宮海全，許艷茹，石 菊，于艷輝，吳 萍，徐 建

(吉林修正藥業(yè)新藥開(kāi)發(fā)有限公司·吉林長(zhǎng)春·130012）

仙牛腰骶痛顆粒由淫羊藿、千年健、地楓皮、牛膝組成。功能主治溫陽(yáng)祛濕，通經(jīng)止痛，用于治療腰骶痛寒濕阻絡(luò)證。腰骶痛是腰椎骨質(zhì)增生、腰肌勞損、腰椎間盤(pán)突出多種因素造成的臨床上一種常見(jiàn)的疾病，本研究采用硬膜外穿刺非壓迫性腰椎間盤(pán)突出模型，觀察仙牛腰骶痛顆粒對(duì)腰椎間盤(pán)突出疼痛改善作用，明確藥物作用機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SD大鼠，雌雄各半，體重200～220g，均購(gòu)自長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2 藥物

仙牛腰骶痛顆粒：由修正藥業(yè)集團(tuán)長(zhǎng)春高新制藥有限公司提供，批號(hào)：20191110；美洛昔康片：上海勃林格殷格翰藥業(yè)有限公司，批號(hào)：A89562；SP、IgM、IgG、IL-1、IL-6、PGE2試劑盒， 購(gòu)自南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20191204。

1.3 儀器

SMP500-18272-LSIO酶標(biāo)儀；Primo型低溫冷凍離心機(jī)。

2 方法[1-5]

2.1 分組

將60大鼠隨機(jī)分組，分別為空白組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組（美洛昔康片1.4mg·kg-1）、仙牛腰骶痛顆粒低、中、高劑量組（2.2、4.4、8.8g·kg-1），每日 1 次，連續(xù)灌胃14d，灌胃容積為10mL·kg-1。

2.2 模型建立

空白組不做特殊處理，其余各組均使用醫(yī)用繃帶在生理彎曲范圍內(nèi)將鼠尾折成U型呈屈曲位，每日1次，早上纏上繃帶，晚上解開(kāi)，建立非壓迫性腰椎間盤(pán)退變的模型。30日后，正常組不作任何特殊處理。1%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔麻醉，無(wú)菌條件下距尾根部1cm處切下鼠尾并用2-0號(hào)四線間斷縫合傷口。切開(kāi)尾部椎間盤(pán)，見(jiàn)髓核呈膠凍樣約10mg，取5個(gè)髓核并加入50L生理鹽水，充分?jǐn)嚢柘♂尦苫鞈乙河谩４笫笄鷤?cè)臥位，以L4-5椎體間隙為穿刺點(diǎn)用9號(hào)腰椎穿刺針行硬膜外穿刺，分別注射20μl自體髓核混懸液和2%利多卡因30μl。穿刺方向?yàn)獒樀慕似蝾^側(cè)約因個(gè)體差異而角度不同斜行刺入20°至30°不等。縫合后，腹腔注射抗生素預(yù)防感染。

2.3 指標(biāo)測(cè)定

腹主動(dòng)脈取血 5mL，3500 r·min-1，離心 15min，吸取上清液分裝，-20℃保存?zhèn)溆?。?yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定各組大鼠血清中SP、IgM、IgG的含量，在取完血清標(biāo)本后切取腰4神經(jīng)根，以不銹鋼電動(dòng)勻漿器制備組織勻漿 4000r離心15min取上清液作樣本測(cè)定IL-1、IL-6、PGE2。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，進(jìn)行t檢驗(yàn)，用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 對(duì)大鼠血清IgM、IgG、SP的影響

大鼠硬膜外穿刺非壓迫性腰椎間盤(pán)突出模型后，與空白組相比，模型組血清中IgM、IgG、SP釋放量增加（P＜0.01）；與模型組比較，仙牛腰骶痛顆粒高、中、低劑量組能夠明顯抑制IgM、IgG的釋放及SP的合成（P＜0.001，P＜0.01），結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 對(duì)大鼠血清 IgM、IgG、SP 的影響（±s，n=10）

表1 對(duì)大鼠血清 IgM、IgG、SP 的影響（±s，n=10）

與空白組比較，#P＜0.05,##P＜0.01,###P＜0.001;與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

組別 劑量（g/kg）IgM（μg/ml）IgG（mg/ml） SP(ng/ml)空白組 - 11561.1±1196.88 49.5±6.2 887.2±242.9模型組 - 12204.7±1149.3 57.2±2.2## 924.0±116.5陽(yáng)性組 1.4mg 11773.7±1245.3 46.69±5.6***698.0±117.4**高劑量組 8.8 11349.3±757.7 48.74±5.2***575.0±249.1**中劑量組 4.4 10908.2±1194.1 43.0±11.3** 435.8±207.6***低劑量組 2.2 8818.3±718.3*** 38.2±7.3*** 187.8±78.8***

3.2 對(duì)大鼠神經(jīng)根中IL-1、IL-6、PGE2含量的影響

大鼠硬膜外穿刺非壓迫性腰椎間盤(pán)突出模型后，與空白組比較，模型組大鼠IL-1、IL-6釋放量，PGE2合成明顯升高(P＜0.01，P＜0.001)；與模型組比較，高、中、低劑量組能夠明顯抑制IL-1、IL-6的釋放以及PGE2 合成速度（P＜0.001，P＜0.01，P＜0.05），結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 大鼠神經(jīng)根中IL-1、IL-6、PGE2含量（x±S，n=10）

4 討論

腰椎間盤(pán)突出是導(dǎo)致腰背痛的病因之一，其發(fā)病率為5%～10%，占腰腿痛病人的60%以上，據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，腰背痛的發(fā)病率已位于三大慢性病第三位。臨床研究表明，神經(jīng)根的機(jī)械壓迫并不是發(fā)病的唯一原因，椎間盤(pán)組織突出后會(huì)誘發(fā)的化學(xué)性炎癥和自身免疫反應(yīng)也會(huì)影響疼痛。非壓迫性腰椎間盤(pán)退變雖沒(méi)有直接對(duì)神經(jīng)根造成機(jī)械壓迫，但退變的椎間盤(pán)因破裂等因素產(chǎn)生各種各樣的生物化學(xué)因子，如髓核等因子作用于神經(jīng)根造成損傷和疼痛[5-8]。

IL-1和IL-6是非常經(jīng)典的炎癥介質(zhì)，且能刺激增加疼痛介質(zhì)PGE2及P物質(zhì)(SP)的合成，導(dǎo)致局部疼痛的敏感度增加，從而進(jìn)一步加重腰腿疼痛[9-12]，臨床證明，IL-1和IL-6在突出椎間盤(pán)組織中具有較高的活性[13-16]。本研究表明：仙牛腰骶痛顆粒高、中、低劑量組可降低IgM、IgG含量，調(diào)控自身免疫反應(yīng)，同時(shí)仙牛腰骶痛顆粒可減少I(mǎi)L-1、IL-6的釋放，抑制致痛物質(zhì)PGE2、SP的合成，進(jìn)而緩解腰椎間盤(pán)突出的疼痛。

綜上所述，仙牛腰骶痛顆粒可能通過(guò)調(diào)控IgM、IgG自身免疫，阻斷炎性因子IL-1、IL-6的釋放，抑制致痛物質(zhì)PGE2、SP的合成，從而達(dá)到改善腰椎間盤(pán)突出疼痛的作用，但其確切的分子機(jī)制有待進(jìn)一步探討研究。