李冬波 徐寧 秦獻(xiàn)泉 李鴻莉 侯延杰 邱宏業(yè) 張樹偉 朱建華 彭宏祥

摘要：【目的】利用SSR分子標(biāo)記對廣西荔枝種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析并構(gòu)建核心種質(zhì)，為廣西荔枝種質(zhì)資源的保存、遺傳改良及創(chuàng)新利用提供理論依據(jù)?！痉椒ā恳詮V西原產(chǎn)和引種的88份荔枝種質(zhì)資源為研究對象，利用40對SSR引物對其進(jìn)行遺傳多樣性和聚類分析，在此基礎(chǔ)上按原始群體50.00%、25.00%和12.50%的取樣比例，采用逐步聚類法優(yōu)先選擇性狀優(yōu)良材料的原則構(gòu)建廣西荔枝核心種質(zhì)。【結(jié)果】40對SSR引物從88份荔枝種質(zhì)資源中共擴(kuò)增出282條清晰的條帶，每對引物擴(kuò)增條帶數(shù)2～13條，平均7.05條，其中，多態(tài)性條帶182條，每對引物擴(kuò)增的多態(tài)性條帶數(shù)1～13條，平均4.55條，每對引物擴(kuò)增條帶的多態(tài)性比率為14.29%～100.00%，平均64.54%。88份荔枝種質(zhì)資源的遺傳相似系數(shù)為0.83～0.96，說明其遺傳多樣性較低;在遺傳相似系數(shù)0.86處，88份荔枝種質(zhì)資源可分為七大類群，第Ⅰ～Ⅶ類群分別包含3、12、6、6、1、2和58份種質(zhì)，其中第Ⅰ類群均為龍荔種質(zhì)資源，第Ⅱ類群主要為早熟種質(zhì)，第Ⅳ類群主要為早熟實(shí)生種質(zhì)，表明荔枝種質(zhì)間的親緣關(guān)系與熟期存在一定的相關(guān)性。88份荔枝種質(zhì)資源在40個(gè)SSR位點(diǎn)的平均觀測等位基因數(shù)（Na）、有效等位基因數(shù)（Ne）、Shannon指數(shù)（I）和期望雜合度（He）分別為3.2750、2.1137、0.8092和0.5107。核心種質(zhì)-1、核心種質(zhì)-2和核心種質(zhì)-3的種質(zhì)資源數(shù)量分別為44、22和11份，其中，核心種質(zhì)-2的Ne、I和He 3個(gè)遺傳多樣性參數(shù)均最高，分別為2.1774、0.8452和0.5271;僅核心種質(zhì)-3的Na與原始群體存在極顯著差異（P<0.01），3組核心種質(zhì)的其余遺傳多樣性參數(shù)與原始群體無顯著差異（P>0.05），表明核心種質(zhì)-1和核心種質(zhì)-2均能充分代表原始群體的遺傳多樣性，根據(jù)核心種質(zhì)構(gòu)建的原則，最終選擇核心種質(zhì)-2作為廣西荔枝核心種質(zhì)。【結(jié)論】SSR分子標(biāo)記是一種適用于荔枝資源遺傳多樣性分析和核心種質(zhì)構(gòu)建的理想分子標(biāo)記。廣西荔枝種質(zhì)資源遺傳背景相對較窄，遺傳多樣性較低，今后應(yīng)加強(qiáng)荔枝種質(zhì)資源的引進(jìn)與利用。

關(guān)鍵詞： 荔枝;SSR分子標(biāo)記;遺傳多樣性;遺傳相似系數(shù);核心種質(zhì);聚類分析

中圖分類號： S667.102.4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2020）07-1537-08

Abstract：【Objective】In order to provide a theoretical basis for the preservation，genetic improvement and innovative utilization of litchi（Litchi chinensis Sonn.），the SSR molecular markers were used to analyze the genetic diversity and construction of core collections of litchi in Guangxi. 【Method】In this study， 88 litchi germplasm resources originated and introduced in Guangxi were used as materials and 40 pairs of SSR primer combinations were used to study the genetic diversity and cluster analysis. On the basis of this， the stepwise clustering and traits preferred sampling strategy were used to construct core collections of litchi in Guangxi according to the sampling rates 50.00%， 25.00% and 12.50% of the original germplasm resources. 【Result】The results showed that， a total of 282 clear bands were amplified from 88 litchi germplasm resources by 40 pairs of SSR primers and the bands per pair of primers ranged from 2 to 13 with the mean value of 7.05， and among them 182 bands were polymorphism. The number of polymorphic bands amplified by each pair of pri-mers was 1-13， with the mean value of 4.55. The polymorphism rate of amplified bands per pair of primers was 14.29%-100.00%， with the mean value of 64.54%. Genetic similarities among all germplasm resources ranged from 0.83 to 0.96， which indicated a relatively low genetic diversity.The result of system cluster analysis showed that 88 litchi germplasm resources were divided into 7 groups at 0.86 of the similarities. Groups I to VII contained 3， 12， 6， 6， 1， 2 and 58 germplasm resources， respectively. Germplasm resources in group I were all Dimocarpus confinis resources， germplasm resources in group II were mainly early maturing resources， germplasm resources in group IV were mainly early maturing seedlings. The clustering results showed that there was a certain correlation between the genetic relationship and maturity of litchi.The average observed number of alleles （Na）， the average effective number of alleles（Ne）， the average Shannons information index（I） and the expected heterozygosity（He） were 3.2750， 2.1137， 0.8092 and 0.5107， respectively. The number of germplasm resources in core collection-1， core collection-2 and core collection-3 were 44， 22 and 11 respectively. The genetic diversity parameters Ne， I， and He of core collection-2 were the highest， which were 2.1774， 0.8452 and 0.5271， respectively. Among all the genetic parameters， only Na of core collection-3 was very significantly different from that of original germplasm resources（P<0.01）， and other genetic diversity parameters of the core collections had no significant difference（P>0.05）， indicating that both core collection-1 and core collection-2 could stand for the genetic diversity of original germplasm resources. According to the principle of core collection construction， core collection-2 was determined to be the final core collection of litchi in Guangxi. 【Conclusion】SSR molecular markers are ideal molecular markers suitable for analysis of genetic diversity and construction of litchi core collections. The litchi germplasm resources in Guangxi have relatively narrow genetic background and low genetic diversity. Therefore， the introduction and utilization of litchi germplasm resources in Guangxi should be strengthened in the future.

Key words： litchi; SSR molecular markers; genetic diversity; genetic similarity index; core collection; cluster analysis

Foundation item： China Litchi and Longon Industry Technology Research System Construction Program（CARS-33-03）; Guangxi Natural Science Foundation（2016GXNSFAA380128）;Science and Technology Development Project of Guangxi Academy of Agricultural Sciences（Guinongke 2015YT50; Guinongke 2016ZX06）

0 引言

【研究意義】荔枝（Litchi chinensis Sonn.）為無患子科（Sapindaceae）荔枝屬（Litchi）植物，是南亞熱帶地區(qū)重要的水果（董晨等，2019）。廣西作為我國第二大荔枝主產(chǎn)區(qū)，種質(zhì)資源豐富，在博白縣和浦北縣交界的六萬大山有大面積的野生荔枝。20世紀(jì)80年代吳仁山（1986）編寫的《廣西荔枝志》記載有荔枝品種（單株）64個(gè)。隨后通過資源調(diào)查篩選到一大批具有優(yōu)良性狀的荔枝種質(zhì)資源，并選育出欽州紅荔、貴妃紅、草莓荔、桂荔1號、桂荔2號等品種（朱建華等，2005;李鴻莉等，2017;徐寧等，2017）。廣西擁有豐富的荔枝種質(zhì)資源，可為作物育種和遺傳研究提供廣闊的遺傳基礎(chǔ)，但同時(shí)給種質(zhì)資源的保存利用及相關(guān)研究帶來很大困難。因此，利用分子標(biāo)記技術(shù)開展廣西荔枝種質(zhì)資源遺傳多樣性分析并構(gòu)建核心種質(zhì)，對廣西荔枝種質(zhì)資源的保存、遺傳改良及創(chuàng)新利用具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】核心種質(zhì)是指采用一定方法從整個(gè)種質(zhì)資源中選擇一部分材料，以最小的資源數(shù)量和遺傳重復(fù)性，可最大程度地代表整個(gè)遺傳資源的多樣性，從而便于種質(zhì)保存、評價(jià)及利用。目前，構(gòu)建核心種質(zhì)主要基于形態(tài)標(biāo)記和分子標(biāo)記兩類，其中，形態(tài)標(biāo)記方法簡便，可操作性強(qiáng)，但易受環(huán)境影響，誤差大;分子標(biāo)記方法具有遺傳信息量大、效率高且不受環(huán)境影響等特點(diǎn)，逐漸成為構(gòu)建核心種質(zhì)的主要方法（艾葉等，2019）。用于構(gòu)建核心種質(zhì)的分子標(biāo)記主要有SSR、AFLP和RAPD等，其中SSR分子標(biāo)記具有操作簡便、成本低廉的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于作物遺傳多樣性分析及核心種質(zhì)構(gòu)建（繆黎明等，2016）。至今，利用SSR分子標(biāo)記構(gòu)建的果樹核心種質(zhì)主要有桃（李銀霞等，2007）、蘋果（張春雨等，2009）、葡萄（郭大龍等，2012）和刺梨等（魯敏等，2017），而基于SSR分子標(biāo)記進(jìn)行荔枝遺傳多樣性的研究也有較多報(bào)道。Viruel and Hormaza（2004）開發(fā)出12個(gè)荔枝SSR分子標(biāo)記，并用于對21份來自中國、越南、印度、美國、澳大利亞和泰國的荔枝種質(zhì)資源和4份來自泰國的龍眼種質(zhì)進(jìn)行遺傳多樣性分析，結(jié)果表明12個(gè)SSR分子標(biāo)記可將21份荔枝種質(zhì)資源分為兩大類，且從龍眼中擴(kuò)增出多態(tài)性片段，說明SSR分子標(biāo)記在荔枝及其近緣種的鑒定、遺傳多樣性分析和種質(zhì)保存中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。向旭等（2010）利用30個(gè)EST-SSR分子標(biāo)記對96份來自廣東、廣西、福建、海南和云南等地的荔枝種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析，結(jié)果將這些荔枝種質(zhì)資源分成八大類群，聚類結(jié)果與種質(zhì)生態(tài)類型和植物學(xué)性狀特征基本相符。劉冰浩（2012）利用10個(gè)SSR分子標(biāo)記對廣西荔枝種質(zhì)資源（32份來自博白江寧的野生荔枝種質(zhì)、46份來自欽州貴臺的半野生荔枝種質(zhì)及9個(gè)栽培品種）進(jìn)行遺傳多樣性分析，結(jié)果表明，半野生荔枝種質(zhì)遺傳多樣性較野生荔枝種質(zhì)豐富，栽培品種與野生荔枝種質(zhì)的遺傳距離最遠(yuǎn)，而半野生荔枝種質(zhì)在遺傳物質(zhì)上更接近野生荔枝種質(zhì)。李煥苓等（2018）用SSR和InDel分子標(biāo)記對232份海南荔枝種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析，結(jié)果表明大多數(shù)來自海南的荔枝種質(zhì)聚在一起，說明海南荔枝種質(zhì)資源間親緣關(guān)系較近，遺傳基礎(chǔ)相對較窄?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】廣西的荔枝種質(zhì)資源較豐富，雖然已有針對部分種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析的研究報(bào)道，但未見對廣西荔枝資源進(jìn)行全面收集、系統(tǒng)評價(jià)及遺傳多樣性分析，并構(gòu)建核心種質(zhì)的研究報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】利用SSR分子標(biāo)記對88份荔枝種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性和聚類分析，采用逐步聚類優(yōu)先法構(gòu)建荔枝核心種質(zhì)，為廣西荔枝種質(zhì)的保存、遺傳改良及創(chuàng)新利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試的88份荔枝種質(zhì)資源及其原產(chǎn)地見表1，其中，原產(chǎn)于我國廣西58份、廣東10份、福建5份、海南4份、云南2份、臺灣1份、泰國1份、越南1份、美國3份，另外3份為產(chǎn)于廣西的荔枝近緣種龍荔（編號71、72和73），均取自廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所的荔枝種質(zhì)圃。

主要試劑：Taq DNA聚合酶、dNTPs和DL2000 DNA Marker購自寶生物工程（大連）有限公司;瓊脂糖、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、過硫酸銨、四甲基乙二胺、氫氧化鈉、甲醛和硝酸銀購自南寧恒因生物科技有限公司。所有化學(xué)試劑均為分析純。

主要儀器設(shè)備：PCR儀（Biometra，德國）、紫外分光光度計(jì)（Thermo Fisher，美國）、移液器（Eppendorf，德國）、離心機(jī)（Eppendorf，德國）和電泳儀（北京六一儀器廠）。

1. 2 樣品采集

選取完全展開且無病蟲害的嫩葉裝入保鮮袋中，將其置于冰盒后迅速帶回實(shí)驗(yàn)室，置于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 3 基因組DNA提取

采用改進(jìn)的CTAB法（李冬波等，2007）提取荔枝基因組DNA，用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA完整性，用紫外分光光度計(jì)測定DNA的純度和濃度，用TE緩沖液稀釋至20 ng/μL后放入-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 4 PCR擴(kuò)增與電泳檢測

SSR引物L(fēng)MY3～LMY12和GLE1～GLE30（Vi-ruel and Hormaza，2004;孫清明等，2011）委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成。PCR反應(yīng)體系20.0 μL：20 ng/μL基因組DNA 2.5 μL，2.5 mmol/L dNTPs 0.5 μL，10×PCR緩沖液2.0 μL，10 μmol/L上、下游引物各0.5 μL，5 U/μL Taq DNA聚合酶0.2 μL，用ddH2O補(bǔ)足至20.0 μL。擴(kuò)增程序：94 ℃預(yù)變性4 min;94 ℃ 1 min，50 ℃ 1 min，72 ℃ 2 min，進(jìn)行35個(gè)循環(huán);72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。PCR產(chǎn)物用8%聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測（銀染），最后數(shù)碼相機(jī)拍照保存。

1. 5 統(tǒng)計(jì)分析

SSR是一種共顯性分子標(biāo)記，每個(gè)樣品的SSR擴(kuò)增譜帶按“有”或“無”賦值“1”和“0”，將其轉(zhuǎn)化為“1，0”矩陣。利用NTSYSpc 2.10進(jìn)行遺傳相似性分析。根據(jù)遺傳相似系數(shù)，采用Dice估測遺傳距離，再運(yùn)用非加權(quán)算術(shù)平均配對法（UPGMA）進(jìn)行聚類分析。基于聚類分析結(jié)果，按照原始群體50.00%、25.00%和12.50%的取樣比例，采用多次聚類優(yōu)先取樣法進(jìn)行核心種質(zhì)構(gòu)建。利用DataTrans 1.0將“1，0”矩陣轉(zhuǎn)換為基因型數(shù)據(jù)，利用Popgene 1.32計(jì)算觀測等位基因數(shù)（Na）、有效等位基因數(shù)（Ne）、Shannon信息指數(shù)（I）和期望雜合度（He）等遺傳多樣性參數(shù)，用SPSS 13.0的 t 檢測對所構(gòu)建核心種質(zhì)與原始群體間差異進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 SSR分子標(biāo)記多態(tài)性分析結(jié)果

由表2和表3可看出，40對SSR引物從88份荔枝種質(zhì)資源中共擴(kuò)增出282條清晰的條帶，每對引物擴(kuò)增條帶數(shù)2～13條，平均7.05條，其中，多態(tài)性條帶182條，每對引物擴(kuò)增的多態(tài)性條帶數(shù)1～13條，平均4.55條，每對引物擴(kuò)增條帶的多態(tài)性比率為14.29%～100.00%，平均64.54%。40對SSR引物從88份荔枝種質(zhì)資源中均擴(kuò)增出多態(tài)性條帶，說明選用的SSR引物在荔枝中多態(tài)性較高，適合對廣西荔枝資源進(jìn)行遺傳多樣性分析。SSR引物GLE-26對88份荔枝種質(zhì)資源的擴(kuò)增結(jié)果如圖1所示。

2. 2 廣西荔枝種質(zhì)資源聚類分析結(jié)果

由圖2可知，88份荔枝種質(zhì)資源的遺傳相似系數(shù)為0.83～0.96，說明其遺傳多樣性較低，其中，3個(gè)荔枝近緣種龍荔單株與其他材料遺傳相似系數(shù)最小，為0.83;實(shí)生-4（50）與紅燈籠（52）間的遺傳相似系數(shù)最大，達(dá)0.96;在遺傳相似系數(shù)0.86處，88份荔枝種質(zhì)資源可分為七大類群，其中第Ⅰ類群包含大菉2號（73）、小董1號（72）和龍虎山2號（71）共3份龍荔種質(zhì)資源;第Ⅱ類群包含楠西早熟（75）、BC（70）、火燒荔（83）、臺妃子（65）、水荔（18）、靈山四月半（30）、桂早荔（26）、立夏紅（29）、水東黑葉（15）、蘭竹（55）、四月紅（13）和三月紅（12）共12份種質(zhì)資源，主要為早熟種質(zhì);第Ⅲ類群包含陳紫（5）、99-9（41）、99-6（38）、陀提（6）、99-8（40）和妃子笑（4）共6份種質(zhì)資源;第Ⅳ類群為普寧當(dāng)?shù)兀?8）、德寶早熟（74）、大新3號（77）、靖西1號（76）、褐毛長葉（64）和褐毛大葉（63）共6份種質(zhì)資源，主要為早熟實(shí)生種質(zhì);第Ⅴ類群包含江寧野生荔（80）1份種質(zhì)資源;第Ⅵ類群包含99-7（39）和99-5（37）2份資源;其余58份資源為第Ⅶ類群。綜上所述，荔枝的親緣關(guān)系與熟期存在一定的相關(guān)性。

2. 3 廣西荔枝核心種質(zhì)構(gòu)建結(jié)果

根據(jù)荔枝種質(zhì)資源聚類分析結(jié)果，對88份荔枝種質(zhì)資源進(jìn)行分組，采用逐步聚類法優(yōu)先選擇性狀優(yōu)良材料的原則按原始群體50.00%、25.00%和12.50%的比例分別構(gòu)建3個(gè)候選核心種質(zhì)：核心種質(zhì)-1（44份）、核心種質(zhì)-2（22份）和核心種質(zhì)-3（11份）。其中，核心種質(zhì)-2中的22份荔枝種質(zhì)資源聚類分析結(jié)果如圖3所示。在遺傳相似系數(shù)0.87處22份荔枝種質(zhì)資源聚成11組，采用優(yōu)先選取性狀優(yōu)良材料的原則，在各組內(nèi)選取四兩果（2）、江寧野生荔（80）、草莓荔（24）、陀提（6）、靈山香荔（7）、錦鐘（16）、鵝蛋荔（62）、靖西1號（76）、妃子笑（4）、桂早荔（26）和龍虎山2號（71）共11份荔枝種質(zhì)資源作為核心種質(zhì)-3的入選材料。

2. 4 廣西荔枝核心種質(zhì)的遺傳多樣性評價(jià)

由表3可看出，88份荔枝種質(zhì)資源在40個(gè)SSR分子標(biāo)記位點(diǎn)的Na、Ne、I和He平均值分別為3.2750、2.1137、0.8092和0.5107;核心種質(zhì)-1、核心種質(zhì)-2和核心種質(zhì)-3的種質(zhì)資源數(shù)量分別為44、22和11份，平均每個(gè)位點(diǎn)Na分別是原始群體的96.95%、93.89%和84.73%，其中，核心種質(zhì)-2的Ne、I和He 3個(gè)遺傳多樣性參數(shù)均最高，分別為2.1774、0.8452和0.5271。對原始群體和3組核心種質(zhì)的遺傳多樣性參數(shù)進(jìn)行 t 檢測，結(jié)果顯示，僅核心種質(zhì)-3的Na與原始群體存在極顯著差異（P<0.01），3組核心種質(zhì)的其余遺傳多樣性參數(shù)與原始群體無顯著差異（P>0.05），表明按照原始群體的50.00%和25.00%取樣比例構(gòu)建的核心種質(zhì)-1和核心種質(zhì)-2均能充分代表原始群體的遺傳多樣性。根據(jù)核心種質(zhì)構(gòu)建原則，最終選擇核心種質(zhì)-2作為廣西荔枝核心種質(zhì)。

3 討論

目前，有關(guān)廣西荔枝種質(zhì)資源的遺傳多樣分析研究已有報(bào)道。彭宏祥等（2006）利用7個(gè)AFLP分子標(biāo)記對27份廣西荔枝優(yōu)稀種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣分析，結(jié)果顯示擴(kuò)增條帶的多態(tài)性比例19.51%～45.12%，27份種質(zhì)可聚為七大類群，遺傳相似系數(shù)為0.26～0.86。沈慶慶等（2013）利用10個(gè)ISSR分子標(biāo)記將83份桂西南早熟荔枝實(shí)生資源聚為三大類群，遺傳相似系數(shù)為0.64～0.95。本研究利用40個(gè)SSR標(biāo)記對廣西荔枝種質(zhì)資源圃中具有代表性的種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析，結(jié)果表明，88份荔枝種質(zhì)資源可分為七大類群，遺傳相似系數(shù)范圍（0.83～0.96）低于向旭等（2010）對96份來自國家種質(zhì)圃荔枝資源的遺傳相似系數(shù)范圍（0.35～1.00），說明廣西荔枝種質(zhì)資源遺傳背景相對較窄，今后應(yīng)加強(qiáng)荔枝種質(zhì)資源的引進(jìn)與利用。

根據(jù)前期對荔枝種質(zhì)資源的性狀和來源地調(diào)查，結(jié)合本研究荔枝種質(zhì)聚類分析結(jié)果可看出，第Ⅰ類群中的3份材料為龍荔種質(zhì)資源，與其余荔枝資源間親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，第Ⅱ類群中的12份材料主要為早熟品種，第Ⅳ類群中的6份材料主要為早熟實(shí)生資源，說明種質(zhì)間親緣關(guān)系與熟期存在一定的相關(guān)性，與向旭等（2010）的研究結(jié)論相似。此外，來自云南的褐毛長葉（64）和褐毛大葉（63）與桂西南的早熟荔枝[普寧當(dāng)?shù)兀?8）、德寶早熟（74）、大新3號（77）和靖西1號（76）]聚在一起，說明地理位置相近的種質(zhì)親緣關(guān)系較近，但來自廣東、福建、海南等省及國外的荔枝未全部表現(xiàn)出這一聚類趨勢，其原因可能是世界各地頻繁的引種交流導(dǎo)致種質(zhì)間遺傳背景非常復(fù)雜，地理位置相近的種質(zhì)資源并非總是聚在一起。

構(gòu)建核心種質(zhì)的目的是以最少的種質(zhì)資源數(shù)量和遺傳重復(fù)最大程度地代表原始種質(zhì)的遺傳多樣性，取樣策略和取樣比例是核心種質(zhì)構(gòu)建的關(guān)鍵。目前常用取樣策略有多次聚類隨機(jī)取樣法、優(yōu)先取樣法和偏離度取樣法等3種。其中，優(yōu)先取樣法構(gòu)建的核心種質(zhì)更具有代表性，被廣泛使用（繆黎明等，2016），主要包括位點(diǎn)優(yōu)先和性狀優(yōu)先，前者優(yōu)先選擇具有稀有等位變異和等位變異數(shù)較多的材料，后者優(yōu)先選擇性狀優(yōu)良的材料（卜海東等，2012;常利芳等，2018）。本研究采用多次聚類性狀優(yōu)先取樣法，先利用SSR分子標(biāo)記對其進(jìn)行聚類分組，在選取組內(nèi)遺傳距離較近的材料時(shí)，結(jié)合前期的形態(tài)觀察優(yōu)先選擇性狀優(yōu)良的材料，在保證核心種質(zhì)能將原始種質(zhì)資源的遺傳信息較完整保留下來的同時(shí)，入選核心種質(zhì)的材料性狀更加突出，據(jù)此構(gòu)建的廣西荔枝核心種質(zhì)具有更好的實(shí)用性。本研究按原始群體50.00%、25.00%和12.50%的取樣比例構(gòu)建核心種質(zhì)-1、核心種質(zhì)-2和核心種質(zhì)-3等3個(gè)群體，分別保留了原始群體Na的96.95%、93.89%和84.73%，符合核心種質(zhì)代表原始群體70%～80%以上遺傳多樣性的標(biāo)準(zhǔn)（李自超等，1999）。通過分析3組核心種質(zhì)的遺傳多樣性參數(shù)，發(fā)現(xiàn)核心種質(zhì)-2的Ne、I和He 3個(gè)遺傳多樣性參數(shù)均最高，且僅核心種質(zhì)-3的Na與原始群體存在極顯著差異，3組核心種質(zhì)的其余遺傳多樣性參數(shù)與原始群體無顯著差異，表明按照原始群體的50.00%和25.00%取樣比例構(gòu)建的核心種質(zhì)-1和核心種質(zhì)-2均能充分代表原始群體的遺傳多樣性，而核心種質(zhì)-3較核心種質(zhì)-2減少資源數(shù)量的同時(shí)，降低了原始群體的遺傳多樣性，因此核心種質(zhì)-2更適合作為廣西荔枝核心種質(zhì)。但核心種質(zhì)的構(gòu)建是一個(gè)動態(tài)的過程，今后應(yīng)深入調(diào)查和評價(jià)荔枝種質(zhì)資源，不斷補(bǔ)充和完善廣西荔枝核心種質(zhì)。

4 結(jié)論

SSR分子標(biāo)記是一種適用于荔枝資源遺傳多樣性分析和核心種質(zhì)構(gòu)建的理想分子標(biāo)記。廣西荔枝種質(zhì)資源遺傳背景相對較窄，遺傳多樣性較低，今后應(yīng)加強(qiáng)荔枝種質(zhì)資源的引進(jìn)與利用。

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（責(zé)任編輯 陳 燕）