劉學(xué)良 汪永明 石春蘭 韓達(dá)斌 陳鵬 俞雅瓊 陳麗 劉海青

摘要：目的建立百花定喘片的薄層色譜鑒別方法。方法采用薄層色譜法，對(duì)百花定喘片中的麻黃、五味子、牡丹皮、黃芩進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果在薄層色譜中，4味藥材均能得到很好的鑒別。結(jié)論該法專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，且操作簡(jiǎn)單，可用于百花定喘片的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞： 百花定喘片;薄層色譜;鑒別

【中圖分類號(hào)】R97 ?【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ?【文章編號(hào)】1673-9026（2021）14--01

百花定喘方為中醫(yī)驗(yàn)方，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第一冊(cè)[1]。

由麻黃、五味子、牡丹皮等17味藥味組方而成，用于治療新久咳嗽，喘咳痰多，勞嗽咳血。該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有性狀和片劑的常規(guī)檢查項(xiàng)，無(wú)任何鑒別和含量測(cè)定項(xiàng)。為了提高該制劑的質(zhì)量控制水平，有效控制該藥品質(zhì)量，參考文獻(xiàn)[2～6 ] ，對(duì)制劑中的4味藥材的薄層鑒別方法進(jìn)行研究，建立了其薄層鑒別方法，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

BT224S 型電子天平（ 德國(guó)賽多利斯儀器有限公司）;KQ5200B 型超聲機(jī)（ 昆山超聲儀器有限公司）;CAMA-GREPROSTAR3型薄層數(shù)碼成像系統(tǒng)（ 瑞士）;TDL-5-A 型臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。丹皮酚對(duì)照品（ 批號(hào)：110708-201407），鹽酸麻黃堿（ 批號(hào)：171241-201007），五味子對(duì)照藥材（批號(hào)：120922-201610）五味子甲素（ 批號(hào)：110764-20100），五味子乙素（ 批號(hào)：110765-201311），黃芩苷對(duì)照品（ 批號(hào)：110715-201318），，均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院;百花定喘片（天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司隆順榕制藥廠，批號(hào)：CD36031、CE36033、DD36035;廣東萬(wàn)方制藥有限公司，批號(hào)：141201、150201、150202）;薄層層析硅膠G 板（ 青島海洋化工廠分廠）;水為超純水;其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1麻黃

取本品20片，研細(xì)，加濃氨試液1ml，加氯仿25ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)勇确?ml使溶解，作為供試品溶液。取鹽酸麻黃堿對(duì)照品， 加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另取缺麻黃的陰性樣品，同法制成缺麻黃的陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2020年版四部通則 0502）試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨試液（40：10：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果見圖1。

1、鹽酸麻黃堿對(duì)照品 ? 2、3、4、6、7、8百花定喘片樣品（批號(hào)CD36031、CE36033、DD36035、141201、150201、150202） ?5、麻黃陰性對(duì)照

2.2五味子

取本品20片，研細(xì)，加氯仿25ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)勇确?ml使溶解，作為供試品溶液。取五味子對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。取五味子甲素、五味子乙素對(duì)照品， 加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另取缺五味子的陰性樣品，同法制成缺五味子的陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2020年版四部通則 0502）試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30℃～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果見圖2。

1-6、百花定喘片樣品（批號(hào)CD36031、CE36033、DD36035、141201、150201、150202）7、五味子陰性對(duì)照 ?8、五味子對(duì)照藥材 ?8、五味子甲素對(duì)照品 ?9、五味子乙素對(duì)照品

2.3 ?牡丹皮

取本品20片，研細(xì)，加乙醇25ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?0ml乙醚使溶解，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)颖?ml使溶解，作為供試品溶液。取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每1ml含5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另取缺牡丹皮的陰性樣品，同法制成缺牡丹皮的陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2020年版四部通則 0502）試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%的三氯化鐵乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果見圖3。

1、牡丹皮陰性對(duì)照 ? 2、丹皮酚對(duì)照品3-8、百花定喘片樣品（批號(hào)CD36031、CE36033、DD36035、141201、150201、150202）

2.4 黃芩

取本品20片，研細(xì)，加甲醇25ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)，濾液水浴蒸干，殘?jiān)铀?0ml攪拌使溶解，加稀鹽酸調(diào)pH值至2，離心，收集沉淀，加水5ml水充分混勻，離心，收集沉淀，水浴揮干殘留液體，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。取黃芩苷對(duì)照品， 加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另取缺黃芩的陰性樣品，同法制成缺黃芩的陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2020年版四部通則 0502）試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl（百花定喘丸供試品溶液8μl），分別點(diǎn)于1%氫氧化鈉制備的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-水（8：1：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇試液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果見圖4。

1-6、百花定喘片樣品（批號(hào)CD36031、CE36033、DD36035、141201、150201、150202）7、8、黃芩苷對(duì)照品 ? 9、黃芩陰性對(duì)照

3 ?結(jié)果與討論

按上述建立方法分別對(duì)2家生產(chǎn)企業(yè)的6批次樣品進(jìn)行牡丹皮、麻黃、五味子、黃芩4味藥材的TLC分析測(cè)定，6批次百花定喘片均檢出相應(yīng)斑點(diǎn)。綜合比較，發(fā)現(xiàn)同一廠家不同批號(hào)的樣品差異不大，不同企業(yè)之間的樣品存在斑點(diǎn)大小及顏色深淺不一或微弱檢出的問(wèn)題，說(shuō)明企業(yè)對(duì)原料藥材質(zhì)量把控不嚴(yán)。

經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)牡丹皮、黃芩鑒別項(xiàng)中提取相應(yīng)的對(duì)照藥材溶液點(diǎn)樣后，色譜圖中只有一個(gè)主斑點(diǎn)，為其特征成分丹皮酚、黃芩苷，而麻黃、五味子鑒別項(xiàng)中提取相應(yīng)的對(duì)照藥材溶液點(diǎn)樣后，對(duì)照藥材中的部分斑點(diǎn)與樣品不能全部對(duì)應(yīng)，所以百花定喘片中4味藥材的薄層色譜鑒別僅以其相應(yīng)的特征成分為對(duì)照進(jìn)行鑒別，方法簡(jiǎn)單，陰性對(duì)照無(wú)干擾，紫外光下斑點(diǎn)清晰，結(jié)果較好。曾對(duì)制劑中的其他藥味采用不同的提取方法和展開劑、顯色劑進(jìn)行薄層色譜鑒別，其陰性對(duì)照干擾較大，試驗(yàn)未獲成功。

建立的百花定喘片處方中麻黃等4味藥材的薄層鑒別方法簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，專屬性強(qiáng)，斑點(diǎn)清晰，能提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)藥材的可控度，保證生產(chǎn)企業(yè)對(duì)藥材投料，增強(qiáng)了現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)藥品有效性的控制，可用于百花定喘片的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)：

[1] 衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑：第十三冊(cè)[S].1995

[2] 陳阿麗，楊永霞，梁生旺，等.百花定喘片中藥材的鑒別及其黃芩苷、橙皮苷的測(cè)定[J]. 華西藥學(xué)雜志，2014， 29（3） ∶318-320.

[3] 侯小濤， 李耀華， 盧小芳.復(fù)方百部止咳沖劑中黃芩和陳皮的鑒別及黃芩苷的含量測(cè)定[J]. 華西藥學(xué)雜志，2005， 20（2）：165-167

[4] 姚琳，孫妍，譚思思，等.瓜桔止嗽丸薄層鑒別及桔梗皂苷D 的含量測(cè)定

[5] 雷成康，郭玲. 麻黃止嗽膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立[J].中國(guó)藥師，2016，19（4）：681-684.

[6] 許廣華，王虎，李小偉，等.芪精愈消膠囊薄層鑒別及含量測(cè)定研究[J].安徽醫(yī)藥，2016，20（4）：660-663.

基金項(xiàng)目：青海省基礎(chǔ)研究項(xiàng)目（編號(hào)2020-ZJ747）

作者簡(jiǎn)介：劉學(xué)良（1980—），男，副主任藥師，主要從事藥品審評(píng)工作。