陳騰祥 梁黎 曾智銳 雷珊 王婧雅 孫遠(yuǎn)梅 蘭金芝 薛燕

摘 要 目的：研究五味子甲素對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞HONE-1增殖、遷移和侵襲的影響及其可能機(jī)制。方法：以HONE-1細(xì)胞為研究模型，使用不同濃度[0（空白對(duì)照）、10、20、40 μmol/L]的五味子甲素處理后，分別采用CCK-8試驗(yàn)、劃痕試驗(yàn)和Transwell小室試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力變化;通過(guò)計(jì)算機(jī)分子對(duì)接分析五味子甲素與酪氨酸蛋白激酶（Met）蛋白的結(jié)合能力;采用Western blotting法檢測(cè)細(xì)胞中磷酸化酪氨酸蛋白激酶（p-Met）、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、B淋巴細(xì)胞瘤2（Bcl-2）和N-鈣黏蛋白（N-cadherin）的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果：與空白對(duì)照比較，10、20、40 μmol/L五味子甲素處理后細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力均顯著減弱（P<0.05）;分子對(duì)接結(jié)果顯示，五味子甲素能與Met蛋白的活性口袋穩(wěn)定結(jié)合;Western blotting試驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照比較，10、20、40 μmol/L五味子甲素處理后細(xì)胞中p-Met、p-PI3K、p-Akt、Bcl-2和N-cadherin蛋白的相對(duì)表達(dá)量均顯著降低（P<0.05）。結(jié)論：五味子甲素可通過(guò)抑制Met/PI3K/Akt信號(hào)通路的活化來(lái)抑制HONE-1細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。

關(guān)鍵詞 五味子甲素;增殖;遷移;侵襲;酪氨酸蛋白激酶;磷脂酰肌醇-3-激酸;蛋白激酶B;人鼻咽癌細(xì)胞HONE-1

ABSTRACT ? OBJECTIVE： To study the effects and potential mechanism of deoxyschizandrin on the proliferation， migration and invasion of nasopharyngeal carcinoma cell HONE-1. METHODS： HONE-1 cell was set as cell model， while CCK-8 test， wound healing assay and Transwell chamber test were used to detect the proliferation， migration and invasion ability changes of HONE-1 cells after treatment with different concentrations [0 （blank control）， 10， 20， 40 μmol/L] of deoxyschizandrin. Computer molecular docking was performed to analyze the binding ability between deoxyschizandrin and Met protein. Western blotting assay was used to detect the relative protein expressions of p-Met， p-PI3K， p-Akt， Bcl-2 and N-cadherin in cells. RESULTS： Compared with blank control， the proliferation， migration and invasion ability of cells after treated with 10， 20， 40 μmol/L deoxyschizandrin were all decreased significantly （P<0.05）. Results of molecular docking revealed that deoxyschizandrin could stably bind with the activity pocket of Met protein. Results of Western blotting assay demonstrated that compared with blank control， 10， 20， 40 ? ? ?μmol/L deoxyschizandrin all decreased the relative protein ?expressions of p-Met， p-PI3K， p-Akt， Bcl-2 and N-cadherin in cells significantly （P<0.05）. CONCLUSIONS： Deoxyschizandrin can inhibit the proliferation， migration and invasion of HONE-1 cell via inhibiting the activation of Met/PI3K/Akt signaling pathway.

KEYWORDS ? Deoxyschizandrin; Proliferation; Migration; Invasion; Met;PI3K;Akt;Human nasopharyngeal carcinoma cell HONE-1

鼻咽癌（Nasopharyngeal cancer）是一種在我國(guó)南部地區(qū)高發(fā)的頭頸部惡性腫瘤，在廣東省的發(fā)病率很高，故也被稱為“廣東癌”。目前，針對(duì)鼻咽癌的主要治療手段為放療，但放療后患者的總生存率仍低于50%，且大部分患者在治療后3～5年內(nèi)會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)、化療耐受等情況[1-2]，因此迫切需要挖掘新的治療鼻咽癌的藥物。

酪氨酸蛋白激酶（Met）也稱為c-Met，是一種受體酪氨酸激酶，在上皮細(xì)胞中廣泛表達(dá)。在生理作用下，Met通過(guò)調(diào)控多個(gè)酪氨酸激酶[如磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）和Rac家族GTP酶 1（RAC-1）]的磷酸化，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、遷移和分化等各項(xiàng)生物學(xué)功能[3]。在鼻咽癌患者中，Met表達(dá)升高，且與患者的不良預(yù)后相關(guān)[4]。此外，PI3K/蛋白激酶B （Akt）信號(hào)通路在鼻咽癌中呈異?；罨赏ㄟ^(guò)調(diào)控B淋巴細(xì)胞瘤2（Bcl-2）等增殖相關(guān)因子和N-鈣黏蛋白（N-cadherin）等遷移相關(guān)因子的表達(dá)，促進(jìn)鼻咽癌的進(jìn)展;而Met可以通過(guò)促進(jìn)PI3K的磷酸化從而激活PI3K/Akt信號(hào)通路[5-6]。多項(xiàng)研究表明，通過(guò)基因工程或藥理學(xué)手段抑制Met的表達(dá)或活性，能夠抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。例如人工合成的Met抑制劑PF-2341066能夠顯著抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖，并與常規(guī)化療藥物順鉑有協(xié)同作用[7];再如利用慢病毒過(guò)表達(dá)miR-34c抑制Met的表達(dá)，能夠抑制鼻咽癌的侵襲性[8]。

中藥是我國(guó)重要的資源寶庫(kù)，五味子甲素是中藥五味子中的有效成分之一。本課題組早期研究發(fā)現(xiàn)，五味子甲素能夠抑制多種腫瘤細(xì)胞（如肝癌和胰腺癌細(xì)胞等）的增殖和遷移[9-10]。然而，五味子甲素對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響及作用機(jī)制仍不清楚。因此，本研究旨在探討五味子甲素對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞HONE-1增殖、遷移和侵襲的影響以及其分子機(jī)制，為臨床治療鼻咽癌提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

SW-CJ-1F（D）型單人工作臺(tái)（蘇州蘇凈安泰生物公司）;BPN-80RNP型二氧化碳培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）;Multiskan GO型多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）;SZX16型倒置光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）;DYCZ-24K型電泳儀、DYCZ-40D型轉(zhuǎn)膜儀（北京六一生物科技有限公司）;GelDoc XR+型凝膠成像儀（美國(guó)Bio-Rad公司）。

1.2 藥品與試劑

五味子甲素對(duì)照品（美國(guó)Med Chem Express公司，批號(hào)：HY-N0693，純度：>98%）;DMEM高糖細(xì)胞培養(yǎng)基、胎牛血清（FBS）（美國(guó)Gibco公司，批號(hào)：8120103、SA211.02）;0.25%胰蛋白酶溶液（美國(guó)Multicell公司，批號(hào)：325043032）;CCK-8試劑（武漢博士德生物工程有限公司，批號(hào)：15E27C60）;Transwell小室（美國(guó)Corning公司，批號(hào)：30419069）;Matrigel膠（美國(guó)BD公司，批號(hào)：354263）;RIPA裂解液、蛋白酶抑制劑PMSF（武漢賽維爾生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：G2002-100、G2008-01D）;十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）試劑盒、二喹啉甲酸（BCA）定量試劑盒（大連美侖生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：MA0388-08F、MA0082-02C）;兔源Met多克隆抗體、鼠源PI3K單克隆抗體、兔源Akt多克隆抗體、兔源Bcl-2多克隆抗體、兔源N-cadherin多克隆抗體、鼠源β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）單克隆抗體（武漢三鷹生物技術(shù)公司，批號(hào)：25869、60225、10176、12789、22018、60008）;兔源磷酸化PI3K（p-PI3K）多克隆抗體、兔源磷酸化Akt（p-Akt）多克隆抗體（美國(guó)CST公司，批號(hào)：17366、4060）;辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔二抗、HRP標(biāo)記的山羊抗鼠二抗（武漢愛(ài)博泰克生物科技有限公司，批號(hào)：AS014、AS003）;ECL高敏曝光液（武漢聚能慧達(dá)生物有限公司，批號(hào)：36222ES60）;二甲基亞砜（DMSO）等其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格，水為雙蒸水。

1.3 細(xì)胞

人鼻咽癌細(xì)胞HONE-1由貴州省腫瘤醫(yī)院腫瘤科饋贈(zèng)。

2 方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

將HONE-1細(xì)胞用含10%FBS的DMEM高糖培養(yǎng)基在37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)85%時(shí)，用0.25%胰蛋白酶溶液進(jìn)行消化、傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于后續(xù)研究。

2.2 CCK-8試驗(yàn)檢測(cè)五味子甲醇對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響

將細(xì)胞用0.25%胰蛋白酶溶液消化后，以1 000 ? ? ?r/min離心5 min，收集細(xì)胞，用含10%FBS的DMEM高糖培養(yǎng)基重懸，制備成密度為2×104個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，按100 μL/孔接種至96孔板。將細(xì)胞分為空白對(duì)照組（含0.4%DMSO）和五味子甲素不同濃度組（10、20、40 ? ?μmol/L，含4%DMSO），每組設(shè)置6個(gè)復(fù)孔。同時(shí)設(shè)置不加細(xì)胞和藥物的調(diào)零孔。將各組細(xì)胞置于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜，然后加入相應(yīng)藥物，繼續(xù)培養(yǎng)24、48 h。吸棄培養(yǎng)基，按100 μL/孔的量加入CCK-8溶液（將CCK-8試劑與DMEM高糖培養(yǎng)基以體積比1 ∶ 9混合），繼續(xù)培養(yǎng)2 h后，采用多功能酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)量每孔的吸光度（OD）值，并計(jì)算各組細(xì)胞的相對(duì)增殖率[細(xì)胞相對(duì)增殖率（%）=（五味子甲素給藥組OD值-調(diào)零孔OD值）/（空白對(duì)照組OD值-調(diào)零孔OD值）×100%]。試驗(yàn)重復(fù)3次。

2.3 細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力

將細(xì)胞按“2.2”項(xiàng)下方法消化、離心、收集并重懸，制備成密度為1×105個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，按2 mL/孔的量接種至6孔板。將細(xì)胞分為空白對(duì)照組（含0.4%DMSO）和不同濃度五味子甲素組（10、20、40 μmol/L，含0.4%DMSO），每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。將細(xì)胞置于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)95%以上時(shí)，用200 μL移液槍頭在每個(gè)孔中的單層細(xì)胞上劃線，然后以PBS洗滌2次后，各孔加入相應(yīng)藥物，繼續(xù)培養(yǎng)0、24 h后，于倒置顯微鏡下觀察。隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行拍照，使用Image Pro Plus 6.0軟件測(cè)量劃痕面積，并根據(jù)0 h與24 h時(shí)的劃痕面積差值計(jì)算細(xì)胞的遷移率[遷移率（%）=（給藥0 h時(shí)的劃痕面積-給藥24 h時(shí)的劃痕面積）/給藥0 h時(shí)的劃痕面積×100%]。試驗(yàn)重復(fù)3次。

2.4 Transwell小室試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力

將Matrigel膠和無(wú)血清DMEM高糖培養(yǎng)基按1 ∶ 8的體積比混勻，鋪于Transwell上室，并置于37 ℃培養(yǎng)箱中烘干，棄掉多余的培養(yǎng)基。將細(xì)胞按“2.2”項(xiàng)下方法消化、離心、收集并重懸，制備成密度為2×105個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，用移液槍分別吸取200 μL加入到Transwell上室，再分別加入0（空白對(duì)照）、10、20、40 μmol/L的五味子甲素（均含0.4%DMSO），每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)樣本。在下室中加入700 μL含10%FBS的DMEM高糖培養(yǎng)基。培養(yǎng)24 h后，使用4%多聚甲醛固定小室，用PBS漂洗2次，然后用0.1%結(jié)晶紫染色15 min。擦拭掉非侵襲細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察，計(jì)數(shù)每孔轉(zhuǎn)移至微孔膜下層的細(xì)胞數(shù)，每個(gè)樣本隨機(jī)選擇5個(gè)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)。試驗(yàn)重復(fù)3次。

2.5 計(jì)算機(jī)分子對(duì)接分析五味子甲素與Met蛋白的結(jié)合能力

從在線數(shù)據(jù)庫(kù)PubChem Compound（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/pccompound/）中下載五味子甲素的三維結(jié)構(gòu)文件（SDF格式）。從在線數(shù)據(jù)庫(kù)Protein Data Bank（PDB，https：//www.rcsb.org/）中下載Met蛋白的晶體結(jié)構(gòu)文件（該蛋白在PDB數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索ID號(hào)：3DKF）。將Met蛋白的晶體結(jié)構(gòu)文件導(dǎo)入到SYBYL 1.3軟件中，刪除原配體、修復(fù)氨基端和羧基端的黏性末端后，以自動(dòng)識(shí)別模式根據(jù)蛋白序列鑒定蛋白的活性口袋;再導(dǎo)入五味子甲素的三維結(jié)構(gòu)文件，以柔性對(duì)接模式進(jìn)行對(duì)接。根據(jù)結(jié)合評(píng)分（C-score：0～5）判斷分子與蛋白活性口袋結(jié)合的穩(wěn)定性，C-score在4～5分范圍則可認(rèn)為分子與蛋白能夠穩(wěn)定結(jié)合[11]。

2.6 Western blotting法檢測(cè)細(xì)胞中Met/PI3K/Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況

將細(xì)胞按“2.2”項(xiàng)下方法消化、離心、收集并重懸，制備成密度為1×105個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，按2 mL/孔接種至6孔板。將細(xì)胞置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后，分別加入0（空白對(duì)照）、10、20、40 μmol/L的五味子甲素（均含0.4%DMSO）培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)束后，吸棄培養(yǎng)基，加入RIPA裂解液和PMSF蛋白酶抑制劑混合液（體積比為100 ∶ 1），在冰上裂解細(xì)胞15 min，然后在4 ℃下以12 000 r/min離心30 min，吸取蛋白上清液，用BCA法進(jìn)行蛋白定量。蛋白經(jīng)變性處理后，取25 μg經(jīng)10%SDS-PAGE在90 V恒定電壓下電泳2 h，300 mA恒流2 h轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯（PVDF）膜上，以5%脫脂牛奶室溫封閉2 h;分別加入Met、p-Met、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2、N-cadherin和GAPDH一抗（稀釋比例均為1 ∶ 1 000），在4 ℃下孵育過(guò)夜;TBST漂洗5 min×3次，加入山羊抗兔二抗和山羊抗鼠二抗（稀釋比例均為1 ∶ 2 000），在室溫?fù)u床中孵育2 h;TBST漂洗5 min×3次，滴加ECL高敏曝光液，于Bio-Rad成像儀中進(jìn)行顯影。以Image Lab 5.2.1軟件測(cè)定條帶的灰度值后，p-Met以Met為內(nèi)參，p-PI3K以PI3K為內(nèi)參，p-Akt以Akt為內(nèi)參，Bcl-2和N-cadherin以GAPDH為內(nèi)參，計(jì)算目標(biāo)蛋白條帶與內(nèi)參蛋白條帶灰度值的比值以表示目標(biāo)蛋白的相對(duì)表達(dá)量。試驗(yàn)重復(fù)3次。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 五味子甲素對(duì)HONE-1細(xì)胞增殖的影響

與空白對(duì)照（0 μmol/L）比較，10、20、40 μmol/L五味子甲素處理24、48 h后細(xì)胞的增殖率均顯著降低（P<0.05或P<0.01），且具有一定的濃度依賴性趨勢(shì)，提示五味子甲素能夠顯著抑制HONE-1細(xì)胞的增殖。不同濃度五味子甲素作用24、48 h后細(xì)胞增殖率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2 五味子甲素對(duì)HONE-1細(xì)胞遷移能力的影響

與空白對(duì)照（0 μmol/L）比較，10、20、40 μmol/L五味子甲素處理24 h后細(xì)胞的遷移率均顯著降低（P<0.01），提示五味子甲素能夠顯著抑制HONE-1細(xì)胞的遷移。不同濃度五味子甲素作用24 h后細(xì)胞遷移情況顯微圖見(jiàn)圖1，遷移率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

3.3 五味子甲素對(duì)HONE-1細(xì)胞侵襲能力的影響

與空白對(duì)照（0 μmol/L）比較，10、20、40 μmol/L五味子甲素處理24 h后每視野下侵襲細(xì)胞數(shù)均顯著減少（P<0.01），提示五味子甲素能夠顯著抑制HONE-1細(xì)胞的侵襲。不同濃度五味子甲素作用24 h后細(xì)胞侵襲情況顯微圖見(jiàn)圖2，每視野下侵襲細(xì)胞數(shù)見(jiàn)表2。

3.4 五味子甲素與Met蛋白的活性口袋分子對(duì)接結(jié)果

分子對(duì)接結(jié)果顯示，五味子甲素能與Met蛋白的活性口袋穩(wěn)定結(jié)合（C-score=5），并且“包埋”在Met的活性口袋內(nèi)，這提示五味子甲素發(fā)揮其生物學(xué)功能可能是通過(guò)影響Met蛋白及其下游信號(hào)通路來(lái)介導(dǎo)的。五味子甲素的三維結(jié)構(gòu)及其與Met蛋白的活性口袋分子對(duì)接情況見(jiàn)圖3。

3.5 五味子甲素對(duì)HONE-1細(xì)胞中Met/PI3K/Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與空白對(duì)照（0 μmol/L）比較，10、20、40 μmol/L五味子甲素處理24 h后細(xì)胞中p-Met、p-PI3K、p-Akt、Bcl-2和N-cadherin蛋白的相對(duì)表達(dá)量均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。不同濃度五味子甲素作用24 h后細(xì)胞中p-Met、p-PI3K、p-Akt、Bcl-2和N-cadherin蛋白表達(dá)的電泳圖見(jiàn)圖4，蛋白相對(duì)表達(dá)量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

4 討論

雖然當(dāng)前鼻咽癌以現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的治療方法（放療聯(lián)合化療）為主，但是中醫(yī)藥方面一直積極參與探索。中醫(yī)藥辨證論治在中晚期鼻咽癌和術(shù)后不良反應(yīng)中發(fā)揮了重要的作用，其優(yōu)點(diǎn)有降低毒副作用、顯著減輕癥狀或延長(zhǎng)帶瘤生存期等[12]。

目前，多種中藥及其有效成分展示了良好的抗鼻咽癌活性，如山楂酸能通過(guò)PI3K/Akt/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號(hào)通路誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞自噬，進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖[13];蘿卜硫素能夠顯著誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞凋亡[14];苦參堿衍生物能夠通過(guò)增加抑癌miRNA（如miR-146b-5p）的表達(dá)，抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[15]。五味子甲素是一種從五味子果實(shí)中提取出來(lái)的具有生物活性的木脂素成分，具有抗炎、抗腫瘤和抗纖維化等多方面的藥理學(xué)作用[16]。本研究通過(guò)CCK-8試驗(yàn)、劃痕試驗(yàn)和Transwell小室試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，五味子甲素處理后，人鼻咽癌細(xì)胞HONE-1的增殖、遷移和侵襲能力均明顯減弱，這提示五味子甲素具有良好的抗鼻咽癌活性。

Met蛋白是由位于7號(hào)染色體上的Met原癌基因編碼的，具有酪氨酸激酶作用的跨膜受體，其配體是肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，當(dāng)其與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子結(jié)合后，Met蛋白被磷酸化激活[17]。已有臨床研究表明，在鼻咽癌細(xì)胞放射治療過(guò)程中Met蛋白可以被異常激活，繼而引起鼻咽癌細(xì)胞放化療耐受[18-19]。此外，還有研究表明，Met蛋白的表達(dá)與鼻咽癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)[20-21]。過(guò)往研究中，多種針對(duì)Met蛋白的抑制劑均展示出了良好的抗腫瘤效果。本研究通過(guò)計(jì)算機(jī)分子對(duì)接發(fā)現(xiàn)，五味子甲素能夠與Met蛋白的活性口袋穩(wěn)定結(jié)合。通過(guò)Western blotting試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，五味子甲素能夠抑制Met蛋白的磷酸化。而Met蛋白磷酸化后可以激活PI3K-Akt、促分裂原活化蛋白激酶 （MAPK）、信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子（STAT）等信號(hào)分子[22-23]。目前，已有研究證實(shí)，由Met介導(dǎo)活化的PI3K/Akt通路與鼻咽癌的多種惡性生物學(xué)行為如異常增殖、放化療耐受、血管形成及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)[24]。本研究進(jìn)一步通過(guò)Western bloting試驗(yàn)檢測(cè)了五味子甲素對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路及其下游蛋白Bcl-2、N-cadherin表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)其能夠顯著抑制PI3K/Akt信號(hào)通路的活化及其下游蛋白Bcl-2、N-cadherin的表達(dá)。

綜上所述，五味子甲素能夠通過(guò)抑制Met/PI3K/Akt信號(hào)通路的活化來(lái)抑制鼻咽癌細(xì)胞HONE-1的增殖、遷移和侵襲。五味子甲素有望開發(fā)為一種良好的抗鼻咽癌藥物，但還需要更多的研究進(jìn)一步證實(shí)。

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（收稿日期：2020-07-04 修回日期：2020-08-17）

（編輯：林 靜）