曹業(yè)凡 汪來(lái)發(fā) 王曦茁 范結(jié)紅

(1.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院森林生態(tài)環(huán)境與保護(hù)研究所 國(guó)家林業(yè)和草原局森林保護(hù)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 北京 100091； 2.安徽省望江縣林業(yè)局 望江 246200)

長(zhǎng)白落葉松(Larixolgensis)是我國(guó)東北部山地主要用材樹(shù)種，在遼寧省部分地區(qū)分布廣泛。生長(zhǎng)速度快，木材材質(zhì)好，干型通直，耐旱性與抗?jié)承詮?qiáng)，對(duì)地方的水源涵養(yǎng)、水土保持以及生態(tài)系統(tǒng)保護(hù)具有重大作用(聶大光， 2015)，常被用于工程建設(shè)與工業(yè)造紙(胡曉晴， 2016)。截至2000年，長(zhǎng)白落葉松占人工造林總面積10%，蓄積量占我國(guó)木材總蓄積量7.8%(Pengetal., 2009)。因此，長(zhǎng)白落葉松對(duì)我國(guó)北方地區(qū)林業(yè)建設(shè)意義重大。

松材線蟲(chóng)病(pine wilt disease)，是一種以松材線蟲(chóng)(Bursaphelenchusxylophilus)為病原，墨天牛屬(Monochamus)昆蟲(chóng)為媒介的系統(tǒng)性病害(葉建仁， 2010； 2019； Futai， 2013)，主要危害松科植物，目前該病害已蔓延擴(kuò)散至中國(guó)、日本和韓國(guó)等多個(gè)國(guó)家(Wangetal.， 2010； Abelleiraetal.， 2011； Shinyaetal.， 2013)。據(jù)國(guó)家林業(yè)和草原局2019年4號(hào)和14號(hào)公告統(tǒng)計(jì)，目前我國(guó)大陸地區(qū)松材線蟲(chóng)病縣級(jí)疫區(qū)數(shù)為634個(gè)，新增縣級(jí)疫區(qū)327個(gè)，且病情由南向北不斷蔓延擴(kuò)散，形勢(shì)嚴(yán)峻。目前松材線蟲(chóng)所危害的植物寄主大部分為松屬(Pinus)，因此關(guān)于松材線蟲(chóng)對(duì)黑松(P.thunbergii)、赤松(P.densiflora)與馬尾松(P.massoniana)及其他松屬植物致病性的研究較多(金鋼等， 2007； 朱麗華等， 2017； 林麗等， 2017； Maeharaetal., 2011； Akibaetal.， 2012)，關(guān)于松材線蟲(chóng)對(duì)落葉松屬樹(shù)種的致病性研究較少。已有研究表明，松材線蟲(chóng)對(duì)美國(guó)西部落葉松(L.occidentalis)、日本落葉松(L.kaempferi)、歐洲落葉松(L.decidua)和美洲落葉松(L.laricina)均具有致病性(Futaietal.， 1989； Wingfield， 1982； Mamiyaetal.， 2009； 楊寶君等， 1993)。目前，在遼寧省枯萎的長(zhǎng)白落葉松中已分離到松材線蟲(chóng)(于海英等， 2019)，但關(guān)于松材線蟲(chóng)對(duì)長(zhǎng)白落葉松的致病性研究迄今沒(méi)有報(bào)道，其對(duì)長(zhǎng)白落葉松的致病性尚未進(jìn)行科赫氏法則驗(yàn)證。為明確松材線蟲(chóng)對(duì)長(zhǎng)白落葉松的致病性，本研究以2年生長(zhǎng)白落葉松幼苗為材料，接種不同株系松材線蟲(chóng)，研究松材線蟲(chóng)對(duì)長(zhǎng)白落葉松的致病過(guò)程、松材線蟲(chóng)在長(zhǎng)白落葉松幼苗內(nèi)的移動(dòng)能力以及超氧化物歧化酶(SOD)活性變化，明確松材線蟲(chóng)對(duì)長(zhǎng)白落葉松的致病性，為長(zhǎng)白落葉松松材線蟲(chóng)病防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

松材線蟲(chóng)株系號(hào)及其來(lái)源： 1)QH-1，采自遼寧省清原縣的感病紅松(P.koraiensis)； 2)NM-1，采自江蘇省南京市的感病馬尾松； 3)CM-1，采自重慶市的感病馬尾松。按常規(guī)方法分離純化和培養(yǎng)松材線蟲(chóng)。

幼苗為2年生長(zhǎng)白落葉松實(shí)生苗，培養(yǎng)于中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院內(nèi)苗圃地，備用。

1.2 不同株系松材線蟲(chóng)對(duì)長(zhǎng)白落葉松致病性測(cè)定

2年生長(zhǎng)白落葉松實(shí)生苗的致病性測(cè)定采用皮接法，每株系接種長(zhǎng)白落葉松苗10株，接種量為每株2 000條，以無(wú)菌水接種為對(duì)照。接種后，于苗圃地內(nèi)進(jìn)行常規(guī)管理，持續(xù)觀察接種幼苗發(fā)病情況，統(tǒng)計(jì)松苗發(fā)病率。接種35天后，統(tǒng)計(jì)各株系松苗發(fā)病率，感病指數(shù)計(jì)算參照徐福元等(1994)并稍作改進(jìn)。對(duì)所有植株分別進(jìn)行線蟲(chóng)分離與計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)。

發(fā)病率=發(fā)病株數(shù)/接種株數(shù)×100%；

感病指數(shù)=∑(各級(jí)株數(shù)×各級(jí)代表數(shù)值)×100/調(diào)查總株數(shù)×發(fā)病最重級(jí)的代表數(shù)值。

1.2 不同株系松材線蟲(chóng)的移動(dòng)能力測(cè)定

接種方法同1.1。接種完成后，每隔1、2、4、7、10、15、25天進(jìn)行取樣。 將接種幼苗整株拔出，用流水輕輕沖洗干凈，以接種部位為參照，用快刀片截取材料，自接種部位上、下1.5 cm處開(kāi)始，每隔1 cm切取1 cm莖段用于分析樣品將截取莖段取下放入10 ml離心管中，加入10 mL水。在室溫下靜置一天后，以1 500 r·min-1的轉(zhuǎn)速離心3 min，吸去上清液，經(jīng)鏡檢統(tǒng)計(jì)不同時(shí)間段內(nèi)不同部位的松材線蟲(chóng)的數(shù)量，以“+”表示接種點(diǎn)上方，“-”表示接種點(diǎn)下方。

1.3 SOD活性測(cè)定

接種方法參照1.1，依次于接種后1～7天定時(shí)進(jìn)行葉片取樣，取樣位置為接種點(diǎn)附近。取樣后將樣品置于液氮預(yù)冷后，存于-80 ℃冰箱備用。SOD活性測(cè)定(WST-8法)試劑盒由蘇州科銘生物技術(shù)有限公司提供，測(cè)定方法參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.4 接種后長(zhǎng)白落葉松橫切面變化情況觀察

接種方法參照1.1。接種完成后，每隔1、2、4、7、10、25天于接種點(diǎn)下方1.5 cm處截取莖段，在解剖鏡下觀察莖段橫截面變化，拍照并記錄。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

將數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同株系松材線蟲(chóng)對(duì)長(zhǎng)白落葉松的致病性

接種試驗(yàn)表明，QH-1、NM-1與CM-1株系松材線蟲(chóng)均能使2年生長(zhǎng)白落葉松幼苗枯萎發(fā)病(表1)。感病初期，接種點(diǎn)附近針葉出現(xiàn)失水萎蔫癥狀；感病中期，整株針葉褪綠變淺色，但并未變黃； 感病后期，整株針葉枯萎變紅，當(dāng)年生嫩枝開(kāi)始掉落，此時(shí)幼苗已枯萎死亡。

病程記錄表明，不同株系松材線蟲(chóng)接種長(zhǎng)白落葉松后的首次發(fā)病時(shí)間與致病進(jìn)程存在明顯差異。接種QH-1的幼苗第10天時(shí)針葉開(kāi)始出現(xiàn)失水萎蔫，第15天時(shí)出現(xiàn)針葉褪綠，第20天時(shí)針葉枯萎變紅； 而接種NM-1與CM-1的幼苗于15天左右才開(kāi)始出現(xiàn)早期發(fā)病癥狀，25天時(shí)針葉出現(xiàn)枯萎變紅。發(fā)病率統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，接種5周后，接種QH-1的長(zhǎng)白落葉松幼苗發(fā)病率為100%，接種NM-1與CM-1的發(fā)病率分別為70%與60%。感病指數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，接種QH-1株系松材線蟲(chóng)2年生長(zhǎng)白落葉松幼苗感病指數(shù)為100，接種NM-1與CM-1的長(zhǎng)白落葉松幼苗感病指數(shù)分別為43.3與40。

接種35天后萎蔫植株中的再分離線蟲(chóng)量表明(表1)，在接種QH-1、NM-1與CM-1后枯萎發(fā)病的長(zhǎng)白落葉松幼苗內(nèi)均能分離到松材線蟲(chóng)，在接種QH-1后枯萎的長(zhǎng)白落葉松幼苗平均每株分離的線蟲(chóng)量為(2 3457±2 862)條，而接種NM-1與CM-1后枯萎的長(zhǎng)白落葉松幼苗平均每株分離的線蟲(chóng)量分別為(14 090±2 190)條和(15 857±2 079)條，數(shù)量差異顯著(P<0.01)，結(jié)合病害進(jìn)程記錄可知，線蟲(chóng)再分離數(shù)量越大，長(zhǎng)白落葉松幼苗發(fā)病癥狀越嚴(yán)重。對(duì)接種NM-1與CM-1后并未枯萎發(fā)病的2株長(zhǎng)白落葉松幼苗進(jìn)行線蟲(chóng)分離，其中接種NM-1后的未發(fā)病幼苗所含線蟲(chóng)分別為32條和0條，接種CM-1后的未發(fā)病幼苗所含線蟲(chóng)分別為24條和103條。

2.2 不同株系松材線蟲(chóng)的移動(dòng)能力與癥狀變化

不同株系松材線蟲(chóng)在接種幼苗不同莖段內(nèi)的分布數(shù)量隨接種時(shí)間變化而增加，發(fā)病癥狀隨線蟲(chóng)數(shù)量增加而加重(表2)。

將QH-1接種長(zhǎng)白落葉松幼苗后，1天時(shí)接種點(diǎn)上方1～2 cm處分離到少量線蟲(chóng)，接種點(diǎn)下方線蟲(chóng)已移動(dòng)至5 cm處，此時(shí)接種幼苗無(wú)明顯癥狀(圖1A)。4天時(shí)在接種點(diǎn)上方4～5 cm處分離到少量線蟲(chóng)，接種點(diǎn)下方8 cm分離到少量線蟲(chóng)，此時(shí)接種幼苗的當(dāng)年嫩枝出現(xiàn)部分失水萎蔫癥狀(圖1B)。7天時(shí)線蟲(chóng)已移動(dòng)至接種點(diǎn)上方8 cm處，接種點(diǎn)下方線蟲(chóng)數(shù)量增加，此時(shí)接種幼苗的接種點(diǎn)附近針葉開(kāi)始萎蔫，但并未褪綠變黃。10天時(shí)接種點(diǎn)上方與下方線蟲(chóng)數(shù)量已超過(guò)1 000，梢頭及主干最低處均分離出少量線蟲(chóng)，接種幼苗整株萎蔫，針葉褪綠變淺，頂梢及部分當(dāng)年嫩枝枯萎變褐(圖1C)。15天時(shí)接種點(diǎn)附近線蟲(chóng)總數(shù)量已超過(guò)接種量，接種幼苗萎蔫癥狀加重，枯萎針葉開(kāi)始脫落，整株當(dāng)年嫩枝枯萎變褐(圖1D)。20天時(shí)線蟲(chóng)數(shù)量開(kāi)始減少，此時(shí)接種幼苗完全死亡，整株針葉變紅并極易脫落，所有嫩枝萎蔫加重并開(kāi)始脫落(圖1E)。25天時(shí)線蟲(chóng)數(shù)量再次減少，接種點(diǎn)上、下方僅有極少量線蟲(chóng)分布，接種幼苗與20天時(shí)相比無(wú)明顯變化。

將CM-1接種長(zhǎng)白落葉松幼苗后，1天時(shí)接種點(diǎn)上方無(wú)線蟲(chóng)分離，接種點(diǎn)下方線蟲(chóng)已移動(dòng)至2 cm處，線蟲(chóng)數(shù)量極少，此時(shí)接種幼苗無(wú)明顯癥狀(圖1A)。2天時(shí)在接種點(diǎn)上方仍然無(wú)線蟲(chóng)分布，接種點(diǎn)下方線蟲(chóng)未向下移動(dòng)擴(kuò)散，接種幼苗無(wú)明顯癥狀。4天時(shí)在接種點(diǎn)上方2 cm處有線蟲(chóng)分布，接種點(diǎn)下方3 cm處有線蟲(chóng)分布，接種幼苗無(wú)明顯癥狀。7天時(shí)線蟲(chóng)已移動(dòng)至接種點(diǎn)上方3 cm處，接種點(diǎn)下方線蟲(chóng)數(shù)量增加，并移動(dòng)至4 cm處，部分接種幼苗的當(dāng)年嫩枝出現(xiàn)失水萎蔫癥狀，針葉無(wú)明顯變化(圖1B)。10天時(shí)接種點(diǎn)附近線蟲(chóng)數(shù)量開(kāi)始增加，此時(shí)接種幼苗頂梢及部分當(dāng)年嫩枝出現(xiàn)失水萎蔫癥狀，但并未枯萎，針葉無(wú)明顯變化。15天時(shí)線蟲(chóng)開(kāi)始進(jìn)一步移動(dòng)擴(kuò)散，接種點(diǎn)上方7 cm與下方8 cm處均可分離到少量線蟲(chóng)，接種幼苗接種點(diǎn)附近針葉出現(xiàn)萎蔫癥狀，頂梢及部分當(dāng)年嫩枝萎蔫加重(圖1C)。20天時(shí)接種點(diǎn)上方與下方線蟲(chóng)數(shù)量超過(guò)1 000，梢頭及主干最低處均分離出少量線蟲(chóng)，此時(shí)接種幼苗整株萎蔫，頂梢及部分當(dāng)年嫩枝枯萎程度加重(圖1D)。25天時(shí)線蟲(chóng)數(shù)量已超過(guò)接種量，接種幼苗萎蔫癥狀加重，枯萎針葉開(kāi)始脫落，整株當(dāng)年嫩枝枯萎變褐(圖1E)。

NM-1接種長(zhǎng)白落葉松幼苗后，其前期1～7天擴(kuò)散分布趨勢(shì)和外部形態(tài)變化與接種CM-1的長(zhǎng)白落葉松幼苗基本一致，線蟲(chóng)數(shù)量較少，無(wú)明顯癥狀(圖1A)。10天時(shí)線蟲(chóng)移動(dòng)至接種點(diǎn)上方5 cm與下方6 cm處，接種幼苗部分嫩枝出現(xiàn)萎蔫癥狀，針葉無(wú)明顯變化(圖1B)。15天時(shí)線蟲(chóng)移動(dòng)擴(kuò)散至樹(shù)體遠(yuǎn)端，接種點(diǎn)上方8 cm與下方8 cm處均可分離到少量線蟲(chóng)，接種幼苗接種點(diǎn)附近針葉出現(xiàn)萎蔫癥狀，頂梢及部分當(dāng)年嫩枝萎蔫加重(圖1C)。20～25天內(nèi)接種幼苗的枯萎癥狀加重，針葉褪綠變紅，整株當(dāng)年嫩枝枯萎變褐，25天時(shí)線蟲(chóng)數(shù)量已超過(guò)接種量(圖1D)。

圖1 接種松材線蟲(chóng)后的長(zhǎng)白落葉松外部病狀Fig. 1 External symptoms of the L. olgensis after inoculated with B. xylophilusA: 無(wú)病癥No symptoms； B:第1階段The 1 phase； C: 第2階段The 2 phase； D: 第3階段The 3 phase； E: 第4階段The 4 phase.

2.3 接種后長(zhǎng)白落葉松SOD活性變化結(jié)果

長(zhǎng)白落葉松在接種不同株系松材線蟲(chóng)后，SOD活性均發(fā)生變化，但變化幅度存在部分差異。SOD活性變化結(jié)果表明，接種1天后QH-1處理組幼苗SOD活性出現(xiàn)持續(xù)下降(圖2)，下降百分比為36.6%，NM-1與CM-1處理組無(wú)明顯變化。隨后2～4天內(nèi)QH-1處理組幼苗維持較低SOD活性，而接種NM-1與CM-1株系松材線蟲(chóng)的長(zhǎng)白落葉松幼苗SOD活性無(wú)明顯變化。接種第5天后除對(duì)照組外，其他處理組幼苗SOD活性開(kāi)始大幅度上升，直至第6天后SOD活性達(dá)到峰值，此時(shí)QH-1、NM-1與CM-1處理組幼苗SOD活性與CK組相比分別增長(zhǎng)51.6%、38.1%與27.1%。接種第7天后，QH-1、NM-1與CM-1處理組幼苗SOD活性開(kāi)始下降，下降幅度依次為63.9%、23.6%與10.3%。因此，長(zhǎng)白落葉松幼苗接種QM-1、NM-1與CM-1株系線蟲(chóng)后SOD活性變化幅度存在明顯差異。

圖2 接種不同株系松材線蟲(chóng)后的長(zhǎng)白落葉松SOD活性變化Fig. 2 Activity changes of SOD in L. olgensis after inoculated with three different isolates of pinewood nematode

2.4 接種后長(zhǎng)白落葉松橫切面變化

接種QH-1后1～7天，長(zhǎng)白落葉松幼苗的橫截面無(wú)明顯變化，此時(shí)髓部變化與松脂分泌量與對(duì)照組相同(圖3A)。接種10天后，長(zhǎng)白落葉松幼苗髓部出現(xiàn)變化，髓心變褐并出現(xiàn)空洞，松脂道松脂分泌量減少(圖3B上)。接種25天后，髓心褐變加重，空洞化程度加劇，髓部已被完全破壞，樹(shù)脂道無(wú)樹(shù)脂分泌，此時(shí)幼苗整株已死亡(圖3B下)。

接種NH-1后長(zhǎng)白落葉松幼苗的橫截面髓部與松脂分泌量在前期與對(duì)照組相同，接種10天后，長(zhǎng)白落葉松幼苗髓部出現(xiàn)變化，髓心變褐并出現(xiàn)小空洞，松脂道松脂分泌量減少，與接種QH-1的長(zhǎng)白落葉松幼苗相比癥狀較輕(圖3C上)。接種25天后，髓心褐變加重，部分髓部已被破壞，樹(shù)脂道無(wú)樹(shù)脂分泌，此時(shí)幼苗整株已死亡(圖3C下)。

表1 長(zhǎng)白落葉松幼苗接種松材線蟲(chóng)35天后的發(fā)病率、感病指數(shù)與再分離線蟲(chóng)量①Tab.1 Morbidity and disease-infected index of 2-year-old L. olgensis seedlings inoculated with pine wood nematode and population densities of nematodes(35 d after inoculation)

接種CM-1后長(zhǎng)白落葉松幼苗的橫截面髓部與松脂分泌量在前期與對(duì)照組相同，接種10天后長(zhǎng)白落葉松幼苗髓部出現(xiàn)變化，髓心變褐并出現(xiàn)空洞，松脂道松脂分泌量減少，與接種NM-1的長(zhǎng)白落葉松幼苗相比癥狀較重(圖3D上)。接種25天后，髓心部分已被破壞，樹(shù)脂道無(wú)樹(shù)脂分泌，此時(shí)幼苗整株已死亡(圖3D下)。

圖3 接種不同株系松材線蟲(chóng)后的長(zhǎng)白落葉松橫切面變化(接種點(diǎn)以下1.5 cm)Fig. 3 The cross section of L. olgensis 1.5 cm downwards distant from inoculation dot with three different isolates of pinewood nematodeA：無(wú)菌水對(duì)照(接種10天后)；B：QH-1株系(接種10天后)； C：NM-1株系(接種10天后)； D：CM-1株系(接種10天后)；E：無(wú)菌水對(duì)照(接種25天后)；F：QH-1株系(接種25天后)；G：NM-1株系(接種25天后)； H：CM-1株系(接種25天后)。圖中比例尺為500 μm。A：CK(sterile water)(10 d after inoculation); B：QH-1 isolates (10 d after inoculation); C：NM-1 isolates (10 d after inoculation); D：CM-1isolates (10 d after inoculation)；E：CK(sterile water)(25 d after inoculation)；F：QH-1 isolates (25 d after inoculation)；G：NM-1 isolates (25 d after inoculation)； H：CM-1 isolates (25 d after inoculation)。Scale in the picture is 500 μm.

3 討論

松材線蟲(chóng)的寄主植物分布廣泛，包括自然感病寄主與人工接種感病寄主在內(nèi)共計(jì)106種松科植物，其中大部分屬于松屬，落葉松屬感病寄主較少(葉建仁， 2010； 王曦茁等， 2018； 于海英， 2019)。近年來(lái)松材線蟲(chóng)病在我國(guó)逐漸由南向北傳播蔓延，已有從紅松枯木內(nèi)發(fā)現(xiàn)云杉花墨天牛(M.saltuarius)與松材線蟲(chóng)(于海英等， 2018； 潘龍等， 2019)的報(bào)道。相關(guān)研究表明云杉花墨天牛對(duì)日本落葉松具有一定取食傾向(潘佳亮， 2019)，但尚無(wú)媒介昆蟲(chóng)對(duì)長(zhǎng)白落葉松的取食傾向研究的報(bào)道。因此，關(guān)于長(zhǎng)白落葉松松材線蟲(chóng)病的傳播途徑，還需進(jìn)一步研究。

表2 不同株系松材線蟲(chóng)接種長(zhǎng)白落葉松幼苗后線蟲(chóng)的分布與數(shù)量Tab.2 The distribution and number of nematode in L. olgensis seedlings after inoculated with three isolates of pinewood nematode

本研究通過(guò)對(duì)2年生長(zhǎng)白落葉松幼苗進(jìn)行不同株系松材線蟲(chóng)的接種試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)不同株系松材線蟲(chóng)對(duì)長(zhǎng)白落葉松的致病性存在明顯差異，這可能與松材線蟲(chóng)的地理來(lái)源、寄主植物、寄主樹(shù)齡與飼喂菌株均有一定關(guān)系(胡凱基等， 1994； 張治宇等， 2002； 楊寶君等， 1993； 瞿紅葉等， 2009)。本研究中所選松材線蟲(chóng)其地理來(lái)源與寄主植物分別為清原-紅松、南京-馬尾松與重慶-馬尾松，其他條件相同，因此本研究中不同株系的松材線蟲(chóng)對(duì)長(zhǎng)白落葉松的致病性存在差異，可能與地理分布與寄主植物有關(guān)，而其致病性差異的產(chǎn)生機(jī)制，有待進(jìn)一步研究。

不同致病力松材線蟲(chóng)之間的生物學(xué)特性也存在差異，主要反映在繁殖力與移動(dòng)能力(Ichiharaetal.， 2000； Kiyoharaetal.， 1990)，一般認(rèn)為強(qiáng)致病力株系的松材線蟲(chóng)其繁殖力、移動(dòng)能力均高于弱致病力株系，因此強(qiáng)致病力株系能夠更快導(dǎo)致寄主植物發(fā)病并枯萎死亡，但也有部分學(xué)者認(rèn)為松材線蟲(chóng)的繁殖力與移動(dòng)能力與其致病力無(wú)明顯關(guān)系(Togashietal.， 2003)。本研究中QH-1對(duì)長(zhǎng)白落葉松的致病性最強(qiáng)，移動(dòng)能力與繁殖能力最高，且接種后發(fā)病時(shí)間最快，CM-1與NM-1對(duì)長(zhǎng)白落葉松也具有致病性，但移動(dòng)能力與繁殖能力低于QH-1，接種后發(fā)病時(shí)間比QH-1慢，因此本研究中松材線蟲(chóng)對(duì)長(zhǎng)白落葉松的致病性與移動(dòng)能力與繁殖能力呈正相關(guān)性。

逆境能夠誘導(dǎo)植株產(chǎn)生SOD、POD與CAT等抗氧化酶(Bowler， 1992)，從而起到保護(hù)作用。謝婉鳳等(2018)通過(guò)接種試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)隨著病程加重，接種植株SOD活性呈先升高后下降的趨勢(shì)，這與陳玉惠等(2002)研究結(jié)論相似。徐華潮等(2012)通過(guò)對(duì)20年生自然感病馬尾松與黑松進(jìn)行SOD活性變化研究，發(fā)現(xiàn)隨著病程加重，SOD活性持續(xù)下降。本研究中接種QH-1的長(zhǎng)白落葉松幼苗SOD活性在接種后1～4天呈下降趨勢(shì)，此時(shí)CM-1與NM-1處理組SOD活性無(wú)明顯變化，表明發(fā)病前期QH-1對(duì)長(zhǎng)白落葉松內(nèi)部細(xì)胞破壞更嚴(yán)重，因此SOD活性下降。接種后5～7天，所有處理組SOD活性均呈先升高后下降的變化趨勢(shì)，但變化幅度存在明顯差異，其中QH-1處理組變化幅度最大，表明QH-1對(duì)長(zhǎng)白落葉松內(nèi)部生理活動(dòng)破壞最為嚴(yán)重。

本研究通過(guò)對(duì)接種CM-1與NM-1但并未表現(xiàn)病癥的幼苗進(jìn)行線蟲(chóng)分離，發(fā)現(xiàn)這些幼苗中存在少量線蟲(chóng)，這與張治宇等(2002)和林麗等(2017)研究結(jié)果相符，表明部分接種植株對(duì)CM-1與NM-1可能存在一定抗性，因此少量線蟲(chóng)無(wú)法導(dǎo)致接種植株萎蔫發(fā)病。如果帶蟲(chóng)植株樹(shù)勢(shì)衰弱導(dǎo)致其抗病性降低，就有可能使得線蟲(chóng)繼續(xù)繁殖侵染，導(dǎo)致松樹(shù)萎蔫死亡。因此攜帶松材線蟲(chóng)未表現(xiàn)癥狀的植株可能會(huì)傳播松材線蟲(chóng)病，該病害傳播因素必須引起重視。

4 結(jié)論

本研究以2年生長(zhǎng)白落葉松幼苗為材料，通過(guò)接種不同株系的松材線蟲(chóng)，證明QH-1、NM-1與CM-1對(duì)長(zhǎng)白落葉松均有致病性，其中QH-1致病性最強(qiáng)，NM-1與CM-1無(wú)明顯差異，至于松材線蟲(chóng)對(duì)2年生和其他齡級(jí)長(zhǎng)白落葉松的致病性有何差異，有待進(jìn)一步研究。