè)。有相關(guān)研究人員使用間接ELISA 檢測(cè)法，對(duì)100份血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，證實(shí)該方法診斷的靈敏性好、反應(yīng)體系小、實(shí)驗(yàn)速度快，并解決了原來CSFV培養(yǎng)和純化難度大的問題。

1.2 Dot-ELISA抗體檢測(cè)方法

該方法與ELISA接近，不同之處是將ELISA的固相載體，轉(zhuǎn)換為Dot-ELISA的混合纖維素膜，該方法比間接ELISA的實(shí)驗(yàn)操作更簡(jiǎn)單。有研究通過使用Dot-ELISA抗體檢測(cè)方法，在一個(gè)大型養(yǎng)豬場(chǎng)進(jìn)行豬瘟病毒免疫母豬抗體水平檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，獲取45份血清，經(jīng)Dot-ELISA檢測(cè)后，母豬血清陽性為32份，檢出率為71%，從而證明Dot-ELISA檢測(cè)的有效性，其是一種操作簡(jiǎn)單、快速、檢出率高的檢測(cè)技術(shù)，適用于大型養(yǎng)豬廠的日常防疫工作。

1.3 微波ELISA抗體檢測(cè)方法

微波ELISA 與間接ELISA 實(shí)驗(yàn)操作流程相同，只不過微波ELISA法需將血清放入微波爐中進(jìn)行溫育，進(jìn)一步加快血清的反應(yīng)速度，對(duì)間接ELISA進(jìn)行了改進(jìn)，以促進(jìn)微波ELISA抗體檢測(cè)法在大型生豬養(yǎng)殖場(chǎng)的推廣和應(yīng)用。

1.4 競(jìng)爭(zhēng)ELISA抗體檢測(cè)方法

將制備好的血清和特異酶標(biāo)單抗同時(shí)，或者是先后與包被抗原結(jié)合反應(yīng)，如果血清中含有抗體，則會(huì)起到抑制作用，阻礙包被和抗原發(fā)生反應(yīng)，依據(jù)陰陽性樣品的OD值，計(jì)算出血清特異性抗體的抑制率，進(jìn)而確定陽性血清中抗體的百分比，以及計(jì)算出結(jié)合力。競(jìng)爭(zhēng)ELISA 法在陽性血清顯色時(shí)，要比間接ELISA 法的顏色淡，OD 值也低。競(jìng)爭(zhēng)ELISA法在檢測(cè)豬瘟抗體時(shí)，沒有感染性，非常適用于沒有豬瘟的地區(qū)。

2 分離和鑒定豬瘟病毒的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

對(duì)豬瘟病毒進(jìn)行分離和鑒定是實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常用到的一種診斷技術(shù)，解剖獲取病豬含有病毒最多的器官組織，如扁桃體、淋巴結(jié)等，加入雙抗后，研磨成3%～10%的液體，使用離心設(shè)備處理，提取上層清液，再濾除其中的雜質(zhì)，并進(jìn)行除菌。另一種方法是將解剖獲取的病豬血樣，經(jīng)EDTA 處理，在-20 ℃進(jìn)行冰凍后，再放入37 ℃的溫水中融化，提取病毒放入豬睪丸細(xì)胞中，置于37 ℃恒溫容器中培養(yǎng)1 h，去除接種液，放入MEM洗滌細(xì)胞，加入生長液，進(jìn)行培養(yǎng)和觀察。如果細(xì)胞沒有病變，在48 h后取出細(xì)胞片，使用免疫酶染法進(jìn)行檢測(cè)，可以獲取培養(yǎng)后細(xì)胞中的病毒抗原，或者將分離出的病毒接種在健康的生豬體內(nèi)，觀察其感染病毒后的變化，則可以確定豬瘟的類型。分離和鑒定的實(shí)驗(yàn)方法操作復(fù)雜且成本較高，雖然診斷準(zhǔn)確，但是在病毒傳代時(shí)，極易引起病毒發(fā)生變異，導(dǎo)致病毒核酸序列分析的不準(zhǔn)確，需要研究人員密切地關(guān)注實(shí)驗(yàn)過程。

3 小 結(jié)

豬瘟又被稱為“爛腸瘟”，屬于一種高致病性、高死亡率、接觸性傳染的疾病，一般情況下該病只感染生豬，沒有發(fā)病的規(guī)律，并且可感染整個(gè)生豬群體，沒有日齡和品種上的差異。因此，該病的診斷治療難度很大，需使用有效的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)，保證豬瘟確診的準(zhǔn)確性。