嚴(yán)欣茹 董璦榕 余 淼 呂繼蓉 郭春華*

（1.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)國(guó)家民委重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川成都610041；2.成都大帝漢克生物科技有限公司，四川成都610066）

仔豬3～5 周齡，甚至更早斷奶被稱(chēng)為早期斷奶。一般來(lái)說(shuō)，仔豬4～7 周齡時(shí)，其胃腸道免疫和消化機(jī)能才逐漸發(fā)育成熟[1]，但是隨著仔豬斷奶時(shí)間提前，仔豬胃腸道發(fā)育和免疫機(jī)制建立不完全，出現(xiàn)一系列不良應(yīng)激反應(yīng)，給生豬養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)不少損失。

酸化劑是一種能改善動(dòng)物胃腸道環(huán)境，且無(wú)殘留、無(wú)污染的新型飼料添加劑。酸化劑的種類(lèi)很多，其中復(fù)合酸化劑是將無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸以及酸和鹽類(lèi)配合使用的酸化劑，各種成分協(xié)同作用，能有效克服單一酸化劑的不足，擴(kuò)大酸化劑的酸度閾值和抑菌系區(qū)，同時(shí)復(fù)合酸化劑酸性相對(duì)穩(wěn)定，不會(huì)造成動(dòng)物胃腸道酸度時(shí)高時(shí)低的不良情況。本試驗(yàn)旨在研究復(fù)合酸化劑替代抗生素在仔豬日糧中的應(yīng)用，以期研發(fā)出一種效果優(yōu)良，成本較低的酸化劑。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

復(fù)合酸化劑Ⅰ：市購(gòu)某知名品牌商品酸化劑。主要成分為富馬酸、乳酸，載體為SiO2，產(chǎn)品成分分析保證值：富馬酸≥45.0%、乳酸≥19.5%、水分≤15.0%。衛(wèi)生指標(biāo)：總砷（以As 計(jì)）≤10.0 mg/kg、鉛（以Pb 計(jì)）≤30.0 mg/kg。日糧中建議添加量：3 000～5 000 mg/kg。

復(fù)合酸化劑Ⅱ：由成都大帝漢克生物科技有限公司提供，將磷酸、多種有機(jī)酸按比例配制，配方組成為磷酸30%、富馬酸10%、甲酸6%、檸檬酸5%、苯甲酸5%、甘蔗糖蜜5%、乙酸2%、丙酸2%，載體為SiO2。日糧中建議添加量：5 000 mg/kg。

復(fù)合抗生素：所用抗生素為三種抗生素的組合（土霉素100 mg/kg+金霉素75 mg/kg+喹烯酮250 mg/kg），由四川建奇飼料有限公司提供。

基礎(chǔ)日糧：購(gòu)自四川建奇飼料有限公司，V 301A型乳豬配合日糧，未添加抗生素。

主要試劑：麥康凱固體培養(yǎng)基(大腸桿菌選擇培養(yǎng)基)、亞硫酸鉍固體培養(yǎng)基(沙門(mén)氏菌選擇培養(yǎng)基)、LBS 固體培養(yǎng)基(乳酸菌選擇培養(yǎng)基)，購(gòu)買(mǎi)于成都欣億維生物科技有限公司。

主要儀器：隔水式恒溫培養(yǎng)箱（GHP-9270）、立式壓力蒸汽滅菌器（YXQ-LS-50S）、全溫型恒溫培養(yǎng)搖床（DY-200B）、多管架自動(dòng)平衡離心機(jī)（L530）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇（28±2）日齡和體重[（8.14±1.15）kg]接近的“杜×長(zhǎng)×大”斷奶仔豬36 頭（公母各半），根據(jù)仔豬體重采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，分為3 個(gè)處理組：復(fù)合抗生素組（基礎(chǔ)日糧+土霉素100 mg/kg+金霉素75 mg/kg+喹烯酮250 mg/kg）、復(fù)合酸化劑Ⅰ組（基礎(chǔ)日糧+5 000 mg/kg 復(fù)合酸化劑Ⅰ）和復(fù)合酸化劑Ⅱ組（基礎(chǔ)日糧+5 000 mg/kg 復(fù)合酸化劑Ⅱ），每處理組4 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3 頭豬，進(jìn)行為期42 d 的飼喂試驗(yàn)。（見(jiàn)表1）

1.2.2 飼養(yǎng)管理

每天于早上8：30 和下午4：30 兩次投喂飼料，自由采食和飲水。每日清理圈舍，保證欄舍清潔，定期消毒。按常規(guī)對(duì)仔豬進(jìn)行驅(qū)蟲(chóng)和免疫。觀察試驗(yàn)仔豬的生長(zhǎng)情況，記錄投喂量和腹瀉情況。

1.2.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

①生長(zhǎng)性能測(cè)定

在預(yù)試驗(yàn)結(jié)束后，試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束的晨飼前，以每個(gè)重復(fù)圈舍為單位對(duì)仔豬進(jìn)行空腹稱(chēng)重，準(zhǔn)確記錄試驗(yàn)期間每個(gè)重復(fù)圈舍仔豬每天的喂料量與余料量，用于計(jì)算每頭仔豬試驗(yàn)期間的平均日采食量、平均日增重、料肉比。

表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

②腹瀉率

腹瀉率：每天按時(shí)巡查豬舍，觀察仔豬的精神狀態(tài)和健康狀況，每天觀察和記錄仔豬腹瀉情況。

③糞便中微生物數(shù)量的測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，收集仔豬糞便，編號(hào)，迅速用冰盒帶回實(shí)驗(yàn)室冷藏保存待測(cè)，采樣過(guò)程中注意防止糞便樣品被環(huán)境微生物污染。所有樣品在采樣后48 h 內(nèi)進(jìn)行微生物培養(yǎng)測(cè)定。測(cè)定方法參考康麗慧等[2]介紹的方法。根據(jù)菌落的特征，分別對(duì)培養(yǎng)基上的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)并計(jì)算每克豬糞的菌落數(shù)，計(jì)算方法參考楊玲等[3]介紹的方法。

每克豬糞的菌落數(shù)（cfu/g)=同一稀釋度3 次重復(fù)的菌落平均數(shù)×10×稀釋度

④血液指標(biāo)測(cè)定

于試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，使用真空采血管，前腔頸靜脈采血約5 ml，靜置20 min，3 000 r/min 離心15 min，收集血清分裝于1.5 ml 離心管中，-20 ℃凍存待測(cè)。TP、ALB、GLB三項(xiàng)血清生化指標(biāo)和IgG、IgM兩項(xiàng)免疫功能指標(biāo)測(cè)定使用全自動(dòng)生化儀，樣品送至成都里來(lái)生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。

2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2007整理后，采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，采用Duncan's多重比較，P＜0.05為差異顯著。

3 結(jié)果與分析

3.1 酸化劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響(見(jiàn)表2)

表2 酸化劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

表2 可見(jiàn)，試驗(yàn)期內(nèi)各組仔豬平均采食量、平均日增重、料重比均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。在平均日增重方面：試驗(yàn)第0～21 d，復(fù)合酸化劑Ⅱ組較復(fù)合抗生素組和復(fù)合酸化劑Ⅰ組分別提高8.36%（P＞0.05）和6.28%（P＞0.05）；試驗(yàn)第22～42 d，復(fù)合酸化劑Ⅱ組較復(fù)合抗生素組和復(fù)合酸化劑Ⅰ組分別提高4.01%（P＞0.05）和13.67%（P＞0.05）；試驗(yàn)全期，復(fù)合酸化劑Ⅱ組較復(fù)合抗生素組和復(fù)合酸化劑Ⅰ組分別提高5.53%（P＞0.05）和10.90%（P＞0.05）。在平均日采食量方面：試驗(yàn)第0～21 d，復(fù)合酸化劑Ⅱ組較復(fù)合抗生素組和復(fù)合酸化劑Ⅰ組分別提高8.86%（P＞0.05）和1.96%（P＞0.05）；試驗(yàn)第22～42 d，復(fù)合酸化劑Ⅱ組較復(fù)合抗生素組和復(fù)合酸化劑Ⅰ組分別提高5.35%（P＞0.05）和15.76%（P＞0.05）；試驗(yàn)全期，復(fù)合酸化劑Ⅱ組較復(fù)合抗生素組和復(fù)合酸化劑Ⅰ組分別提高6.51%（P＞0.05）和10.67%（P＞0.05）。在料重比方面：試驗(yàn)第0～21、22～42 d 和全期的料重比差異均不顯著（P＞0.05），復(fù)合酸化劑Ⅱ組與復(fù)合抗生素組的料重比相差不大，但比復(fù)合酸化劑Ⅰ組各試驗(yàn)期分別降低5.23%、提高0.57%、降低1.72%。綜上所述，仔豬斷奶0～21 d，與復(fù)合抗生素組相比，添加復(fù)合酸化劑有助于提高斷奶仔豬的平均日增重和平均日采食量，復(fù)合酸化劑Ⅱ的作用效果最佳；復(fù)合酸化劑Ⅱ使用時(shí)效較長(zhǎng)。斷奶后22～42 d，也能提高仔豬采食量，促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)。

本試驗(yàn)中，復(fù)合酸化劑Ⅱ以磷酸和多種有機(jī)酸復(fù)合而成，并且添加甘蔗糖蜜等物質(zhì)，使復(fù)合酸化劑Ⅱ兼具酸化劑、香味劑和甜味劑三者的功效。研究表明，酸化劑、香味劑和甜味劑均能夠有效改善日糧適口性，提高仔豬的采食量[4-6]，因此，復(fù)合酸化劑Ⅱ能夠改善日糧適口性，增加仔豬采食量，提高仔豬生長(zhǎng)性能，代替抗生素在仔豬日糧中使用。

3.2 酸化劑對(duì)斷奶仔豬腹瀉率的影響（見(jiàn)表3）

表3 酸化劑對(duì)斷奶仔豬腹瀉率的影響

表3可見(jiàn)，仔豬腹瀉率在各飼養(yǎng)階段均無(wú)顯著差異（P＞0.05），但與復(fù)合抗生素組相比，試驗(yàn)第0～21 d，復(fù)合酸化劑Ⅰ、Ⅱ組的腹瀉率分別降低22.97%、16.40%；試驗(yàn)第22～42 d，基本無(wú)腹瀉情況發(fā)生；從試驗(yàn)全期來(lái)看，與復(fù)合抗生素組相比，復(fù)合酸化劑Ⅰ、Ⅱ組的腹瀉率分別降低22.60%、17.72%，復(fù)合酸化劑Ⅱ組腹瀉率較復(fù)合酸化劑Ⅰ組高6.27%。試驗(yàn)結(jié)果表明：與復(fù)合抗生素組相比，斷奶仔豬日糧中添加復(fù)合酸化劑能降低仔豬腹瀉率，可代替抗生素在斷奶仔豬日糧中使用；復(fù)合酸化劑Ⅰ在抗仔豬腹瀉方面，效果優(yōu)于復(fù)合酸化劑Ⅱ。

研究表明，仔豬斷奶12 d 后，甜味劑能夠誘導(dǎo)仔豬采食，提高仔豬采食頻，并能使幼畜在應(yīng)激或患病情況下保持食欲[7-8]。本試驗(yàn)中，復(fù)合酸化劑Ⅱ組的仔豬腹瀉率比復(fù)合酸化劑Ⅰ組高，比復(fù)合抗生素組低，復(fù)合酸化劑Ⅱ中添加甘蔗糖蜜等物質(zhì)，增加香甜味，促進(jìn)仔豬采食，使得復(fù)合酸化劑Ⅱ組的仔豬在腹瀉相對(duì)嚴(yán)重的情況下，采食量和日增重仍更高。

3.3 酸化劑對(duì)斷奶仔豬糞便中微生物數(shù)量的影響（見(jiàn)表4）

表4 仔豬糞便中微生物數(shù)量

表4 可見(jiàn)，乳酸菌方面，復(fù)合酸化劑Ⅱ組仔豬糞便中的數(shù)量比復(fù)合抗生素組顯著提高47.88%（P＜0.05），但比復(fù)合酸化劑Ⅰ組降低29.88%（P＜0.05）；大腸桿菌方面，復(fù)合酸化劑Ⅱ組比復(fù)合抗生素組顯著降低26.44%（P＜0.05），比復(fù)合酸化劑Ⅰ組提高49.17%（P＜0.05）；沙門(mén)氏菌方面，復(fù)合酸化劑Ⅱ、復(fù)合酸化劑Ⅰ組與復(fù)合抗生素組差異不顯著，但有降低趨勢(shì)（0.05＜P≤0.10），復(fù)合酸化劑Ⅱ組比復(fù)合抗生素組降低7.17%，比復(fù)合酸化劑Ⅰ組提高43.79%。綜上所述，與復(fù)合抗生素組相比，復(fù)合酸化劑能提高斷奶仔豬糞便中乳酸菌的數(shù)量，降低大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的數(shù)量，以此改善仔豬腸道菌群結(jié)構(gòu)，復(fù)合酸化劑Ⅰ組效果最好，復(fù)合酸化劑Ⅱ組效果次之。

動(dòng)物體胃腸道中有益菌的生長(zhǎng)大多需要酸性環(huán)境，如乳酸菌生長(zhǎng)適宜pH 值為5.4～6.4，而有害菌生長(zhǎng)適宜pH值大多在6以上，如大腸桿菌，其適宜生長(zhǎng)pH值為6.0～8.0[9]，復(fù)合酸化劑有效降低了胃腸道的酸度，有利于乳酸菌這樣的有益菌生長(zhǎng)繁殖。因此本試驗(yàn)中，與復(fù)合抗生素組相比，復(fù)合酸化劑Ⅰ、Ⅱ組的仔豬糞便中，乳酸菌含量增加，大腸桿菌和沙門(mén)氏菌含量降低。

3.4 酸化劑對(duì)斷奶仔豬血液指標(biāo)的影響（見(jiàn)表5）

表5 仔豬血液指標(biāo)

表5可見(jiàn)，各組仔豬血清TP、ALB、GLB含量差異不顯著（P＞0.05），與復(fù)合抗生素組相比，復(fù)合酸化劑Ⅱ組的TP、ALB、GLB 含量分別提高2.55%、2.29%、2.86%，均有提高趨勢(shì)，復(fù)合酸化劑Ⅰ組比復(fù)合抗生素組的TP含量提高0.72%，ALB含量降低1.44%，GLB含量提高3.24%；各試驗(yàn)組較抗生素組仔豬血清中IgM的含量差異顯著（P＜0.05），IgG 含量差異不顯著（P＞0.05），與復(fù)合抗生素組相比，復(fù)合酸化劑Ⅱ組的IgM含量提高34.78%（P＜0.05），IgG 含量提高4.98%，復(fù)合酸化劑Ⅰ組的IgM 含量提高12.72%，IgG 含量提高10.20%。上述結(jié)果可知，與復(fù)合抗生素組相比，復(fù)合酸化劑Ⅰ、Ⅱ均可提高仔豬免疫能力，復(fù)合酸化劑Ⅱ效果更佳。

3.5 經(jīng)濟(jì)效益核算(見(jiàn)表6)

表6 經(jīng)濟(jì)效益核算

表6 可見(jiàn)，仔豬經(jīng)濟(jì)效益核算中，假設(shè)斷奶仔豬的價(jià)格為30 元/kg，復(fù)合酸化劑Ⅰ為15 元/kg，復(fù)合酸化劑Ⅱ?yàn)?3元/kg，復(fù)合抗生素為20元/kg。復(fù)合抗生素組產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)價(jià)值為4 850.06元，復(fù)合酸化劑Ⅰ組產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)價(jià)值為4 586.15元，復(fù)合酸化劑Ⅱ組產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)價(jià)值為5 092.56元，復(fù)合酸化劑Ⅱ組比復(fù)合抗生素組產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)效益提高5%，酸化劑Ⅰ組比復(fù)合抗生素組產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)效益降低5.44%，復(fù)合酸化劑Ⅱ組比復(fù)合酸化劑Ⅰ組產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)效益提高11.04%。結(jié)果表明，復(fù)合酸化劑Ⅱ組產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)價(jià)值高于復(fù)合抗生素組和復(fù)合酸化劑Ⅰ組。

酸化劑對(duì)仔豬經(jīng)濟(jì)效益的影響主要表現(xiàn)：通過(guò)改善日糧適口性，增加仔豬食欲，降低腹瀉率，增加仔豬免疫力，緩解斷奶應(yīng)激，提高仔豬生長(zhǎng)性能，從而提高仔豬經(jīng)濟(jì)效益[10-11]。本試驗(yàn)中，復(fù)合酸化劑Ⅱ能夠改善日糧適口性，增加采食量，提高仔豬生長(zhǎng)性能，因此，在斷奶仔豬中應(yīng)用，能產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)效益，且能夠替代抗生素的應(yīng)用效果。

4 討論

4.1 酸化劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和腹瀉率的影響

仔豬自由采食情況下，仔豬生長(zhǎng)性能的高低取決于仔豬采食量的多少。許多研究表明，酸化劑能夠改善日糧適口性，提高采食量，但也有大量研究表明酸化劑會(huì)使仔豬采食量下降[12]。李海蘭等[6]試驗(yàn)中，與對(duì)照組（添加0.1%酸化劑+0.1%硫酸黏桿菌素）相比，添加0.15%酸化劑，斷奶仔豬日增重有增加趨勢(shì)，腹瀉率降低22.04%。池仕紅等[13]研究不同酸化劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響，結(jié)果表明，酸化劑能夠提高仔豬生長(zhǎng)性能，降低腹瀉率。本試驗(yàn)中，復(fù)合酸化劑Ⅰ、Ⅱ降低仔豬腹瀉率，試驗(yàn)前期均能夠提高仔豬生長(zhǎng)性能，與上述試驗(yàn)結(jié)果一致，表明復(fù)合酸化劑能夠代替抗生素應(yīng)用于斷奶仔豬日糧中，改善仔豬生長(zhǎng)性能，降低腹瀉率。

4.2 酸化劑對(duì)斷奶仔豬腸道微生物的影響

大多數(shù)致病菌在酸性條件下，生長(zhǎng)會(huì)受到抑制，酸性條件更適合有益菌的生長(zhǎng)[9，14]。張旭暉等[11]試驗(yàn)表明，日糧中分別添加不同的有機(jī)酸，各組仔豬腸道中大腸桿菌和產(chǎn)氣莢膜桿菌的生長(zhǎng)受到抑制；韓慶功等[15]在日糧中添加酸化劑進(jìn)行飼喂試驗(yàn)，試驗(yàn)組仔豬糞便中的乳酸菌含量是復(fù)合抗生素組的2倍左右，同時(shí)糞便中大腸桿菌數(shù)量減少。本試驗(yàn)中，添加復(fù)合酸化劑Ⅰ和復(fù)合酸化劑Ⅱ的兩組仔豬糞便中，大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的數(shù)量均比復(fù)合抗生素組低，而乳酸菌的數(shù)量高于復(fù)合抗生素組，與上述試驗(yàn)結(jié)果一致，表明復(fù)合酸化劑能改善斷奶仔豬腸道環(huán)境，且優(yōu)于抗生素的作用效果。

4.3 酸化劑對(duì)斷奶仔豬血清生化和免疫功能的影響

仔豬血清TP、ALB 和GLB 含量變化在仔豬生理中有重要意義，能反映機(jī)體健康狀況和蛋白質(zhì)代謝水平。盧娜[16]試驗(yàn)中，飼喂酸化劑的仔豬血清中，ALB含量顯著提高。劉文輝[17]試驗(yàn)中，添加0.1%復(fù)合酸化劑的仔豬血清中TP 和GLB 含量顯著提高。本試驗(yàn)中，各組仔豬血清中TP、ALB、GLB 含量差異均不顯著，但復(fù)合酸化劑Ⅰ、Ⅱ組的仔豬血清TP含量均有所提高，復(fù)合酸化劑Ⅱ組的GLB含量較復(fù)合抗生素組有提高，與上述試驗(yàn)結(jié)果一致，表明酸化劑能促進(jìn)仔豬機(jī)體中蛋白質(zhì)的合成。

IgG和IgM是具有抗體活性的動(dòng)物蛋白，李鵬等[18]試驗(yàn)表明，仔豬日糧中添加酸化劑，可顯著提高仔豬血清IgG 含量。陳代文等[19]研究結(jié)果表明，日糧中添加酸化劑可顯著提高仔豬血液IgG 水平，但對(duì)IgM 含量無(wú)明顯影響。本試驗(yàn)結(jié)果與兩者研究結(jié)果有一定差異，本試驗(yàn)各組仔豬血清IgM 含量差異顯著，復(fù)合酸化劑Ⅱ組的IgM含量比復(fù)合抗生素組提高34.78%，比復(fù)合酸化劑Ⅰ組提高11.72%，但各組IgG含量差異不顯著。可能是由于日糧中添加復(fù)合酸化劑Ⅱ，改善仔豬腸道菌群結(jié)構(gòu)，促進(jìn)IgM 合成，提高斷奶仔豬免疫能力。

5 結(jié)論

復(fù)合酸化劑能提高斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和經(jīng)濟(jì)效益，降低腹瀉率，改善仔豬腸道菌群結(jié)構(gòu)，影響仔豬血清TP、ALB 和GL 含量，提高IgM 含量，增強(qiáng)仔豬免疫力，能夠代替抗生素應(yīng)用于仔豬日糧中，綜合比較，復(fù)合酸化劑Ⅱ的使用效果優(yōu)于復(fù)合酸化劑Ⅰ。