謝文杰

（佳木斯市郊區(qū)獸醫(yī)衛(wèi)生防疫站，黑龍江 佳木斯 154002）

結(jié)核病是牛常見的一種慢性傳染病，尤其是奶牛，為了防止牛群發(fā)生結(jié)核病或結(jié)核病不斷散播，奶牛場每年都要定期用結(jié)核菌素對牛做變態(tài)反應(yīng)試驗[1]。因此對結(jié)核菌素敏感性進行研究有助于提高檢測方法的敏感性，減少假陰性。影響結(jié)核菌素試驗敏感性的因素很多，現(xiàn)筆者總結(jié)如下，供參考。

1 注射部位

身體的不同部位對皮內(nèi)注射的結(jié)核菌素的敏感性有相當(dāng)大的差別。對于奶牛，不同部位對結(jié)核菌素和副結(jié)核菌素的相對敏感性已測定如下：背部為1，體側(cè)上部為1.75，體側(cè)下部為2.50，頸部2.75～3.00。頸部較肛門周圍的皮膚皺襞敏感得多，并且具有反應(yīng)比較明顯、對動物能立即重復(fù)試驗和部位比較衛(wèi)生等優(yōu)點。其缺點是需要保定每一頭動物和無可見損害的反應(yīng)者比例增加。

2 結(jié)核菌素的效力

為了尋找更具有特異性和更加有效的變應(yīng)原，已用牛分枝桿菌和結(jié)核分枝桿菌制備結(jié)核菌素進行比較，后者更加有效。不過，為了獲得最強的特異性，推薦用牛分枝桿菌制備的結(jié)核菌素，并且這種結(jié)核菌素如果是一種精制蛋白質(zhì)衍化物則更好。由于精制蛋白質(zhì)衍化物具有較強的特異性和較易于標準化，現(xiàn)已開始普遍使用[2]。進行結(jié)核菌素試驗時的一個重要問題是確定要使用的結(jié)核菌素的最適量以獲得最強的特異性。比較準確地確定使用量可以排除非特異性反應(yīng)造成的許多困難。據(jù)報道，一次劑量為5 000～10 000結(jié)核菌素單位（0.1 mL結(jié)核菌素含1 mg或2 mg牛精制蛋白質(zhì)衍化物）是最合適的。

3 結(jié)核菌素試驗期間的脫敏作用

當(dāng)遇到一例可疑的反應(yīng)者，何時可重復(fù)檢查的問題因脫敏現(xiàn)象而變得復(fù)雜。當(dāng)結(jié)核菌素被吸收進入體內(nèi)時發(fā)生脫敏作用，其程度一般說來隨吸收的結(jié)核菌素的量和其他異性蛋白質(zhì)的量增加而增強。因而脫敏作用在皮下注射后較皮內(nèi)注射后更加明顯和持續(xù)時間更長。

變態(tài)反應(yīng)的特征之一是血液的白細胞分類計數(shù)發(fā)生變化，多形核白細胞增加和淋巴細胞減少，有人認為細胞計數(shù)的變化愈大脫敏作用持續(xù)的時間愈長。在一次皮內(nèi)注射后，白細胞反應(yīng)的程度是比較小的，它不是診斷結(jié)核病的一個很可靠的指標。而且脫敏作用的時期短，在數(shù)日內(nèi)動物即可重復(fù)檢查。據(jù)報道，在進行試驗后，敏感動物的白細胞反應(yīng)非常明顯，并具有診斷意義[3]。雖然尚不能肯定此試驗后的脫敏作用時間長短，但它還是會持續(xù)一段時間，盡管不超過6個月。由于白細胞反應(yīng)出現(xiàn)的時間不同（6～24 h）和其他一些因素，諸如分娩、注射腎上腺皮質(zhì)激素和引起相同反應(yīng)的傳染過程等，會使其診斷價值受到一定的影響。

脫敏現(xiàn)象的另一個方面是它能掩蓋陽性反應(yīng)。如果在脫敏時期注射結(jié)核菌素，已受感染的動物可不出現(xiàn)反應(yīng)。結(jié)核病牛在產(chǎn)犢前不久和緊接產(chǎn)犢之后經(jīng)過一段脫敏作用時期，牛產(chǎn)生假陰性反應(yīng)的多達30%，4～6周后又恢復(fù)陽性狀態(tài)。敏感性的丟失可能是由于固定的細胞抗體從皮膚移至全身，隨后進入初乳之故。飲用這種初乳的犢?？v使未被感染，但在出生后的3周內(nèi)也會產(chǎn)生陽性反應(yīng)。

4 牛的試驗程序概要

概括地說，通常使用一次皮內(nèi)注射作為常規(guī)操作，但此試驗不完全準確，可能產(chǎn)生以下缺點。

可能產(chǎn)生假陽性反應(yīng)（無肉眼可見損害的反應(yīng)者）的來源：動物被其他的分枝桿菌變應(yīng)原致敏。這些動物可能包括感染了結(jié)核分枝桿菌或禽分枝桿菌或副結(jié)核分枝桿菌的動物。由相對的非病原性分枝桿菌（例如皮膚結(jié)核桿菌）引起的具有最小的局部損害的動物也對結(jié)核菌素產(chǎn)生反應(yīng)。動物被非病原性分枝桿菌感染或者可能只是攝入了非病原性分枝桿菌，也有可能發(fā)生致敏現(xiàn)象，并對試驗產(chǎn)生反應(yīng)。例如鳥類棲居的永久性水體的非典型分枝桿菌被認為是造成南方部分地區(qū)牛只中非特異性反應(yīng)者發(fā)生率非常高的原因。

不流動的水是腐生分枝桿菌的一種最重要來源，當(dāng)出現(xiàn)非特異性反應(yīng)者時應(yīng)予以一定的注意。另外一個來源是用已被禽分枝桿菌感染的家禽的墊草喂牛。

可能產(chǎn)生假陰性反應(yīng)的來源：①結(jié)核病的晚期病例；②感染6周以內(nèi)的早期病例；③在前6周內(nèi)產(chǎn)犢的母牛；④在前8～60 d 因使用結(jié)核菌素脫敏的動物；⑤老齡牛。曾有研究機構(gòu)進行了各種方法的比較。所得的結(jié)論是：在尾根皮膚皺襞重復(fù)1次皮內(nèi)試驗是鑒別特異性與非特異性結(jié)核菌素敏感性的最有效方法。曾嚴格地規(guī)定了可允許的反應(yīng)水平，并用儀器測量獲得了最好的結(jié)果。被認為是非特異性的反應(yīng)者應(yīng)在尾根皮膚皺襞試驗的反應(yīng)出現(xiàn)以后用比較試驗在頸部再行檢查。