劉立斌，張雷，吳妍，李影，王培蕊

1北京市大興區(qū)人民醫(yī)院，北京 102600；2北京大學(xué)首鋼醫(yī)院

急性缺血性腦卒中(AIS)是一種常見急癥，在全球范圍內(nèi)有較高的致殘率和致死率[1]。AIS發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前普遍認(rèn)為免疫因素和炎癥反應(yīng)在AIS發(fā)生發(fā)展中起重要作用[2]。補(bǔ)體是一組活化后具有酶活性的蛋白質(zhì)，存在于人體的血清和組織液中，是抗體發(fā)揮溶細(xì)胞作用的必要補(bǔ)充條件，同時(shí)，補(bǔ)體亦可通過介導(dǎo)機(jī)體炎癥導(dǎo)致組織損傷[3]。既往已有研究發(fā)現(xiàn)[4]，缺血再灌注損傷大鼠腦組織中補(bǔ)體C1q與C3c沉積。視錐蛋白樣蛋白-1(VILIP-1)是一種鈣傳導(dǎo)蛋白，其通過神經(jīng)元的鈣依賴型信號(hào)系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)[5]。研究[6]發(fā)現(xiàn)，VILIP-1在腦卒中患者血清中有升高現(xiàn)象，說明VILIP-1在腦卒中的病理過程中起到一定作用。本研究檢測(cè)AIS患者血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平，并探討其與患者病情的關(guān)系，以期為臨床AIS的診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年4月～2019年4月北京市大興區(qū)人民醫(yī)院收治的98例AIS患者作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均經(jīng)CT或MRI檢查證實(shí)為AIS，且符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》[7]；②年齡≥50歲；③發(fā)病至入院時(shí)間≤48 h；④AIS均為首次發(fā)作。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并免疫系統(tǒng)性疾病者；②合并急、慢性感染者；③合并心、肝、腎功能障礙者；④合并惡性腫瘤者；⑤出血性腦卒中；⑥入院前服用過可能影響本研究結(jié)果的藥物。研究組男55例、女43例，年齡50～78(63.49±5.14)歲，體質(zhì)量指數(shù)(BMI)22.3～26.9(24.67±0.75)kg/m2；合并癥：糖尿病21例，高血壓32例。另選取同期于北京市大興區(qū)人民醫(yī)院體檢健康的100例志愿者作為對(duì)照組，其中男58例、女42例，年齡53～77(63.04±5.32)歲，BMI 22.6～27.2(24.51±0.90)kg/m2。兩組性別、年齡、BMI比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。所有研究對(duì)象對(duì)本研究知情并簽署知情同意書。本研究經(jīng)北京市大興區(qū)人民醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)進(jìn)行。

1.2 血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1檢測(cè) 對(duì)照組于體檢當(dāng)日，研究組于入院時(shí)，分別采集兩組空腹靜脈血5 mL，3 000 r/min離心6 min,分離血清，離心半徑6 cm，將血清置于-20 ℃保存待測(cè)。采用西門子ADVIA 2400全自動(dòng)生化分析儀，通過免疫透射比濁法測(cè)定血清補(bǔ)體C1q水平，試劑盒由上海北加生化試劑有限公司提供；采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清VILIP-1水平，操作均嚴(yán)格按照試劑盒(上海西唐生物科技有限公司)說明書進(jìn)行。

1.3 神經(jīng)功能缺損程度評(píng)價(jià) 研究組入選對(duì)象入組后，采用美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)評(píng)分[8]評(píng)價(jià)神經(jīng)功能缺損程度。總分42分，分?jǐn)?shù)越高提示神經(jīng)功能缺損越嚴(yán)重。根據(jù)NIHSS評(píng)分范圍分為輕度缺損(NIHSS評(píng)分<7分)、中度缺損(NIHSS評(píng)分7～15分)、重度缺損(NIHSS評(píng)分>15分)。

1.4 腦梗死面積測(cè)算 研究組入選對(duì)象入組后，采用Lightspeed VCT 64排螺旋CT(美國GE公司)進(jìn)行頭顱CT檢測(cè)，采用機(jī)械系統(tǒng)動(dòng)力學(xué)自動(dòng)分析方法測(cè)量患者的腦梗死面積，根據(jù)梗死灶大小分為小面積腦梗死(直徑≤1.5 cm)、中面積腦梗死(1.5 cm<直徑≤4 cm)、大面積腦梗死(直徑>4 cm)[9]。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平比較 研究組與對(duì)照組血清補(bǔ)體C1q水平分別為(174.18±22.48)、(161.22±21.46)mg/L，VILIP-1水平分別為(8.02±2.24)、(0.79±0.32)μg/L，研究組血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平高于對(duì)照組(t分別為4.150、31.947，P均=0.000)。

2.2 不同神經(jīng)功能缺損程度患者血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平比較 研究組輕度缺損34例，中度缺損35例，重度缺損29例。輕度缺損、中度缺損、重度缺損者血清補(bǔ)體C1q水平分別為(163.42±15.54)、(176.29±14.93)、(184.25±16.74)mg/L，VILIP-1水平分別為(4.52±0.74)、(7.73±1.25)、(12.49±2.18)μg/L，隨著神經(jīng)功能缺損程度的加重，AIS患者血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平逐漸升高(P均<0.05)。

2.3 不同腦梗死面積患者血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平比較 研究組小面積腦梗死29例，中面積腦梗死43例，大面積腦梗死26例。小面積腦梗死、中面積腦梗死、大面積腦梗死者血清補(bǔ)體C1q水平分別為(161.32±14.37)、(173.44±15.14)、(189.76±17.25)mg/L，VILIP-1水平分別為(4.18±0.68)、(6.92±1.15)、(14.14±2.34)μg/L，隨著腦梗死面積的增大，AIS患者血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平逐漸升高(P均<0.05)。

2.4 研究組血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平與NIHSS評(píng)分和腦梗死面積的相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平與NIHSS評(píng)分均呈正相關(guān)(r分別為0.475、0.584，P均<0.05)，血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平與腦梗死面積均呈正相關(guān)(r分別為0.514、0.632，P均<0.05)。

2.5 血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1對(duì)AIS的診斷價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清補(bǔ)體C1q診斷AIS的曲線下面積(AUC)為0.674(95%CI：0.582～0.747),最佳診斷臨界值為169.34 mg/L，靈敏度為71.62%，特異度為63.46%；VILIP-1診斷AIS的AUC為0.714(95%CI：0.619～0.832)，最佳診斷臨界值為4.35 μg/L，靈敏度為75.83%，特異度為66.94%。

3 討論

腦卒中是嚴(yán)重危害我國人民生命健康的主要疾病之一，《中國心血管病報(bào)告2017》數(shù)據(jù)表明[10]，我國目前約有腦卒中患者1 300萬人，腦卒中每年發(fā)病率、病死率分別為246.8/10萬人、114.8/10萬人。AIS占全部腦卒中的60%～80%，是腦卒中最常見的類型。臨床對(duì)于AIS強(qiáng)調(diào)早期診斷、早期治療、早期康復(fù)和早期預(yù)防其復(fù)發(fā)[11]，但作為目前AIS主要診斷方法的CT、MRI等影像學(xué)技術(shù)的診斷效果欠佳，約有40%的患者無法得到快速有效的診斷[12]。因此，尋找敏感有效的血清標(biāo)志物成為眾多醫(yī)學(xué)工作者探尋的熱點(diǎn)。

補(bǔ)體可介導(dǎo)免疫溶菌、溶血作用，在維持免疫耐受和內(nèi)環(huán)境自穩(wěn)中有重要作用，是機(jī)體面對(duì)外來侵害的第一道防護(hù)機(jī)制[13]。C1q可與抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合并改變其結(jié)構(gòu)，并在級(jí)聯(lián)激活反應(yīng)作用下形成攻膜復(fù)合物，從而在補(bǔ)體激活的經(jīng)典途徑中發(fā)揮起始分子的作用[14]。腦內(nèi)的補(bǔ)體系統(tǒng)在正常情況下處于平衡狀態(tài)，血腦屏障遭到破壞后，血漿補(bǔ)體進(jìn)入腦內(nèi)與腦磷脂、抗磷脂抗體等抗原物質(zhì)接觸形成抗原-抗體復(fù)合物，通過經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體。腦缺血發(fā)生時(shí)，缺血區(qū)出現(xiàn)離子濃度和pH值變化，這些變化可致補(bǔ)體調(diào)節(jié)因子減少或缺失，進(jìn)而使得補(bǔ)體激活增加，同時(shí)腦缺血引起的腦內(nèi)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞破壞，還可引起與C1q結(jié)構(gòu)類似的甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)沉積，通過MBL途徑激活補(bǔ)體[15]。補(bǔ)體系統(tǒng)活化，也成為缺血性腦血管病發(fā)病機(jī)制中重要的一環(huán)。近期研究[16]表明，血清補(bǔ)體C1q水平與腦梗死的發(fā)生密切相關(guān)，是AIS發(fā)作的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

VILIP-1屬于神經(jīng)元鈣傳感蛋白視錐蛋白/恢復(fù)蛋白家族，其主要通過與Ca2+結(jié)合發(fā)生不同的結(jié)構(gòu)變化，引發(fā)下游網(wǎng)絡(luò)中信號(hào)分子改變，傳導(dǎo)不同的下游信號(hào)[17]。VILIP-1可通過影響β-淀粉樣蛋白(Aβ)的沉積和tau蛋白的磷酸化來影響神經(jīng)退行性疾病的進(jìn)程[18]。AIS造成的神經(jīng)損害是一個(gè)持續(xù)性過程，Aβ的沉積和tau蛋白的磷酸化均可導(dǎo)致細(xì)胞毒性的產(chǎn)生，由于VILIP-1參與到這一過程中，所以表達(dá)VILIP-1的神經(jīng)元細(xì)胞更易受損，導(dǎo)致生理功能缺失，VILIP-1在這一損傷過程被釋放入血，其水平升高對(duì)于神經(jīng)損傷的診斷有重要意義[19]。有研究[20]表明，高水平的VILIP-1與腦梗死后認(rèn)知記憶障礙密切相關(guān)，能較好地預(yù)測(cè)血管性癡呆。

本研究發(fā)現(xiàn)，AIS患者血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平升高，同時(shí)血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平隨著患者神經(jīng)功能缺損程度和腦梗死面積的增加而升高，證實(shí)補(bǔ)體C1q、VILIP-1在AIS的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。進(jìn)一步研究表明，血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平與NIHSS評(píng)分和腦梗死面積均呈正相關(guān)，提示補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平或可成為診斷AIS患者病情的血清標(biāo)志物。ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清補(bǔ)體C1q診斷AIS的AUC為0.674(95%CI：0.582～0.747),最佳診斷臨界值為169.34 mg/L，靈敏度為71.62%，特異度為63.46%；VILIP-1診斷AIS的AUC為0.714(95%CI：0.619～0.832)，最佳診斷臨界值為4.35 μg/L，靈敏度為75.83%，特異度為66.94%。表明補(bǔ)體C1q、VILIP-1對(duì)于AIS有較好的診斷價(jià)值。

綜上所述，AIS患者血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平升高，其水平與NIHSS評(píng)分和腦梗死面積均呈正相關(guān)。血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平可作為AIS患者病情診斷的輔助指標(biāo)。值得注意的是血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平會(huì)隨著發(fā)病時(shí)間的變化呈現(xiàn)明顯波動(dòng)，本研究選取了發(fā)病時(shí)間較為集中的病例進(jìn)行研究，今后我們將進(jìn)一步觀察AIS患者發(fā)病后不同時(shí)間段的血清補(bǔ)體C1q、VILIP-1水平，以提供更為可靠的數(shù)據(jù)參考。