史卿菁 丁旭鋒 吳麗萍

【摘 要】 目的：分析婚前保健對象中孕前女性葉酸代謝通路中相關(guān)酶的基因多態(tài)性，根據(jù)其基因多態(tài)性對個體葉酸代謝能力進行風(fēng)險方面的評估，并依據(jù)得到的結(jié)果對育齡期女性服用葉酸進行個體化引導(dǎo)。方法：選取2018年5月至2019年4月來宜興市婦幼保健院行孕前保健的女性169例，采集研究對象口腔黏膜上皮細胞，采用熒光定量PCR檢測方法測定5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）C667T、A1298C位點和甲硫氨酸合酶還原酶（MTRR）A66G位點的基因型，根據(jù)基因多態(tài)性將其分為高度風(fēng)險、中度風(fēng)險、低度風(fēng)險、未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險四個級別。結(jié)果：本地區(qū)孕前女性MTHFR C667T位點CC型、CT型、TT型的檢出頻率為30.17%、51.47%、18.34%;MTHFR A1298C位點AA型、AC型、CC型的檢出頻率為73.37%、25.44%、1.18%;MTRR A66G位點AA型、AG型、GG型的檢出頻率為62.13%、29.58%、8.28%。葉酸代謝能力高度風(fēng)險占18.34%，中度風(fēng)險占31.36%，低度風(fēng)險占8.87%，未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險占41.42%。結(jié)論：婚前保健孕前女性中有將近50%存在葉酸代謝中、高度風(fēng)險，應(yīng)根據(jù)其葉酸代謝風(fēng)險程度合理個體化服用葉酸。

【關(guān)鍵詞】 孕前婦女;葉酸;5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶;甲硫氨酸合酶還原酶;基因多態(tài)性;葉酸過量

[Abstract] Objective：To analyze the genetic polymorphisms of related enzymes in the folate metabolic pathway of pre-pregnancy women in pre-marital health care subjects， to evaluate the risk of individual folate metabolic ability according to their genetic polymorphisms， and to individually guide women of childbearing age to take folic acid according to the obtained results. Methods： 169 women who received pregnant care in Yixing Maternal and Child Health Hospital from May 2018 to April 2019 were selected. Oral mucosal epithelial cells of the study subjects were collected and the 5，10-methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） C667T， A1298C sites and methionine synthase reductase （MTRR） A66G were determined by fluorescence quantitative PCR. Genotypes of loci were classified into four levels： high risk， moderate risk， low risk and no risk according to gene polymorphism. Results： The detection frequencies of CC， CT and TT at MTHFR C667T locus were 30.17%， 51.47% and 18.34% in pre-pregnancy women in this region; the detection frequencies of AA， AC and CC at MTHFR A1298C locus were 73.37%， 25.44% and 1.18%; the detection frequencies of AA， AG and GG at MTRR A66G locus were 62.13%， 29.58% and 8.28%.The high risk， moderate risk， low risk and undetected risk accounted for 18.34%， 31.36%， 8.87% and 41.42% respectively. Conclusion： Nearly 50% of pre-pregnancy women in pre-marital health care have moderate and high risk of folic acid metabolism， which should be rationally individualized according to the degree of risk of folic acid metabolism.

[Key words]Pre-pregnancy women; Folic acid; 5，10-methylenetetrahydrofolate reductase; Methionine synthase reductase; Gene polymorphism;Folate excess

葉酸（Folic acid），又名碟酰谷氨酸，屬于水溶性維生素。人機體無法自主合成葉酸，需要依靠外源性攝取。攝取的葉酸會在近端空腸被機體所吸收，以N5-甲基四氫葉酸的形式儲存紅細胞內(nèi)，5-甲基四氫葉酸、維生素B12、甲硫氨酸合成酶一同把機體中半胱氨酸甲基化而得到甲硫氨酸，而甲硫氨酸合成酶還原酶是一種甲硫氨酸合成酶維持活性的輔酶。葉酸代謝關(guān)鍵酶所出現(xiàn)的基因突變會對機體中同型半胱氨酸水平帶來影響，可引起孕產(chǎn)婦復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、妊娠期高血壓等疾病，增加子代唐氏綜合征、神經(jīng)管畸形、先天性心臟病等出生缺陷的風(fēng)險[1]。葉酸代謝障礙的婦女即使在孕前、孕期補充了葉酸，但由于其葉酸代謝能力低下仍會導(dǎo)致葉酸缺乏相關(guān)的生育風(fēng)險。

1 資料與方法

1.1 研究資料

選取本院2018年5月至2019年4月門診接待的備孕期女性169例，年齡22～42歲，平均年齡27歲，自愿接受葉酸代謝基因多態(tài)性檢測。簽署知情同意書后，采集口腔黏膜上皮細胞進行DNA檢查。

1.2 方法

研究對象清水漱口后，由專業(yè)人員采集其口腔黏膜上皮細胞樣本，并利用柱式抽提試劑盒提取樣本DNA。采用熒光定量PCR法檢測三個位點的基因分型。

2 結(jié)果

2.1 統(tǒng)計樣本中MTHFR、MTRR基因多態(tài)性分析

統(tǒng)計樣本中葉酸代謝基因3個位點（MTHFRC667T、MTHFR A1298C、MTRR A66G）的基因型數(shù)據(jù)，均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗。

統(tǒng)計所有樣本檢測的MTHFR C667T位點中，野生型（CC）、雜合突變型（CT）及純合突變型（TT）為51例（30.17%）、87例（51.47%）和31例（18.34%），突變基因T的基因頻率為44.08%;MTHFR A1298C位點為124例（73.37%）、43例（25.44%）和2例（1.18%），突變基因C的基因頻率為13.9%;MTRR A66G位點為野生型（AA）、雜合突變型（AG）及純合突變型（GG）的分別為105例（62.13%）、50例（29.58%）和14例（8.28%），突變基因G的基因頻率為23.07%。

2.2 依據(jù)樣本基因多態(tài)性對葉酸代謝能力進行風(fēng)險評級

統(tǒng)計樣本中葉酸代謝能力未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險70例，占41.12%;低度風(fēng)險15例，占8.87%;中度風(fēng)險53例，占31.36%;高度風(fēng)險31例，占18.34%。見表1。

3 討論

葉酸缺乏會導(dǎo)致孕婦不良妊娠發(fā)生率增高。不良妊娠主要表現(xiàn)為流產(chǎn)和出生缺陷，我國出生缺陷發(fā)病率相對較高[2]，出生缺陷中最為普遍的就是唐氏綜合征、先天性心臟病等，這些疾病不僅嚴(yán)重危害兒童健康，也會帶來巨大的社會經(jīng)濟負擔(dān)。葉酸在DNA和RNA合成中起到重要作用，人體不能合成葉酸，只能外源性攝入。天然葉酸極不穩(wěn)定，食物中的葉酸經(jīng)烹飪等處理后只有極少部分能被人體吸收，且天然葉酸人體利用度較低。葉酸代謝關(guān)鍵酶的基因突變會導(dǎo)致其酶活性的顯著降低以及紅細胞內(nèi)葉酸水平降低[3]，葉酸代謝關(guān)鍵酶的基因突變會顯著放大本來就存在的葉酸缺乏。本研究孕前女性MTHFR C667T位點有17.8%的人發(fā)生純合突變，MTRR A66G位點有8.28%的人發(fā)生純合突變。這部分人群不僅生育神經(jīng)管缺陷、21-三體綜合癥、唇腭裂胎兒的風(fēng)險增加，孕期發(fā)生妊娠期高血壓的風(fēng)險也將顯著升高[4]。

各國孕期葉酸的推薦劑量存在差異，我國圍孕期增補葉酸預(yù)防神經(jīng)管缺陷指南建議孕婦每天應(yīng)攝取0.4～0.8mg的葉酸，避免引發(fā)神經(jīng)管缺陷。對不相同遺傳學(xué)特征的個性化增補只提到了MTHFRC677T位點TT基因型，對于MTHFR A1298C、MTRR A66G則沒有提及[5]。相關(guān)研究顯示，MTHFR A1298C基因突變會改變機體凝血狀態(tài)，導(dǎo)致凝血機制改變及胎盤部位血栓形成，從而引起復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。MTRR是影響Hcy代謝的另一關(guān)鍵酶，最常見的突變位點為A66G，MTRR A66G位點的基因突變會降低該酶的活性，影響Hcy的活性及DNA甲基化[6]。因此對于MTHFR A1298C及MTRR A66G位點突變的也需引起重視，指導(dǎo)其個體化補充葉酸。

依據(jù)葉酸基因多態(tài)性對葉酸代謝能力進行風(fēng)險評級，近50%的孕前婦女存在中、高度風(fēng)險，常規(guī)孕前、孕早期補充0.4mg葉酸不能滿足這部分人群葉酸代謝需求，仍會導(dǎo)致葉酸缺乏相關(guān)生育風(fēng)險的發(fā)生，因此葉酸補充需個體化，才能進一步降低相關(guān)生育風(fēng)險。

當(dāng)前圍受孕期補充葉酸已逐漸被國民接受，但過量攝入葉酸帶來的母嬰危害尚未被全面認識。目前對于葉酸攝入閾值尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。國外相關(guān)研究報道，孕期女性葉酸攝入劑量>1000mg/d時，可能會導(dǎo)致子代呼吸功能異常，引起呼吸道相關(guān)疾病發(fā)病率升高。相關(guān)研究表明，胎兒體內(nèi)葉酸濃度與胎兒出生體質(zhì)量相關(guān)。由此可見，母體在孕期長期攝入過量葉酸可能會增加生育巨大兒的風(fēng)險。一項動物實驗發(fā)現(xiàn)，孕期母體葉酸水平會影響胎兒大腦的發(fā)育以及在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到關(guān)鍵作用。也有研究顯示，母體葉酸水平異?？赡軐?dǎo)致子代多動癥、孤獨癥等行為學(xué)改變。目前葉酸過量帶來的母嬰危害正逐漸被學(xué)術(shù)界重視，其中利弊還需長期研究論證。

葉酸是人體生長、繁殖必須的物質(zhì)，對于圍孕期婦女尤為重要。目前國民對葉酸的補充也有了一定的認識，但葉酸的個體化補充仍需全體醫(yī)護人員的努力宣教。特別是當(dāng)前葉酸過量所產(chǎn)生的危害還存在爭議，學(xué)術(shù)界也沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)前研究對于葉酸過量的認識還不足。因此對于葉酸的補充仍需適當(dāng)慎重，不可盲目。當(dāng)前醫(yī)護工作者應(yīng)當(dāng)更加全面辨證地指導(dǎo)圍孕期婦女更加科學(xué)、個體化地服用葉酸。

參考文獻

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