律廣富，樸永革 ，黃曉巍，李寶志 ，林 賀，馬 超，程延福 ，莊雪峰，李岳宸 ，林 喆

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)吉林省人參科學(xué)研究院，長(zhǎng)春130117；2.吉林煙草工業(yè)有限責(zé)任公司，長(zhǎng)春130031；3.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春130117）

慢性支氣管炎是呼吸系統(tǒng)的慢性非特異性炎癥反應(yīng)，中老年人發(fā)病率較高且病程緩慢。初期在寒冷季節(jié)發(fā)病，年齡越大，發(fā)病機(jī)率就越高[1-2]。中藥在治療慢性支氣管炎方面提供了巨大的幫助，常用的中藥有養(yǎng)陰清肺湯、杏蘇二陳湯、宣白承氣湯等[3-5]。

人參屬五加科植物，味甘，性溫，喜陰涼，具有大補(bǔ)元?dú)狻⒄{(diào)補(bǔ)五臟，祛除邪氣，明目益智、復(fù)脈固脫等功效[6]。主要含有皂苷、多糖、揮發(fā)油和氨基酸等化學(xué)成份，具有抗疲勞、抗衰老、抗氧化和提高免疫力等藥理作用[7]，也有祛痰、健胃、利尿等作用。百部為止咳殺蟲類藥物，臨床常于治療咳嗽、哮喘等。研究表明百部蜜炙后止咳作用優(yōu)于生百部[8]。

本實(shí)驗(yàn)采用煙熏法誘導(dǎo)慢性支氣管炎大鼠模型，評(píng)價(jià)人參蜜百部醇提物對(duì)模型大鼠咳喘次數(shù)的影響，同時(shí)檢測(cè)大鼠 SOD、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β 等因子水平變化，分析人參蜜百部對(duì)慢性支氣管炎大鼠治療作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠60只，180～200g，長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，合格證號(hào)：SCXK（吉）-2018-0003。

1.2 藥品與試劑

人參 （購(gòu)自吉林國(guó)安藥業(yè)有限公司20181101）；蜜百部 （購(gòu)自吉林國(guó)安藥業(yè)有限公司20160701）；醋酸地塞米松片（遂成藥業(yè)股份有限公司，H41021038，規(guī)格 0.75mg/片）；SOD(批號(hào)：20200924)；MDA(批號(hào)：20200924)；TNF-α (批號(hào)：20200924)；IL-6(批 號(hào)：20200924)；IL-1β(批號(hào)：20200924)；試劑盒（購(gòu)自南京建成生物研究所有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

電子天平 （福州華志）；JA2003B電子分析天平（上海越平）；粉碎機(jī)（北京中興偉業(yè)）；WP-UP-III-40精密型超體純水機(jī) （四川沃特爾）；4℃低溫離心機(jī)（Cerrtrifuge 5810R）；恒溫培養(yǎng)箱（EYEL4 SLI-700）；MultiskanFC型酶標(biāo)儀（上海賽默飛世爾）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 藥物制備

人參蜜百部提取物的制備：取人參與蜜百部藥材用粉碎機(jī)粉碎，按1∶1混合，用10倍量的70%乙醇回流提取3次，每次1 h，合并提取液，回收乙醇并濃縮至浸膏，4℃冷藏保存待用。

2.2 分組及模型制備

分組：SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、陽性藥組（醋酸地塞米松）、人參蜜百部高、中、低劑量組，每組10只。

模型制備：除空白組外,各組大鼠每天在自制的煙熏倉(cāng)內(nèi)接受煙熏（煙熏倉(cāng)尺寸長(zhǎng)55cm，高40cm，寬30cm）,每日兩次,每次30min,連續(xù)6周。

2.3 給藥

第4周開始灌胃給藥，給藥劑量為陽性藥組給予醋酸地塞米松 （1mg/kg），人參蜜百部高劑量組（12g/kg），人參蜜百部中劑量組（6g/kg），人參蜜百部低劑量組（3g/kg），空白組給予等量蒸餾水。

2.4 指標(biāo)檢測(cè)

2.4.1 大鼠咳喘次數(shù)變化

末次灌胃給藥30min后，記錄大鼠5 min內(nèi)出現(xiàn)的咳嗽次數(shù)。

2.4.2 樣本采集

將大鼠麻醉后腹主動(dòng)脈取血，4℃，3000r/min離心15min，分離血清，-20℃保存待用。

2.4.3 大鼠血清SDO、MDA測(cè)定

取凍存血清按試劑盒說明檢測(cè)血清中SOD、MDA含量。

2.4.4 大鼠血清 TNF-α、IL-6、IL-1β 測(cè)定

取凍存血清按試劑盒說明書，檢測(cè)血清中TNF-α、IL-6、IL-1β 含量。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示，比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義即具有明顯差異；P＜0.01為具有顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 人參蜜百部醇提物對(duì)大鼠咳喘次數(shù)的影響

與空白組比較，模型組大鼠咳喘次數(shù)明顯增加（P＜0.01），與模型組相比，醋酸地塞米松組、人參蜜百部高、中劑量組大鼠咳喘次數(shù)均顯著降低（P＜0.01），人參蜜百部低劑量組大鼠咳喘次數(shù)顯著降低 （P＜0.05），結(jié)果見表1。

表1 人參蜜百部醇提物對(duì)大鼠咳喘次數(shù)的影響（n=10，±s）

表1 人參蜜百部醇提物對(duì)大鼠咳喘次數(shù)的影響（n=10，±s）

注：與空白組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 劑量 咳喘次數(shù)空白組 - 0模型組 - 18.1±5.1##醋酸地塞米松組 1mg/kg 10.6±4.5**人參蜜百部醇提物高劑量組 12g/kg 11.3±3.5**人參蜜百部醇提物中劑量組 6g/kg 11.6±4.2**人參蜜百部醇提物低劑量組 3g/kg 12.9±4.7*

3.2 人參蜜百部醇提物對(duì)大鼠血清SOD、MDA的影響

與空白組相比，模型組大鼠血清SOD含量明顯下降（P＜0.01）、MDA 明顯升高（P＜0.01），給藥后，與模型組相比各給藥組大鼠血清SOD明顯升高 （P＜0.01）、MDA 明顯下降（P＜0.01），結(jié)果見表2。

表2 人參蜜百部醇提物對(duì)大鼠血清SOD、MDA含量的影響（n=10，±s）

表2 人參蜜百部醇提物對(duì)大鼠血清SOD、MDA含量的影響（n=10，±s）

注：與空白組比較，##P＜0.01；與模型組比較，**P＜0.01。

組別 劑量 SOD(U/mL) MDA（mmol/L）空白組 - 266.21±22.12 9.24±3.21模型組 - 202.3±19.71## 27.77±2.22##醋酸地塞米松組 1mg/kg 243.37±18.82** 15.35±3.21**人參蜜百部醇提物高劑量組 12g/kg 240.52±20.31** 17.72±2.66**人參蜜百部醇提物中劑量組 6g/kg 238.99±19.34** 18.51±3.22**人參蜜百部醇提物低劑量組 3g/kg 229.71±22.55** 20.22±4.25**

3.3 人參蜜百部醇提物對(duì)大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β的影響

與空白組比較，模型組大鼠TNF-α、IL-6、IL-1β明顯增加（P＜0.01），與模型組相比，醋酸地塞米松組、人參蜜百部高、中劑量組大鼠TNF-α、IL-6、IL-1β含量均顯著降低（P＜0.01），人參蜜百部低劑量組TNF-α含量顯著降低（P＜0.05），結(jié)果見表3。

表3 人參蜜百部醇提物對(duì)大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量的影響（n=10，±s）

表3 人參蜜百部醇提物對(duì)大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量的影響（n=10，±s）

注：與空白組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 劑量 TNF-α（ng/L） IL-6（ng/L） IL-1β（ng/L）空白組 - 1231.25±131.11 101.25±7.32 136.62±9.93模型組 - 1719.56±161.36## 152.31±8.82## 211.23±10.62##醋酸地塞米松組 1mg/kg 1337.25±121.1** 112.64±7.56** 157.57±10.38**人參蜜百部醇提物高劑量組 12g/kg 1393.38±157.21** 119.35±5.89** 158.34±11.25**人參蜜百部醇提物中劑量組 6g/kg 1411.32±150.53** 127.56±6.78** 162.77±12.52**人參蜜百部醇提物低劑量組 3g/kg 1509.86±177.21* 135.75±8.21** 171.25±12.11**

4 討論

慢性支氣管炎是一類常見的呼吸系統(tǒng)疾病，發(fā)病人群廣，復(fù)發(fā)率高，吸煙為本病發(fā)病的主要因素，特別是老年人為易感人群，據(jù)統(tǒng)計(jì)，50歲以上人群患病率為15%，如不盡早進(jìn)行治療，可引起諸多并發(fā)癥[9-10]。慢性支氣管炎正在成為威脅老年人健康的又一大殺手。因此對(duì)慢性支氣管炎的防治迫在眉睫。

本研究采用煙熏法誘導(dǎo)慢性支氣管炎模型大鼠，該方法是將動(dòng)物放入大小合適煙室內(nèi)，通入煙霧，一段時(shí)間后取出動(dòng)物，根據(jù)實(shí)際需求，重復(fù)不同次數(shù)和天數(shù)，以獲得所需的支氣管損傷模型[11]。此法由于操作簡(jiǎn)便，可用于鼠[12-15]、犬、猴等多種動(dòng)物，支氣管慢性炎癥病變確切，成為最常用的方法[11]。

有研究表明，煙熏法誘導(dǎo)慢性支氣管炎小鼠氣道上皮下出現(xiàn)炎性細(xì)胞，支氣管內(nèi)有黏液栓，肺泡灌洗液中蛋白含量增加，白細(xì)胞總數(shù)增加，其機(jī)制與氧化應(yīng)激過強(qiáng)有關(guān)[16]。尚立群等[17]發(fā)現(xiàn)安石榴苷可顯著促進(jìn)慢性支氣管炎大鼠肺組織及血清中的SOD活性，抑制MDA的產(chǎn)生。黃勇等[18]發(fā)現(xiàn)野菊花提取物能夠降低慢性支氣管大鼠體內(nèi)TNF-α、IL-6含量,改善肺組織的病理?yè)p傷。李海峰等[19]發(fā)現(xiàn)“復(fù)方白毛夏枯草”能降低血清TNF-α和IL-1β含量,這可能是該方治療慢性支氣管炎的作用機(jī)制之一?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，人參具有抗氧化作用，蜜百部有較好的止咳作用[6-7]，初步推斷二者對(duì)慢性支氣管炎有一定的治療作用，而本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，人參蜜百部提取物可明顯降低大鼠咳喘次數(shù)，對(duì)慢性支氣管炎的作用可能與提升 SOD、降低 MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β 水平有關(guān)。