蔡路兵 翟梅娟 陳曉丹

[摘要] 目的 研究多腫瘤抑制基因P16、細(xì)胞增殖核抗原Ki-67表達(dá)與直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系。 方法 選擇2016年8月—2018年12月浙江省杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院60例直腸癌患者術(shù)后的腫瘤及癌旁正常組織，以免疫組織法檢測P16、Ki-67的表達(dá)情況，觀察P16、Ki-67在不同年齡、病理類型、TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移中的陽性率，比較P16、Ki-67陽性患者與陰性患者術(shù)后1年的生存情況，通過Spearman系數(shù)分析P16和Ki-67的相關(guān)性。 結(jié)果 直腸癌癌組織中P16及Ki-67的陽性率顯著高于癌旁正常組織（P < 0.05）。TNM分期Ⅲ期、高分化程度患者P16、Ki-67陽性率顯著高于TNM分期Ⅱ期、低-中分化患者（P < 0.05）;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Ki-67陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者P16陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（均P < 0.05）。P16陰性患者生存率顯著高于陽性患者（P < 0.05）。Ki-67陽性患者1年生存率顯著低于Ki-67陰性患者（P < 0.05）。經(jīng)相關(guān)性分析P16和Ki-67直腸癌組織中的表達(dá)無相關(guān)性（r = 0.157，P = 0.461）。 結(jié)論 直腸癌癌組織內(nèi)P16和Ki-67水平表達(dá)與直腸癌臨床病理特征密切相關(guān)，可能為直腸癌的臨床治療及預(yù)后評(píng)估提供參照。

[關(guān)鍵詞] 多腫瘤抑制基因;細(xì)胞增殖核抗原;直腸癌;預(yù)后;預(yù)測

[中圖分類號(hào)] R735.34 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1673-7210（2020）08（b）-0024-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between the expression of multipletumor-suppressor gene1 P16 and proliferating cellnuclear antigen Ki-67 and the prognosis of rectal cancer patients. Methods From August 2016 to December 2018， postoperative tumors and adjacent normal tissues of 60 patients with rectal cancer were selected from the First People′s Hospital of Xiaoshan District of Hangzhou， Zhejiang Province. Immunohistochemical method was used to detect the expression of P16 and Ki-67. The positive rates of P16 and Ki-67 in different ages， pathological types， TNM stages， degree of differentiation and lymph node metastasis were observed. The survival of P16 and Ki-67 positive patients and negative patients one year after surgery was compared. Finally， the correlation between P16 and Ki-67 was analyzed by Spearman coefficient. Results The positive rates of P16 and Ki-67 in colorectal cancer tissues were significantly higher than that in paracancer normal tissues （P < 0.05）. TNM staging in patients with stage Ⅲ， high degree of differentiation P16 and Ki-67 were significantly higher than that of TNM stage Ⅱ， low-differentiation in patients （P < 0.05）; the Ki-67 positive rate of patients with lymph node metastasis was significantly higher than that of patients without lymph node metastasis， and the P16 positive rate of patients with lymph node metastasis was significantly higher than that of patients without lymph node metastasis（all P < 0.05）. The survival rate of P16 negative patients was significantly higher than that of positive patients （P < 0.05）. The one-year survival rate of Ki-67 positive patients was significantly lower than that of negative patients （P < 0.05）. There was no correlation between the expression of P16 and Ki-67 in rectal cancer tissues （r = 0.157， P = 0.461）. Conclusion The expression levels of P16 and Ki-67 in rectal cancer tissues are closely related to the clinicopathological features of rectal cancer， which may provide reference for the clinical treatment and prognosis evaluation of rectal cancer.

[Key words] Multiple tumor suppressor gene; Cell proliferating nuclear antigen; Rectal cancer; Prognosis; Predict

直腸癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，近年來我國生活水平的不斷提高以及人口老齡化加劇，直腸癌發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì)[1-2]。目前直腸癌治療多以外科手術(shù)為主，但因?yàn)橹蹦c癌位置低深入盆腔，解剖關(guān)系較復(fù)雜，導(dǎo)致術(shù)后復(fù)發(fā)率高，預(yù)后情況不容樂觀[3]。過去有關(guān)直腸癌預(yù)后的研究多集中在臨床、病理指標(biāo)方面，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，越來越多的分子生物學(xué)標(biāo)志物與腫瘤預(yù)后關(guān)系研究已成為趨勢(shì)[4]。多腫瘤抑制基因P16是一種蛋白標(biāo)志物，細(xì)胞增殖核抗原Ki-67是一種被發(fā)現(xiàn)于增殖細(xì)胞的核抗原。本研究選擇浙江省杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院（以下簡稱“我院”）60例直腸癌患者為研究對(duì)象，探討活檢組織內(nèi)P16、Ki-67表達(dá)與直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2016年8月—2018年12月60例直腸癌患者為研究對(duì)象，其中男39例，女21例;年齡34～79歲，平均（46.23±3.34）歲;腫瘤直徑2～5 cm，平均（3.42±1.21）cm;TNM分期：Ⅱ期26例，Ⅲ期34例;分化程度：高分化43例，中分化5例，低分化12例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

①經(jīng)《結(jié)直腸癌診療規(guī)范（2010年版）》[5]確診為直腸癌;②18～65歲;③患者及其家屬知情并簽署知情同意書。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

①妊娠期或哺乳期婦女;②心、肝、腎等器官存在嚴(yán)重器質(zhì)性障礙或其他惡性腫瘤者;③合并其他疾病同期需行其他手術(shù)治療者;④患有精神方面疾病不能配合治療者。

1.4 治療方法

60例患者均在手術(shù)結(jié)束后取腫瘤及癌旁正常組織檢測P16及Ki-67，其中癌旁組織于大于腫瘤2 cm處取材，P16及Ki-67均行免疫組化SP法檢測，試劑盒均由上海心語生物科技有限公司提供，檢測儀器：意大利BT 3000 plus全自動(dòng)生化分析儀。

1.5 觀察指標(biāo)

①直腸癌癌組織與癌旁組織P16及Ki-67免疫組化SP法檢查結(jié)果比較，對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行判定：P16以細(xì)胞核或細(xì)胞漿中棕黃色為陽性，Ki-67以細(xì)胞核褐色為陽性。②觀察P16及Ki-67在不同年齡、病理類型、腫瘤直徑、TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移中的陽性率。③對(duì)患者進(jìn)行1年的隨訪（返院復(fù)查或電話隨訪），比較P16、Ki-67陽性和陰性患者生存情況。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

選用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采取Kaplan-Meier法繪制生存曲線，采取Log-Rank檢驗(yàn)，通過Spearman系數(shù)對(duì)P16和Ki-67進(jìn)行相關(guān)性分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 直腸癌癌組織與癌旁組織P16、Ki-67檢查結(jié)果比較

直腸癌癌組織中P16、Ki-67的陽性率顯著高于癌旁正常組織（P < 0.05）。見表1、圖1（封三）。

2.2 P16、Ki-67在直腸癌癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

TNM分期Ⅲ期、高分化程度患者P16、Ki-67陽性率顯著高于TNM分期Ⅱ期、低-中分化患者（P < 0.05）;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Ki-67陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者P16陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（均P < 0.05）。見表2。

2.3 P16陽性和陰性患者生存情況比較

患者均無失訪，其中P16陽性患者1年死亡25例，生存率為48.98%（24/49）;P16陰性患者1年死亡1例，生存率為90.91%（10/11）。兩組患者生存情況采取Log-Rank檢驗(yàn)，P16陰性患者生存率顯著高于陽性患者，Log-Rank = 5.022，P = 0.025。見圖2。

2.4 ?Ki-67陽性和陰性患者生存情況比較

患者均無失訪，其中Ki-67陽性患者1年死亡26例，生存率為49.02%（25/51）;Ki-67陰性患者1年死亡1例，生存率為88.89%（8/9）。兩組患者生存情況采取Log-Rank檢驗(yàn)，Ki-67陽性患者生存率顯著低于陰性患者，Log-Rank = 3.763，P = 0.042。見圖3。

2.5 P16與Ki-67表達(dá)的關(guān)系

Spearman等級(jí)相關(guān)分析示，P16和Ki-67直腸癌中的表達(dá)無相關(guān)性（r = 0.157，P = 0.461）。

3 討論

結(jié)腸癌是發(fā)生在齒狀線至直腸乙狀結(jié)腸交界處的癌，是消化道常見的惡性腫瘤之一，其病因仍不明確，可能與社會(huì)環(huán)境、飲食習(xí)慣、遺傳因素等有關(guān)[6-9]。早期直腸癌多數(shù)無癥狀，少數(shù)可能會(huì)出現(xiàn)血便、膿血便、腹瀉便秘等，而晚期則會(huì)排便梗阻，危及生命健康[10-11]。目前直腸癌治療主要以外科手術(shù)為主，但在預(yù)后評(píng)估中卻缺乏相應(yīng)的指標(biāo)為臨床提供指導(dǎo)。

本研究結(jié)果顯示，直腸癌癌組織中P16和Ki-67的陽性率高于癌旁正常組織，提示兩指標(biāo)對(duì)直腸癌有較明顯的標(biāo)志性作用。P16調(diào)控細(xì)胞周期，能阻止細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期，其陽性率隨直腸癌惡性程度增高呈上升趨勢(shì)[12]。Ki-67抗原表達(dá)越高，其腫瘤細(xì)胞增殖活性也會(huì)升高，它最初表達(dá)于G1期，并會(huì)逐漸增加至S期和G2期，并于M期實(shí)現(xiàn)最高值，在分裂晚期逐漸消失，因此能將細(xì)胞增殖活性進(jìn)行特異性展示[13-14]。與孫旭凌等[15]研究結(jié)果基本相符。

TNM分期Ⅲ期、高分化程度患者P16、Ki-67陽性率顯著高于TNM分期Ⅱ期、低-中分化患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Ki-67陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，P16陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，提示P16和Ki-67可能與TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，Ki-67可能會(huì)使同質(zhì)性細(xì)胞間的黏附力降低，使腫瘤血管生成加快，從而促進(jìn)直腸癌轉(zhuǎn)移，細(xì)胞周期紊亂導(dǎo)致細(xì)胞持續(xù)增殖[16-17]。P16表達(dá)與直腸癌惡性程度密切相關(guān)，提示越高程度的直腸癌其預(yù)后也越差。與王曉平等[18]研究結(jié)果基本相符。在預(yù)后觀察中Ki-67陽性患者生存情況不容樂觀，可能是細(xì)胞遷移和體外侵襲影響上皮細(xì)胞黏蛋白合成，刺激癌細(xì)胞增長，侵襲性增加，導(dǎo)致病情復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移發(fā)生較快，生存率下降[19-22]。

經(jīng)相關(guān)性分析，直腸癌癌組織的P16和Ki-67表達(dá)無相關(guān)性，直腸癌生物學(xué)特性及其預(yù)后與直腸癌有所不同，但二者在腫瘤細(xì)胞增殖中有著重要作用，都與直腸癌病情程度密切相關(guān)[23-25]。

綜上，P16、Ki-67可能對(duì)直腸癌預(yù)后評(píng)估具有一定的指導(dǎo)意義，值得臨床重視。

[參考文獻(xiàn)]

[1] ?謝強(qiáng)，張宏宇.結(jié)直腸癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞的研究進(jìn)展[J].臨床醫(yī)學(xué)研究與實(shí)踐，2018，3（12）：193-195.

[2] ?郭天安，謝麗，趙江，等.中國結(jié)直腸癌1988-2009年發(fā)病率和死亡率趨勢(shì)分析[J].中華胃腸外科雜志，2018，21（1）：33-40.

[3] ?Zhang L，Liu FJ. Expression of SLP-2 gene and CCBE1 are associated with prognosis of rectal cancer [J]. Eur Rev Med Pharmacol Sci，2017，21（6）：1214-1218.

[4] ?鄒小明，李曉林.結(jié)直腸癌預(yù)后因素的分子生物學(xué)研究[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2017，34（1）：5-8.

[5] ?衛(wèi)生部醫(yī)政司.結(jié)直腸癌診療規(guī)范（2010年版）[J].中華外科雜志，2011，3（2）：130-146.

[6] ?都洋.分析直腸癌診斷及治療中需要注意的幾個(gè)問題[J].中國醫(yī)藥指南，2017，15（20）：298.

[7] ?盧樂，文河白，王晉龍，等.IVIM定量參數(shù)與直腸癌分期，分化程度及脈管神經(jīng)侵犯的關(guān)系[J].現(xiàn)代消化及介入診療，2019，24（9）：1039-1041.

[8] ?祝云霄，馮美燕，馮占軍.直腸癌病理組織中TIPE3表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及生存率的關(guān)系[J].現(xiàn)代消化及介入診療，2019，24（3）：31-34.

[9] ?夏龍飛，劉玉君，張軍民，等.CEACAM-1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及與腫瘤血管生成，轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2019，16（2）：94-97，封4.

[10] ?中華人民共和國衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)醫(yī)政醫(yī)管局.中國結(jié)直腸癌診療規(guī)范（2017年版）[J].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2018，12（1）：3-23.

[11] ?杜靈彬，李輝章，王悠清，等.2013年中國結(jié)直腸癌發(fā)病與死亡分析[J].中華腫瘤雜志，2017，39（9）：701-706.

[12] ?王愛祥，丁祥武，陳艷，等.糞便p16及FHIT基因甲基化檢測在結(jié)直腸癌診斷中的價(jià)值[J].武漢大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2019，40（1）：71-73.

[13] ?李勇，姜世平，高霞.Ki-67和CK20及CEA的表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系及意義[J].中國現(xiàn)代普通外科進(jìn)展，2017，20（5）：394-396.

[14] ?王歡，馬法庫，劉斌，等.結(jié)直腸癌組織中DCLK1+/Ki-67-腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的形態(tài)和分布[J].中國組織工程研究，2015，19（10）：1575-1579.

[15] ?孫旭凌，申婧，黃桂林，等.結(jié)直腸癌HER2及Ki-67表達(dá)的關(guān)系及預(yù)后因素分析[J].重慶醫(yī)學(xué)，2018，47（12）：1610-1615.

[16] ?王利敏，徐克.腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞在腫瘤中作用的研究進(jìn)展[J].中國腫瘤生物治療雜志，2018，25（11）：98-102.

[17] ?鄔升超，郭瑋，潘柏申.腫瘤細(xì)胞來源的外泌體在結(jié)直腸癌中的研究進(jìn)展[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2017，35（8）：570-574.

[18] ?王曉平.P16和Ki-67在宮頸鱗癌癌前病變中的表達(dá)及其診斷價(jià)值分析構(gòu)架[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2017，7（14）：203-205.

[19] ?王紅衛(wèi)，趙陽，李鵬，等.Notch1對(duì)人胰腺癌細(xì)胞遷移及侵襲能力影響的體外實(shí)驗(yàn)研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，40（12）：1559-1563.

[20] ?王啟明，周蘇娜，邵秋菊，等.基于決策曲線分析和生存分析評(píng)估Her-2和Ki-67對(duì)結(jié)直腸癌預(yù)后的價(jià)值[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，49（5）：513-517.

[21] ?許立生，王水，趙志泓，等.p53、p16、CK5/6、VEGF和Ki-67在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].江蘇醫(yī)藥，2019，45（8）：770-773.

[22] ?張翔，楊覓，胡靜，等.結(jié)直腸癌中C-MET、COX-2、MSS、Ki-67的表達(dá)及其與預(yù)后的相關(guān)性分析[J].貴州醫(yī)藥，2018，42（8）：922-925.

[23] ?孫萍，胡艷，趙西俠，等.P16和Ki-67表達(dá)量在宮頸癌早期診斷及癌細(xì)胞惡性行為評(píng)估中的作用[J].中國腫瘤臨床與康復(fù)，2018，25（12）：7-10.

[24] ?郭艷敏，周梅香.P16、Ki-67在宮頸上皮內(nèi)病變中的表達(dá)及意義[J].診斷病理學(xué)雜志，2017，24（2）：105-107.

[25] ?余柳瑩，鮑軼.循環(huán)腫瘤DNA在結(jié)直腸癌中的臨床應(yīng)用及研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2019，57（1）：161-164.

（收稿日期：2020-01-07）