許笑笑，孫 琳

1.鄧州市中心醫(yī)院 藥械科，河南 鄧州 474150；2.鄭州大學 第三附屬醫(yī)院，鄭州450000

琥珀酸美托洛爾為選擇性β1受體阻滯劑，用于治療高血壓、冠心病、慢性心力衰竭和心律失常[1]。琥珀酸美托洛爾及其制劑在美國藥典(USP34)和英國藥典(EP2011)[2-3]均有收載，我國藥典暫未收載。我們參照英國藥典(EP2011)“琥珀酸美托洛爾 有關(guān)物質(zhì)HPLC”項下的方法，建立琥珀酸美托洛爾有關(guān)物質(zhì)的HPLC 檢測方法，并參照中國藥典《藥品標準分析方法驗證指導(dǎo)原則》[4]對本方法進行了驗證。

1 儀器與試劑

Agilent 1260高效液相色譜儀，AL 204電子分析天平。

琥珀酸美托洛爾原料(自制)，琥珀酸美托洛爾雜質(zhì)A(008E15)。乙腈、三乙胺為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:ZORBOX-C18，150 mm×4.6 mm，5μm；流動相:醋酸銨3.9 g，用810 mL 水溶解，加三乙胺2 mL、冰醋酸10 mL、磷酸3 mL 和乙腈146 mL，混合均勻；流速:1.0 mL·min-1；柱溫:25℃；檢測波長:280 nm；進樣量:20μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備

取琥珀酸美托洛爾20 mg，置10 mL 量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 對照溶液a的制備

取琥珀酸美托洛爾5 mg、琥珀酸美托洛爾雜質(zhì)A 3 mg，置100 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 對照溶液b的制備

精密量取供試品溶液1.0 mL，置100 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻；精密量取1.0 mL，置10 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 對照溶液c的制備

取琥珀酸美托洛爾10 mg，置10 mL量瓶中，用0.1 mol·L-1鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻；將該溶液放置254 nm 波長的紫外燈下照射6 h；精密量取1.0 mL，置50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。如果供試品溶液中出現(xiàn)一個峰面積較對照溶液b峰面積大的且出峰時間為對照溶液b主峰0.3倍保留時間的峰，進樣對照溶液c，該溶液僅用于鑒定雜質(zhì)C的峰。

2.2.5 計算公式

2.3 方法學考察

2.3.1 系統(tǒng)適用性

按2.1項下色譜條件，量取對照溶液a 20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至琥珀酸美托洛爾主峰保留時間的3倍。雜質(zhì)A 與主峰分離度為8.85。

2.3.2 專屬性

1)空白試驗。取流動相20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至琥珀酸美托洛爾主峰保留時間的3倍。

2)雜質(zhì)C定位。量取對照溶液c 20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至琥珀酸美托洛爾主峰保留時間的3倍。

3)降解試驗。采用強酸(加6 mol·L-1鹽酸0.5 mL，60℃水浴加熱2 h)、強堿(加6 mol·L-1氫氧化鈉0.5 mL，60℃水浴加熱2 h)、強氧化(加體積分數(shù)為30%過氧化氫1.0 mL，60℃水浴加熱1 h)、高溫(100℃條件下加熱1 h)、強光(4 500±500)lx條件下照射24 h方法對琥珀酸美托洛爾進行破壞，使其產(chǎn)生降解產(chǎn)物，同時制備空白降解溶液，按上述方法進行測定。本品在氧化降解雜質(zhì)數(shù)量和雜質(zhì)含量上增加明顯，主峰與相鄰雜質(zhì)分離度分別為4.11和1.51。其他降解試驗的降解產(chǎn)物較少，琥珀酸美托洛爾與相鄰雜質(zhì)的分離度均大于3。

2.4 最低檢測限

取對照溶液b 20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至琥珀酸美托洛爾主峰保留時間的3倍，量取琥珀酸美托洛爾峰高和基線噪音，計算琥珀酸美托洛爾的信噪比(S/N)為31.5。取琥珀酸美托洛爾對照溶液b用流動相稀釋10倍，進樣檢測，記錄色譜圖，琥珀酸美托洛爾峰的信噪比為3.5，即最低檢出濃度為0.2μg·m L-1(供試品溶液濃度的0.01%)。

2.5 精密度試驗

取琥珀酸美托洛爾對照溶液b 20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至琥珀酸美托洛爾主峰保留時間的3倍。連續(xù)進樣6 次，主峰峰面積的RSD 為1.35%。

2.6 溶液穩(wěn)定性

取供試品溶液和對照品溶液b，室溫條件下，分別于0、4、8、12、24 h測定，雜質(zhì)C、最大單雜和總雜含量的絕對偏差均不大于0.003%，說明琥珀酸美托洛爾供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 樣品有關(guān)物質(zhì)測定

取琥珀酸美托洛爾樣品3批，按前述方法檢測，計算有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果見表1。

表1 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 方法的確定

琥珀酸美托洛爾在美國藥典(USP34)中列出有琥珀酸美托洛爾雜質(zhì)A、B、C、D 四種雜質(zhì)，英國藥典(BP2011)中則列出有12種已知雜質(zhì)；USP 采用分別用雜質(zhì)對照品測定琥珀酸美托洛爾中雜質(zhì)A、B、C、D 的含量，對4種已知雜質(zhì)測定結(jié)果準確，而其他雜質(zhì)仍需用自身對照法測定。EP 采用自身對照法結(jié)合雜質(zhì)A 和雜質(zhì)C定位，加校正因子方法計算雜質(zhì)C，不加校正因子計算雜質(zhì)A 和其他雜質(zhì)，對雜質(zhì)對照品要求相對較低。我們參照EP，經(jīng)方法學驗證，該方法簡便、準確、可靠，能滿足琥珀酸美托洛爾有關(guān)物質(zhì)的限度檢測要求。

3.2 耐用性

將柱溫分別設(shè)定為20、25、30℃，其他按照前述色譜條件進行測定，琥珀酸美托洛爾和雜質(zhì)A 的分離度無顯著差異，單雜和總雜的含量測定結(jié)果無顯著變化。將流動相流速分別設(shè)定為0.9、1.0、1.1m L·min-1，其他按照前述色譜條件進行測定。琥珀酸美托洛爾和雜質(zhì)A 的分離度均大于8，單雜和總雜的含量測定結(jié)果無顯著變化。配制流動相比例分別814∶156、824∶146、834∶136，其他按前述色譜條件進行測定，琥珀酸美托洛爾和雜質(zhì)A 的分離度分別為7.9、8.8、9.1，單雜和總雜的含量測定結(jié)果無顯著變化。說明該方法耐用，色譜條件的輕微改變不影響該分析方法的測定結(jié)果。