韓 君，吳建挺，趙恭文，陰冠津，邵莒南，楚 偉，王海燕

(1.山東中農(nóng)聯(lián)合生物科技股份有限公司，山東 濟(jì)南 250100；2.濰坊市農(nóng)業(yè)綜合執(zhí)法支隊(duì)，山東 濰坊 261061；3.山東省農(nóng)藥檢定所，山東 濟(jì)南 250100)

葡萄霜霉病(Plasmoparaviticola)，屬鞭毛菌亞門霜霉目單軸霉屬，是一種世界性的葡萄病害[1]。在我國(guó)各葡萄產(chǎn)區(qū)均有分布， 尤其在多雨潮濕地區(qū)發(fā)生普遍，是葡萄主要病害之一，1834年在美國(guó)野生葡萄中發(fā)現(xiàn)，我國(guó)1899年記載本病的發(fā)生。葡萄霜霉病容易在高溫多雨時(shí)候爆發(fā)，危害嫩葉背面形成白色霉層，會(huì)造成細(xì)胞壞死干枯，危害幼果，在果柄處造成細(xì)胞壞死凹陷。發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，也危害新梢[2]。造成葉片焦枯早落，新梢生長(zhǎng)不良，果實(shí)產(chǎn)量降低、品質(zhì)變劣，植株抗寒性差。而當(dāng)前葡萄種植區(qū)普遍用藥水平較高，導(dǎo)致抗性水平增加[3,4]，市售藥劑防治效果差，防治成本也不斷增高，因此篩選出安全高效的防治藥劑就成為解決該問題的關(guān)鍵。

氟醚菌酰胺(fluopimomide)是一種新型殺菌劑，對(duì)卵菌綱病原真菌有特效，且作用機(jī)理新穎，屬于細(xì)胞骨架和馬達(dá)蛋白分類[3]，主要作用于類血影蛋白(又稱為收縮蛋白，是細(xì)胞膜和細(xì)胞骨架間的特異蛋白)，從而影響細(xì)胞的有絲分裂，且氟醚菌酰胺具有良好的內(nèi)吸傳導(dǎo)性，能從葉片上表面向下滲透，從葉基向葉尖方向傳導(dǎo)，對(duì)幼芽處理后能夠保護(hù)葉片不受病原菌侵染，此外氟醚菌酰胺還可從根部沿植株的木質(zhì)部向整株作物分布。因此獨(dú)特的作用機(jī)理使得氟醚菌酰胺不易與其它殺卵菌藥劑產(chǎn)生交互抗性。吡唑醚菌酯(Pyraclostrobin)屬甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，是一種線粒體呼吸抑制劑，二者作用機(jī)理不同。殺菌劑單劑及組合的表現(xiàn)對(duì)評(píng)價(jià)殺菌劑聯(lián)合作用具有重要意義[6]，本研究測(cè)定了30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑對(duì)葡萄霜霉病的室內(nèi)和田間防效，為防治葡萄霜霉病提供一種新的藥劑組合。

1 材料和方法

1.1 供試材料 供試靶標(biāo)：葡萄霜霉病(Plasmoparaviticola)。

供試作物：葡萄(巨峰，感病品種)。

1.2 供試藥劑 98%氟醚菌酰胺原藥、95%吡唑醚菌酯原藥和30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑(5%氟醚菌酰胺+25%吡唑醚菌酯)；30%吡唑醚菌酯水分散粒劑和25%唑醚·氰霜唑懸浮劑，由市場(chǎng)購(gòu)買。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 室內(nèi)毒力試驗(yàn)

1.3.1.1 制備孢子囊懸浮液 采集新鮮的葡萄霜霉病病葉，用毛筆在流水下將病葉上老的霉層刷洗掉，葉背朝上鋪在底部有2層吸水紗布的保濕盤內(nèi)，用塑料薄膜密封保濕盤，置人工氣候培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為18℃、相對(duì)濕度90%、光暗交替(光照12h、黑暗12h)。待病斑上新的孢子囊長(zhǎng)出后，用蒸餾水沖洗，稀釋配制成1×105個(gè)/mL的孢子囊懸浮液，備用[7]。

1.3.1.2 室內(nèi)毒力測(cè)定 于接菌24h前進(jìn)行藥劑處理。將不同處理藥液分別噴于直徑1.5cm葉盤背面，待藥液自然風(fēng)干后，將各處理葉盤背面向上放在培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿底部墊有相同藥液潤(rùn)濕的吸水紙。每皿同心圓位置放置15個(gè)葉盤，每處理1皿，重復(fù)4次?？瞻讓?duì)照用0.1% 吐溫-80水溶液處理[6]。藥劑處理24 h后接菌。用移液器將孢子囊懸浮液接種至葉盤中心，每葉盤20μL。人工氣候箱培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：溫度22℃、相對(duì)濕度90%、光暗交替(光照12h、黑暗12h)。

1.3.1.3 調(diào)查方法 培養(yǎng)到對(duì)照發(fā)病均勻時(shí)調(diào)查結(jié)果[5]。根據(jù)葉盤上病斑面積占該葉盤面積的百分率確定病情嚴(yán)重度，記載發(fā)病葉盤數(shù)、病情嚴(yán)重度，按公式計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。

病情嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)：無病斑；1級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積5%及以下；3級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積6%～25%；5級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積26%～50%；7級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積51%～75%；9級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積76以上%。

1.3.1.4 數(shù)據(jù)處理及分析 以藥劑濃度對(duì)數(shù)值為自變量x、以防治效果的幾率值為因變量y作回歸分析，求得毒力回歸曲線方程y=a+bx和相關(guān)系數(shù)r，根據(jù)回歸方程計(jì)算各單劑及不同比例混劑的EC50及其95%置信限。

采用Wadley法進(jìn)行評(píng)價(jià)：根據(jù)增效系數(shù)(SR)來評(píng)價(jià)藥劑混用的增效作用，即SR>1.5為增效作用；0.5≤SR≤1.5為相加作用；SR<0.5為拮抗作用。計(jì)算增效系數(shù)(SR)按公式(1)和(2)進(jìn)行：

(1)

式中：

X—混劑的EC50理論值，μg/mL；

P(A)—混劑中A的百分含量；

P(B)—混劑中B的百分含量；

A—混劑中A的EC50值，μg/mL；

B—混劑中B的EC50值，μg/mL；

(2)

式中：

SR—混劑的增效系數(shù)；

X—混劑EC50的理論值，μg/mL；

X(1)—混劑EC50的實(shí)測(cè)值，μg/mL。

1.3.2 田間藥效試驗(yàn)

1.3.2.1 田間試驗(yàn)設(shè)計(jì) 依據(jù)《GB/T17980.122-2004農(nóng)田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則殺菌劑第122部分：殺菌劑防治葡萄霜霉病》開展試驗(yàn)。田間試驗(yàn)在河北省張家口市懷來縣露天葡萄田進(jìn)行。每個(gè)小區(qū)15株，重復(fù)4次，設(shè)計(jì)為隨機(jī)區(qū)組排列，試驗(yàn)區(qū)四周設(shè)保護(hù)行。保護(hù)試驗(yàn)和治療試驗(yàn)各施藥2次，采用莖葉噴霧的施藥方法，使用利農(nóng)HD-400型手動(dòng)背負(fù)式噴霧器噴孔直徑1.33mm，工作壓力為0.2 ～0.3mpa，出水量0.5～0.6L/min。保護(hù)試驗(yàn)2019年7月21日第1次施藥，7月28日第2次施藥，施藥后7d(2019年8月4日)調(diào)查保護(hù)性試驗(yàn)病情。治療試驗(yàn)7月25日第1次施藥并調(diào)查藥前病情指數(shù)，2019年8月1日第2次施藥，施藥后7d(2019年8月8日)調(diào)查治療性試驗(yàn)病情指數(shù)。

試驗(yàn)共設(shè)4個(gè)處理。保護(hù)試驗(yàn)分別為：30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑 1 500倍液，30%吡唑醚菌酯水分散粒劑 1 500倍液和25%唑醚·氰霜唑懸浮劑 1 500倍液；治療試驗(yàn)分別為：30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑 1 000倍液，30%吡唑醚菌酯水分散粒劑 1 000倍液和25%唑醚·氰霜唑懸浮劑 1 000倍液。

1.3.2.2 調(diào)查方法 保護(hù)性試驗(yàn)?zāi)┐嗡幒?d調(diào)查病害病級(jí)。治療性試驗(yàn)在施藥前調(diào)查發(fā)病情況，計(jì)算藥前病情指數(shù)，末次噴藥后7d調(diào)查發(fā)病情況，計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。

調(diào)查方法：每小區(qū)隨機(jī)調(diào)查10個(gè)當(dāng)年抽生新蔓，自上而下調(diào)查全部葉片，根據(jù)以下分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)記錄各級(jí)病葉數(shù)及總?cè)~數(shù)：0級(jí)：無病斑；1級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積5%以下；3級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積6%～25%；5級(jí)： 病斑面積占整個(gè)葉面積26%～50%；7級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積51%～75%；9級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積76%以上。

藥效計(jì)算方法根據(jù)病情指數(shù)按下列指數(shù)公式計(jì)算出防治效果，再按DMRT 法測(cè)定處理間防效的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)毒力試驗(yàn)

2.1.1 氟醚菌酰胺等藥劑對(duì)葡萄霜霉病的毒力 氟醚菌酰胺與吡唑醚菌酯對(duì)葡萄霜霉病菌的EC50分別為0.655 4、1.582 1μg/mL，氟醚菌酰胺與吡唑醚菌酯復(fù)配，在1:1～1:8配比范圍內(nèi)均為相加或增效作用(表1)，其中氟醚菌酰胺：吡唑醚菌酯比例為1:5時(shí)增效作用最明顯，SR值為1.92。

表1 氟醚菌酰胺與吡唑醚菌酯復(fù)配對(duì)葡萄霜霉的聯(lián)合毒力

2.2 田間藥效評(píng)價(jià) 30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑對(duì)葡萄霜霉病菌保護(hù)效果如(表2)，30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑1 500倍液與對(duì)照藥劑30%吡唑醚菌酯水分散粒劑1 500倍液、25%唑醚·氰霜唑懸浮劑1 500倍液對(duì)葡萄霜霉病防效分別為87.15%、83.14%和85.43%，且防效差異不顯著。30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑對(duì)葡萄霜霉病的保護(hù)效果高于對(duì)照藥劑，但沒有顯著性差異。各供試制劑按推薦用量使用對(duì)作物安全。

表2 30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑對(duì)葡萄霜霉田間效果(保護(hù))

30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑對(duì)葡萄霜霉治療效果如(表3)，30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑1 000倍液與對(duì)照藥劑30%吡唑醚菌酯水分散粒劑1 000倍液、25%唑醚·氰霜唑懸浮劑1 000倍液對(duì)葡萄霜霉病防效分別為85.41%、80.98%和81.75%，30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑顯著高于兩對(duì)照藥劑防效。各供試制劑按推薦用量使用對(duì)作物安全。

表3 30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑對(duì)葡萄霜霉田間效果(治療)

3 討論

室內(nèi)毒力試驗(yàn)表明，氟醚菌酰胺:吡唑醚菌酯為1:5時(shí)SR值最大，增效作用最明顯。30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑按1 500倍施藥后，保護(hù)效果達(dá)到87.15%，對(duì)葡萄霜霉具有較好的保護(hù)效果；按1 000倍施藥后，治療效果達(dá)到85.41%，保護(hù)和治療效果均高于對(duì)照藥劑30%吡唑醚菌酯水分散粒劑和25%唑醚·氰霜唑懸浮劑，并對(duì)作物表現(xiàn)安全。因此推薦30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑在葡萄霜霉上使用。

氟醚菌酰胺是一種新型細(xì)胞骨架和馬達(dá)蛋白分類殺菌劑，對(duì)卵菌綱病原菌的各生長(zhǎng)發(fā)育階段均有很好的抑制活性[9]，作用機(jī)理新穎，不易與其它葡萄上常用藥劑產(chǎn)生抗性。已有報(bào)道氟醚菌酰胺與吡唑醚菌酯混配后對(duì)馬鈴薯晚疫病菌具有較高的抑制活性，且增效作用顯著[10]。而當(dāng)前葡萄種植區(qū)因霜霉病害常年嚴(yán)重發(fā)生，對(duì)常見的卵菌藥劑均產(chǎn)生了一定的抗性[3,4]。氟醚菌酰胺的作用機(jī)理與當(dāng)前葡萄霜霉病上常用藥劑完全不同，且對(duì)葡萄霜霉病保護(hù)與治療效果突出，且未見抗性產(chǎn)生的報(bào)道。因此氟醚菌酰胺與吡唑醚菌酯復(fù)配，擴(kuò)大了殺菌譜，且能延緩其抗藥性的產(chǎn)生，對(duì)葡萄霜霉病的防治具有重要意義。建議在葡萄霜霉病的防治上，未見或初見病斑時(shí)噴施30%氟醚·吡唑微囊懸浮-懸浮劑1 500倍液保護(hù)，在葡萄霜霉病發(fā)病后噴施1 000倍液治療。