王 澤 ,姚 政,王 怡,王 敏 ,林鵬程

(1.青海民族大學 藥學院，青海 西寧 810007；2.青藏高原植物化學重點實驗室，青海 西寧 810007)

近幾年研究植物揮發(fā)性成分發(fā)現(xiàn)，其有被開發(fā)為一種新型藥物用于臨床治療的價值[1-3].菊科植物揮發(fā)性成分的抑菌活性極具潛力[4-6].草甸還陽參已被用于中醫(yī)治療[7].目前，還未見到有關草甸還陽參和葉狀柄垂頭菊超臨界流體萃取物研究的報道.為進一步開發(fā)草甸還陽參和葉狀柄垂頭菊超臨界流體萃取物的藥用價值，本文對這2種植物超臨界流體萃取物的化學成分和抑菌活性進行了研究.

1 材料與方法

1.1 儀器

HP-Agilent GC/MS (7890/ MSD5975C)聯(lián)用;AppliedSeparations(美國分離技術公司)7071(SFE-2)型超臨界CO2萃取儀,配備主機、Series1500夾帶劑泵、萃取釜、空壓機和SDC-6冷循環(huán)水系統(tǒng).

1.2 材料

草甸還陽參和葉狀柄垂頭菊于2018年6月采自青海省黃南州麥秀林場，海拔分別為3 175 m和3 147 m，并由青海民族大學藥學院林鵬程教授鑒定為草甸還陽參(Crepispratensis)和葉狀柄垂頭菊(Cremanthodiumphyllodineum).

2 方法與結果

2.1 SFE-CO2條件

萃取壓力為25 MPa,萃取溫度為50 ℃,靜態(tài)萃取,萃取時間2 h.

2.2 GC-MS條件

HP-5 MS毛細管柱 (30 m×0.25 mm，膜厚度0.25 μm)，氣相色譜的分析柱壓為25 MPa,柱溫50 ℃,分析時間120 min.用程序升溫方法升溫5 min將柱溫箱溫度由室溫升至50 ℃，之后以3 ℃/min的速度將溫度升至150 ℃并保持溫度不變1 min.最后再以2 ℃/min的升溫速度升溫至300 ℃.注射器和檢測器溫度分別為250 ℃和200 ℃.每次檢測注射10 μL超臨界流體萃取物，其分流比為1︰10[8-11].

2.3 兩種菊科植物的超臨界流體萃取物化學成分分析

兩種植物全草陰干粉碎,過60目篩,準確稱量500 g后裝進1 000 mL反應釜,按“2.1”的萃取條件進行萃取，得超臨界流體萃取物的量分別為:草甸還陽參0.52 g(淡黃色);葉狀柄垂頭菊0.35 g(淡黃色).

兩種菊科植物超臨界CO2提取物用色譜純甲醇充分溶解過濾后,在上述實驗條件下對2種植物超臨界流體萃取物進行分離[12].通過質譜分析和計算機標準譜庫檢索,從草甸還陽參中鑒定出28種化學成分，葉狀柄垂頭菊中鑒定出45種化學成分,并通過保留指數(shù)法給出各成分的相對百分含量.

2.4 兩種菊科植物超臨界流體萃取物的抑菌活性

用濾紙瓊脂擴散法，測定了2種菊科植物超臨界流體萃取物抑菌圈的直徑，并且對于每個超臨界流體萃取物抑菌圈的直徑平行測定3次，抑菌圈直徑數(shù)值采用平行測定3次數(shù)值的平均值(mean)±標準差(SD)表示.超臨界流體萃取物濃度分別為A (3 mg/mL)、B (1.5 mg/mL)、C (0.75 mg/mL).直徑的測量單位為毫米[13].

甲型副傷寒沙門氏菌 [CMCC(B) 50093],宋氏志賀氏菌[CMCC(B) 51592],金黃色葡萄球菌 [CMCC(B) 26003],短小芽孢桿菌[CMCC(B) 63202],藤黃微球菌 [CMCC(B) 28001],乙型副傷寒沙門氏菌[CMCC(B) 50094],痢疾志賀氏菌 [CMCC(B) 51105],銅綠假單胞菌 [CMCC(B) 10104],大腸埃希菌 [CMCC(B) 44102],產氣腸桿菌 [CMCC(B) 12021],蠟狀芽孢桿菌 [CMCC(B) 63301],白色念珠菌 [CMCC(F) 98001],黑曲霉 [CMCC(F) 98003],釀酒酵母菌 [CMCC(F) 23854]，14種菌種為本次2種菊科植物超臨界流體萃取物抑菌活性試驗供試菌種.

草甸還陽參和葉狀柄垂頭菊超臨界流體萃取物的總離子流圖見圖1、圖2.草甸還陽參和葉狀柄垂頭菊超臨界流體萃取物的化學成分和抗菌活性見表1、表2

注：峰編號和表1中的編號對應，“*”峰為未鑒定出的化學成分

注：峰編號和表1中的編號對應，“*”峰為未鑒定出的化學成分

表1 草甸還陽參和葉狀柄垂頭菊超臨界流體萃取物的化學成分分析

表2 2種菊科植物的超臨界流體萃取物對供試菌株的抑菌作用

3 結論

結果表明，在草甸還陽參提取物中,含量最高的是Linoleic(21.2%),其次是Perhydrofarnesyl aceton(15.2%).在葉柄狀垂頭菊提取物中,含量最高的是Heneicosane(4.87%),其次是Phytol(4.34%).草甸還陽參提取物對副傷寒沙門氏菌、銅綠假單胞菌、蠟樣芽孢桿菌有抑制作用，對銅綠假單胞菌的抗性最強.葉狀柄垂頭菊提取物對羊水桿菌、金黃色葡萄球菌、黃體微球菌、銅綠假單胞菌、蠟樣芽孢桿菌和黑曲霉均有抑制作用，且這5種供試菌種的抑菌活性強弱相近.當提取物樣品濃度為3 mg/mL時，對金黃色葡萄球菌的抗性最強.因為這2種植物的超臨界流體萃取物具有良好的抑菌活性，因此可應用于抑菌洗手液、香皂和洗發(fā)水等產品的研發(fā)中.