陳國(guó)軍

廣東省臺(tái)山市中醫(yī)院(廣東 臺(tái)山 529200)

血液病指的是原發(fā)于骨髓造血系統(tǒng)的疾病，具有發(fā)熱、出血、貧血、肝脾和/或淋巴結(jié)腫大等臨床表現(xiàn)[1]。白血病是由于患者骨髓造血功能紊亂導(dǎo)致白血病細(xì)胞惡性增殖的一種血液病。按照細(xì)胞的自然病程及分化程度進(jìn)行劃分，白血病具有兩種不同類型，一是慢性白血?。欢羌毙园籽?。第二種白血病包括急性髓細(xì)胞白血病(AML)及急性淋巴結(jié)細(xì)胞白血病(ALL)。急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)是急性髓細(xì)胞白血病(AML)的一種特殊類型，被法美英(FAB)協(xié)作組定義為急性髓細(xì)胞白血病M3型(簡(jiǎn)稱AML-M3)。隨著工業(yè)經(jīng)濟(jì)的迅猛發(fā)展，我國(guó)環(huán)境遭遇嚴(yán)重污染，加上飲食結(jié)構(gòu)不合理，急性早幼粒細(xì)胞白血病發(fā)生率呈上升趨勢(shì)[2]。現(xiàn)階段，臨床診斷血液病的方法包括細(xì)胞遺傳學(xué)檢查、免疫分型、骨髓活檢、血液形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)等[3]，然而單一檢查往往極易漏診、誤診。為探究骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)聯(lián)合免疫分型及細(xì)胞遺傳學(xué)在血液病中的診斷價(jià)值，本次研究選取2013年1月-2017年12月期間我院收治的82例白血病患者作為研究對(duì)象，詳細(xì)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2013年1月-2017年12月期間我院收治的82例疑似白血病患者作為研究對(duì)象。男性49例，女性33例；年齡范圍15～78歲，均值(42.69±8.98)歲。初診WBC中位數(shù)27.98×109/L，范圍2.0～221.65(109/L)；初診Hb中位數(shù)74g/L，范圍(24～92)g/L。

1.2方法 由兩名資深骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)專家對(duì)本研究中82例白血病患者的骨髓涂片標(biāo)本重新進(jìn)行閱片。在診斷出現(xiàn)分歧情況下，則要邀請(qǐng)第三位骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)專家對(duì)其進(jìn)行閱診，將患者的臨床表現(xiàn)、血液學(xué)專家意見、相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果、預(yù)后相結(jié)合，最終做出診斷[4]。

采集骨髓標(biāo)本2～3mL于抗凝管，置于15～25℃保存，制備樣本待測(cè)，所有樣本在獲取6h內(nèi)處理。檢查方法：1)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查常規(guī)使用瑞氏過氧化物酶(POx)染色，光學(xué)顯微鏡下對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)分型診斷。2)細(xì)胞免疫學(xué)檢查取抗凝骨髓液2而，常規(guī)分離單個(gè)骨髓核細(xì)胞，采用熒光顯微鏡間接免疫熒光法測(cè)定，單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)貝克曼公司和BD公司，流式細(xì)胞儀由BD公司生產(chǎn)，嚴(yán)格按說明書操作。判斷標(biāo)準(zhǔn):淋系抗陽性細(xì)胞>30%，髓系及干組系抗原>20%，非系列特異性抗原及其干組抗原>20%為陽性，分型判斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)國(guó)際白血病歐洲協(xié)作組(EGI)L標(biāo)準(zhǔn)。3)單一細(xì)胞遺傳學(xué)——染色體檢查。選擇肝素抗凝骨髓液，直接法以及24h 培養(yǎng)法來制備染色體標(biāo)本，然后再用反帶技術(shù)顯帶，按照1995 年制定的《人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)標(biāo)命名體制》(ISCN))核型描述。

1.3觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)單一形態(tài)學(xué)、單一免疫學(xué)分型、單一細(xì)胞遺傳學(xué)、三者聯(lián)合診斷的診斷診斷靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。其中，A真陽性，B假陽性，C假陰性，D真陰性。靈敏度=A/(A+C)；特異度=D/(B+D)；陽性預(yù)測(cè)值=A/(A+B)×100%，陰性預(yù)測(cè)值=D/(C+D)×100%；3個(gè)指標(biāo)聯(lián)合診斷過程中，在進(jìn)行結(jié)果評(píng)估的時(shí)候，至少兩個(gè)指標(biāo)結(jié)果為陽性，才能判斷為陽性[5-6]。診斷符合率=(真陽性+真陰性)/總例數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1不同檢查的診斷結(jié)果

2.1.1 形態(tài)學(xué)分型

經(jīng)過病理學(xué)檢查，APL陽性、陰性分別為71例、11例。通過形態(tài)學(xué)分型而診斷陽性為69例，陰性為13例。診斷符合率=(真陽性+真陰性)/總例數(shù)×100%=69/82×100%=84.15%。69正確診斷，63例正確診斷為APL，5例正確診斷為非APL。63例中，其中診斷為M3a者30例，M3b者28例，M3v者5例。

2.1.2 免疫學(xué)分型

免疫學(xué)分型檢查診斷為陽性為68例，陰性為14例。診斷符合率=(真陽性+真陰性)/總例數(shù)×100%=68/82×100%=82.83%。68例正確診斷，60例正確診斷為APL，8例正確診斷為非APL。其中，60例中，58例患者表現(xiàn)為CD33+和CD13+陽性共表達(dá)，共表達(dá)率達(dá)96.67%；而CD33+或CD13+單陽性表達(dá)者僅各為1例。

2.1.3 遺傳學(xué)檢查

遺傳學(xué)檢查診斷為陽性為68例，陰性為14例。診斷符合率=(真陽性+真陰性)/總例數(shù)×100%=67/82×100%=81.71%。67例正確診斷，60例正確診斷為APL，7例正確診斷為非APL。遺傳學(xué)檢查診斷為陽性為68例，有60例出現(xiàn)APL特征性染色體核型異常，占88.24%，其中55例染色體核型為t(15；17)(q22；q21)100%易位(單純型)；5例中除見到t(15；17)染色體核型改變外，還伴有其它核型異常(復(fù)雜型)，受累染色體包括1，9，11，12和21號(hào)。

2.2對(duì)比不同檢查診斷靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值 三者聯(lián)合診斷靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均高于單獨(dú)檢查的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值，對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中，單一形態(tài)學(xué)檢查靈敏度為88.73%，特異度為45.45%，陽性預(yù)測(cè)值為91.30%，陰性預(yù)測(cè)值為38.46%，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)聯(lián)合免疫分型及細(xì)胞遺傳學(xué)聯(lián)合診斷的靈敏度為98.55%，特異度為84.62%，陽性預(yù)測(cè)值為97.14%，陰性預(yù)測(cè)值為91.67%，詳見表1。

表1 統(tǒng)計(jì)不同檢查的診斷靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值

3 討論

血液疾病病因比較復(fù)雜，目前可能病因包括以下幾方面：一是化學(xué)因素，包括接受烷化劑治療、苯及含苯的有機(jī)溶劑[7]；二是物理因素[8]，包括γ射線及X射線。血液疾病中，最為常見的是白血病[9]。與其他類型白血病對(duì)比，APL主要是由于烷化劑治療、含苯有機(jī)溶劑等化學(xué)因素所引起的；在遺傳因素方面，同卵雙胎中，倘若其中一個(gè)診斷白血病，則另外一個(gè)白血病發(fā)生率高達(dá)20%，明顯高于雙卵孿生者[10]。

對(duì)于血液疾病，現(xiàn)階段實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)為其確診方法及療效觀察的最重要手段，其方法多種多樣，包括細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)以及形態(tài)學(xué)等檢查，其中診斷血液病的基礎(chǔ)為形態(tài)學(xué)檢查。對(duì)血液病進(jìn)行診斷的第一道程序?yàn)檠Ｒ?guī)檢查，這也是分析、診斷血液病的起點(diǎn)[11]。臨床上通常會(huì)通過血常規(guī)檢查來對(duì)血液疾病進(jìn)行初篩診斷，可以將其粗分為外周血涂片和血常規(guī)兩種方式。而骨髓穿刺涂片作細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)聯(lián)合血涂片檢驗(yàn)是確診血液系統(tǒng)疾病的最主要手段。

免疫學(xué)分型也就是流式細(xì)胞術(shù)(FCM)。FCM是將單克隆抗體、流體力學(xué)、免疫熒光、計(jì)算機(jī)等技術(shù)相結(jié)合，在單細(xì)胞水平上測(cè)量細(xì)胞形態(tài)、大小和熒光等特征，其檢測(cè)快速、簡(jiǎn)便，特異性好、敏感度高，能對(duì)大量細(xì)胞進(jìn)行定量分析，使用的單克隆抗體容易購(gòu)買，價(jià)格相對(duì)便宜，便于臨床推廣[12]。但在FCM分析時(shí)特別注意：細(xì)胞的分化成熟、細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)及其分化抗原的逐漸增減是漸進(jìn)過程、非突變，故同時(shí)獲知一個(gè)細(xì)胞的多種參數(shù)方能正確判斷細(xì)胞屬性。細(xì)胞免疫學(xué)分型可供的標(biāo)本種類有骨髓、外周血、腦脊液及其他體液，既克服了形態(tài)學(xué)分型方法的繁瑣、個(gè)人直觀等缺點(diǎn)，又具有簡(jiǎn)單、快速，計(jì)數(shù)細(xì)胞量大且靈敏度高及準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)血液疾病的診斷及分型起到極大的作用[13]。

很多血液系統(tǒng)疾病特別是白血病都會(huì)發(fā)生基因或染色體結(jié)構(gòu)的改變，其中很多還是特征性的改變。細(xì)胞遺傳學(xué)檢查在血液系統(tǒng)疾病的診斷、治療中發(fā)揮著舉足輕重的作用，尤其針對(duì)骨髓形態(tài)學(xué)檢查不典型的血液病，通過對(duì)疾病特征性染色體變化的高檢出率，大大提高了疾病的診斷率。

本次研究中，三者聯(lián)合診斷靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均高于單一形態(tài)學(xué)、單一免疫分型、單一細(xì)胞遺傳學(xué)，對(duì)比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。其中，單一形態(tài)學(xué)檢查靈敏度為88.73%，特異度為45.45%，陽性預(yù)測(cè)值為91.30%，陰性預(yù)測(cè)值為38.46%，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)聯(lián)合免疫分型及細(xì)胞遺傳學(xué)聯(lián)合診斷的靈敏度為98.55%，特異度為84.62%，陽性預(yù)測(cè)值為97.14%，陰性預(yù)測(cè)值為91.67%。

綜上所述，臨床上血液疾病的診斷治療應(yīng)以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，再結(jié)合免疫學(xué)分析、細(xì)胞遺傳學(xué)、骨髓活檢等聯(lián)合檢測(cè)，可以提高診斷準(zhǔn)確率及療效觀察。骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)聯(lián)合免疫分型及細(xì)胞遺傳學(xué)在血液病中，具有較高的診斷效能，值得推廣。