祁靜 汪啟珍 楊娟 蔡炳民 于迪

摘 要：目的：以南、北山楂和胰脂肪酶為研究對(duì)象，測(cè)定胰脂肪酶分別與南、北山楂水提液作用后的酶活，探究山楂能否通過(guò)抑制胰脂肪酶的活性來(lái)達(dá)到降血脂作用。方法：通過(guò)體外模擬腸液的條件，考察不同溫度下制備的南、北山楂水提液分別對(duì)胰脂肪酶活性的影響，并考查三種金屬離子對(duì)山楂抑制胰脂肪酶活力的影響。結(jié)果：不同溫度下制備的南、北山楂水提液，在不同反應(yīng)溫度和pH條件下對(duì)胰脂肪酶均表現(xiàn)出活性抑制作用，抑制作用表現(xiàn)最強(qiáng)的為80 ℃提取的南山楂水提液，且反應(yīng)條件為pH為7.20、溫度為25 ℃。Ca2+的存在會(huì)削弱山楂對(duì)胰脂肪酶的抑制作用，而Zn2+和Mg2+能增強(qiáng)山楂對(duì)胰脂肪酶的抑制作用。結(jié)論：山楂在一定程度程度上可以通過(guò)抑制胰脂肪酶的活性來(lái)達(dá)到降血脂的效果。為獲得良好的降血脂效果，在開(kāi)發(fā)山楂功能性食品時(shí)，盡量避免富含Ca2+的食材。

關(guān)鍵詞：南、北山楂;胰脂肪酶;降血脂

山楂果實(shí)和葉片中營(yíng)養(yǎng)成分豐富[1-2]，可起到消食健胃、消炎止咳、降血壓、降血脂、增進(jìn)冠狀動(dòng)脈血流量和防治冠心病、心絞痛等作用[3] 。Jurikova T等[4]研究表明，山楂在心腦血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)以及血脂調(diào)節(jié)、糖代謝等方面均具有較強(qiáng)的藥理作用。大量研究證明，山楂中的黃酮、三萜酸、植物甾醇和果膠等物質(zhì)有顯著的降血脂功效[5-8] 。血脂異常通常表現(xiàn)為血脂濃度過(guò)高，高脂血癥是指血漿脂原濃度超過(guò)正常范圍[9] 。過(guò)多的膳食脂肪攝入積累是導(dǎo)致人體血漿脂原濃度超過(guò)正常范圍的主要原因，而胰脂肪酶是將食物中的脂肪分子降解為甘油單酯和游離脂肪酸的一種重要的消化道內(nèi)源酶[10] 。大多數(shù)膳食脂肪是在人體內(nèi)源消化酶中胰脂肪酶的作用下降解為小分子物質(zhì)后才被人體吸收利用的，因此，抑制胰脂肪酶活性，可以有效抑制脂質(zhì)代謝過(guò)程，降低人體對(duì)膳食脂肪的消化率和代謝產(chǎn)物的吸收率，從源頭上控制血漿脂原濃度的升高，達(dá)到降血脂的功效。

研究表明，胰脂肪酶的活性能夠有效地被一些植物抑制，如葡萄籽[11]、刺玫果果肉[12]、鼠尾草葉[13]、苦丁茶冬青[10]和高吸附性米糠纖維[14] 。有學(xué)者通過(guò)小鼠實(shí)驗(yàn)表明，山楂具有一定的降血脂作用，如李貴海等[15]通過(guò)對(duì)小鼠高脂血癥模型進(jìn)行酶反應(yīng)終點(diǎn)法測(cè)定試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)山楂中的熊果酸和金絲桃苷具有明顯的降低膽固醇、調(diào)節(jié)血脂的功效。Lin Yuguang等[16]通過(guò)小鼠實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，山楂三萜酸能顯著降低極低密度脂蛋白（VLDL）和低密度脂蛋白（LDL）水平，有一定的降血脂作用。林秋實(shí)等[17]通過(guò)對(duì)大鼠高脂血癥模型進(jìn)行血脂測(cè)定實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)山楂及山楂黃酮具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂及增強(qiáng)體內(nèi)膽固醇清除的功能。從人體內(nèi)源消化酶中胰脂肪酶的角度研究山楂降血脂功效的報(bào)道尚未見(jiàn)有，本研究以人體內(nèi)源消化酶中胰脂肪酶為研究對(duì)象，通過(guò)體外模擬腸液的條件，考察不同提取溫度條件下制備的北山楂水提液和南山楂水提液在不同條件下對(duì)胰脂肪酶活性的影響，進(jìn)而為山楂降血脂的功效提供科學(xué)依據(jù)，幫助人們合理調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)和有效指導(dǎo)人們開(kāi)發(fā)出具有更高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的山楂功能性食品。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

南山楂片（產(chǎn)自廣東）;北山楂片（產(chǎn)自山東濟(jì)南）;CAS9001-62-1胰脂肪酶，美國(guó)Sigma-Alorich公司;橄欖油（分析純），上海麥克林生化科技有限公司;聚乙烯醇（分析純），天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所;氫氧化鈉（分析純）、酚酞（分析純）、95%乙醇（分析純），天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司;磷酸氫二鈉（分析純）、磷酸二氫鈉（分析純），天津市大茂化學(xué)試劑廠;氯化鎂（分析純）、氯化鋅（分析純），成都金山化學(xué)試劑有限公司;無(wú)水氯化鈣（分析純），成都市科龍化工試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

BSA224S萬(wàn)分之一天平，德國(guó)Sartorius公司;FJ-200高速分散均質(zhì)機(jī)，上海標(biāo)本模型廠;雷磁PHS-3C型pH計(jì)，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司;ZHWY-200B恒溫培養(yǎng)振蕩器，上海智城分析儀器制造有限公司;50 mL酸堿滴定管，天津市天玻玻璃儀器有限公司;DHG-9053電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1.3 方法

1.3.1 試劑的制備

（1）4%聚乙烯醇溶液的制備：稱(chēng)取40 g聚乙烯醇加入900 mL沸騰蒸餾水中，于電磁爐上水浴攪拌加熱至聚乙烯醇溶解，冷卻后定容至1 000 mL，儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

（2）橄欖油乳液的制備：量取50 mL橄欖油于燒杯中，加入150 mL 聚乙烯醇溶液（4%，w/v），使用高速分散均質(zhì)機(jī)在23 000 r/min 的條件下分散6 min。分2次進(jìn)行，3 min/次，間隔1 min。

（3）0.1 mol/L pH為7.2的磷酸鹽（PBS）緩沖液的配制：首先配制0.2 mol/L NaH2PO4和0.2 mol/L Na2HPO4溶液，然后按一定比例混合并稀釋配制成0.1 mol/L pH為7.2的PBS緩沖液。稱(chēng)取NaH2PO4·2H2O 31.2 g（或NaH2PO4·H2O 27.6 g）加蒸餾水加熱溶解，冷卻后定容至1 000 mL即得0.2 mol/L NaH2PO4溶液。稱(chēng)取61.632 g Na2HPO4·12H2O（或72 g Na2HPO4·2H2O）加蒸餾水溶解并定容至1 000 mL 即得0.2 mol/L Na2HPO4溶液。分別移取0.2 mol/L NaH2PO4 28 mL和72 mL 0.2 mol/L Na2HPO4溶液混勻后，加蒸餾水定容至200 mL即獲得0.1 mol/L pH為7.2的PBS緩沖液。

（4）0.02 mol/L NaOH溶液的制備：依據(jù)《GB/T 601—002 化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的配制》進(jìn)行配制。①NaOH溶液的制備：精密稱(chēng)取NaOH 1.200 0 g，加入煮沸后冷卻的蒸餾水1 500 mL配成0.02 mol/L NaOH溶液。②鄰苯二甲酸氫鉀基準(zhǔn)物溶液的配制：精密稱(chēng)取0.5～0.55 g于105～110 ℃干燥至恒重的鄰苯二甲酸氫鉀，溶于少量新煮沸冷卻的蒸餾水中，最后定容至250 mL容量瓶中，此溶液供標(biāo)定NaOH溶液用。③NaOH的標(biāo)定：移液管平行移取20.00 mL 上述鄰苯二甲酸氫鉀溶液3份，置于洗凈的錐形瓶中，滴加酚酞指示劑（1%，95%乙醇溶解）2滴，用待標(biāo)定的NaOH溶液滴定至溶液呈淺紅色，且30 s不褪色為終點(diǎn)。記錄所耗用NaOH溶液的體積。計(jì)算NaOH溶液的準(zhǔn)確濃度并寫(xiě)在標(biāo)簽上。標(biāo)定好的NaOH溶液保存于塑料瓶中儲(chǔ)存?zhèn)溆?。?jì)算公式如式（1）：

式（1）中，CNaOH——NaOH溶液的濃度（mol/L）;m鄰——稱(chēng)取鄰苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量（g）;VNaOH——滴定時(shí)消耗的NaOH溶液的體積（mL）;M鄰——鄰苯二甲酸氫鉀的摩爾質(zhì)量（g/mol）。

（5）1%酚酞指示液：制備方法依據(jù)《GB/T 603—2002化學(xué)試劑試驗(yàn)方法中所用制劑及制品的制備》。稱(chēng)取1 g酚酞，用少量 95%乙醇溶解，然后繼續(xù)用95%乙醇稀釋至100 mL，儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

（6）0.20 mg/mL胰脂肪酶溶液的制備：取適量胰脂肪酶于研缽中迅速研細(xì)后，準(zhǔn)確稱(chēng)取0.020 g胰脂肪酶溶解于0.1 mol/L pH為7.2的PBS緩沖液中，定量濾紙過(guò)濾后，用上述緩沖液定容至100 mL，現(xiàn)配現(xiàn)用。

（7）不同溫度下山楂水提液的制備：分別稱(chēng)取50 g南山楂片和北山楂片，按料液比1∶ 4（w/v）加入蒸餾水（蒸餾水預(yù)熱至提取溫度），分別于不同溫度（常溫、60 ℃、80 ℃）下浸提30 min，采用濾棉過(guò)濾2次、定量濾紙過(guò)濾2次，然后定容至250 mL，即得不同溫度提取的南、北山楂水提液，儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 不同溫度下制備的山楂水提液在不同條件下對(duì)胰脂肪酶的作用

（1）不同pH的山楂水提液對(duì)胰脂肪酶的作用：在干凈錐形瓶中準(zhǔn)確移入8 mL橄欖油乳液、5 mL 0.1 mol/L pH為7.2的PBS緩沖液，然后分別準(zhǔn)確移入提前調(diào)至pH為6.80、6.90、7.00、7.10、7.20的3 mL山楂水提液，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢杈鶆?，最后?zhǔn)確移入1 mL 0.20 mg/mL的胰脂肪酶液，再次充分?jǐn)嚢杈鶆颉⑸鲜龇磻?yīng)液置于37 ℃下的恒溫培養(yǎng)振蕩器中反應(yīng)1.5 h，然后加入15 mL 95%乙醇終止酶反應(yīng)。于反應(yīng)液中滴加2滴酚酞指示劑，使用0.02 mol/L NaOH滴定體系中產(chǎn)生的脂肪酸量。實(shí)驗(yàn)做2個(gè)平行并設(shè)置對(duì)照組，其中對(duì)照組實(shí)驗(yàn)為不添加山楂的反應(yīng)體系，對(duì)照組做1個(gè)平行。

（2）山楂水提液在不同反應(yīng)溫度下對(duì)胰脂肪酶的作用：在干凈錐形瓶中準(zhǔn)確移入8 mL橄欖油乳液、5 mL 0.1 mol/L pH為7.2的PBS緩沖液、pH為7.00的3 mL山楂水提液，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢杈鶆颍缓鬁?zhǔn)確移入1 mL 0.20 mg/mL的胰脂肪酶液，再次充分?jǐn)嚢杈鶆?。將反?yīng)液分別置于25、37、45 ℃下的恒溫培養(yǎng)振蕩器中反應(yīng)1.5 h，然后加入15 mL 95%乙醇終止酶反應(yīng)。于反應(yīng)液中滴加2滴酚酞指示劑，使用0.02 mol/L NaOH滴定體系中產(chǎn)生的脂肪酸量。實(shí)驗(yàn)做2個(gè)平行并設(shè)置對(duì)照組，其中對(duì)照組實(shí)驗(yàn)為不添加山楂的反應(yīng)體系，對(duì)照組做1個(gè)平行。

1.3.3 金屬離子對(duì)山楂抑制胰脂肪酶活力的影響

（1）Ca2+對(duì)山楂抑制胰脂肪酶活力的影響：在干凈錐形瓶中準(zhǔn)確移入8 mL橄欖油乳液、5 mL 0.1 mol/L pH為7.2的PBS緩沖液、pH為7.00的3 mL山楂水提液，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢杈鶆?，然后?zhǔn)確移入1 mL 0.2 mg/mL的胰脂肪酶液，充分?jǐn)嚢杈鶆?，最后?zhǔn)確移入1 mL 5 mmol/L的Ca2+，充分?jǐn)嚢杈鶆?。將上述混合液置?7 ℃的恒溫振蕩搖床中反應(yīng)1.5 h后加入15 mL 95% 乙醇終止酶反應(yīng)。于反應(yīng)液中滴加2滴酚酞指示劑，用0.02 mol/L NaOH滴定體系中產(chǎn)生的脂肪酸量。實(shí)驗(yàn)做2個(gè)平行并設(shè)置對(duì)照組，其中對(duì)照組實(shí)驗(yàn)為不添加Ca2+的反應(yīng)體系，對(duì)照組做1個(gè)平行。

（2）Zn2+對(duì)山楂抑制胰脂肪酶活力的影響：在干凈錐形瓶中準(zhǔn)確移入8 mL橄欖油乳液、5 mL 0.1 mol/L pH為 7.2的PBS緩沖液、pH為7.00的3 mL山楂水提液，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢杈鶆颍缓鬁?zhǔn)確移入1 mL 0.2 mg/mL的胰脂肪酶溶液，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝鬁?zhǔn)確移入1 mL 10 mmol/L的Zn2+，繼續(xù)充分?jǐn)嚢杈鶆?。然后置?7 ℃的恒溫振蕩搖床中反應(yīng)1.5 h，最后加入15 mL 95% 乙醇終止酶反應(yīng)。于反應(yīng)液中滴加2滴酚酞指示劑，用0.02 mol/L NaOH溶液滴定體系中產(chǎn)生的脂肪酸量。實(shí)驗(yàn)做2個(gè)平行并設(shè)置對(duì)照組，對(duì)照組實(shí)驗(yàn)為不添加Zn2+的反應(yīng)體系，對(duì)照組做1個(gè)平行。

（3）Mg2+山楂抑制胰脂肪酶活力的影響：在干凈錐形瓶中準(zhǔn)確移入8 mL橄欖油乳液、5 mL 0.1 mol/L pH為 7.2的PBS緩沖液、pH為7.00的3 mL山楂水提液，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢杈鶆颍^續(xù)準(zhǔn)確移入1 mL 0.2 mg/mL的胰脂肪酶液，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝鬁?zhǔn)確移入1 mL 10 mmol/L的Mg2+，再次攪拌均勻，然后置于37 ℃的恒溫振蕩搖床中反應(yīng)1.5 h，最后加入15 mL 95% 乙醇終止酶反應(yīng)。于反應(yīng)液中滴加2滴酚酞指示劑，用0.02 mol/L NaOH滴定體系中產(chǎn)生的脂肪酸量。實(shí)驗(yàn)做2個(gè)平行并設(shè)置對(duì)照組，其中對(duì)照組實(shí)驗(yàn)為不添加Mg2+的反應(yīng)體系，對(duì)照組做1個(gè)平行。

（4）胰脂肪酶的酶活計(jì)算方法：胰脂肪酶的酶活計(jì)算采用胰脂肪酶的活力測(cè)定公式如式（2）、胰脂肪酶的活性抑制率計(jì)算公式如式（3）：

式（3）中，抑制率——胰脂肪酶的活性抑制率（%）;X1——對(duì)照組酶活（μmol/min·mg）;X2——樣品組酶活（μmol/min·mg）。

1.3.4 山楂總黃酮的提取及測(cè)定

（1）山楂總黃酮的提取：分別精密稱(chēng)取10 g北山楂和南山楂粉末，置于三角瓶中，分別用30、60、80 ℃的60%乙醇為溶劑，按料液比為1∶ 6，超聲提取40 min后，抽濾，再分別用30、60、80 ℃的60%乙醇定容至100 mL 容量瓶中，搖勻，備用。

（2）山楂總黃酮的測(cè)定：精密量取上述濾液1 mL至25 mL 量瓶中，加5%的亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min;然后加入10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，繼續(xù)放置6 min;再加4% NaOH溶液10 mL，最后加60%乙醇定容至刻度，搖勻，進(jìn)行顯色處理。放置15 min后，以乙醇為空白，在507 nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。該方法的精密度、重現(xiàn)性良好，加樣回收率高[18] 。

2 結(jié)果與分析

2.1 山楂總黃酮的測(cè)定結(jié)果

如圖1 所示，吸光度值與蘆丁質(zhì)量濃度的回歸方程為y = 4.207 6x -0.011 5，相關(guān)系數(shù)R2 = 0.993。經(jīng)過(guò)測(cè)定，得到30、60、80 ℃提取的北山楂溶液的總黃酮含量分別為0.69、0.54、0.48 mg/g;在上述3個(gè)溫度下提取的南山楂溶液總黃酮含量分別為1.15 、1.00、0.77 mg/g，由此可見(jiàn)，南山楂總黃酮含量高于北山楂，此結(jié)果與何心亮[19]的研究結(jié)果一致。

2.2 不同pH的山楂水提液對(duì)胰脂肪酶的作用

如圖2A所示，不同pH（6.80～7.20）的北山楂水提液與胰脂肪酶反應(yīng)后，在pH為6.90前表現(xiàn)出促進(jìn)胰脂肪酶活性的作用，而在pH為6.90后表現(xiàn)出活性抑制作用，且山楂液的酶活性抑制能力隨pH的增大而增強(qiáng)，推測(cè)此現(xiàn)象是由于山楂總黃酮含量突然大量增多所致 [19] 。其中，60 ℃提取條件下制備的北山楂水提液對(duì)胰脂肪酶的活性抑制作用最強(qiáng)。如圖2B所示，不同pH（6.80～7.20）的南山楂水提液與胰脂肪酶反應(yīng)后，南山楂水提液對(duì)胰脂肪酶的活性具有抑制作用，且山楂液的酶活性抑制能力隨pH的增大而增強(qiáng)，但并未呈現(xiàn)線性趨勢(shì)。其中，80 ℃提取條件下制備的南山楂水提液對(duì)胰脂肪酶的活性抑制作用最強(qiáng)。

將圖2A和圖2B的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比可發(fā)現(xiàn)，在一定pH范圍內(nèi)，北山楂水提液和南山楂水提液均對(duì)胰脂肪酶的活性具有抑制作用，且活性抑制能力隨著山楂液pH的增大而增強(qiáng)，同時(shí)在pH為7.20時(shí)表現(xiàn)出最高的抑制能力，此現(xiàn)象與山楂中起抑制脂肪消化作用的黃酮類(lèi)物質(zhì)隨pH的增加提取量增大有關(guān)[20] 。通過(guò)圖2A和圖2B可見(jiàn)，60 ℃提取條件下的北山楂水提液對(duì)胰脂肪酶的抑制效果最好，80 ℃提取條件下的南山楂水提液對(duì)胰脂肪酶的抑制效果最好。整體結(jié)果顯示，不同pH的南山楂水提液對(duì)胰脂肪酶的活性抑制作用強(qiáng)于北山楂水提液。

2.3 山楂水提液在不同反應(yīng)溫度下對(duì)胰脂肪酶的作用

如圖3A所示，北山楂水提液與胰脂肪酶在25～45 ℃內(nèi)相互作用后，北山楂水提液對(duì)胰脂肪酶的活性具有抑制作用。常溫條件下制備的北山楂水提液，在25～45 ℃反應(yīng)溫度范圍內(nèi)，隨反應(yīng)溫度的升高，對(duì)胰脂肪酶的活性抑制能力呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)。其中，在37 ℃下對(duì)胰脂肪酶的活性抑制作用最弱。60 ℃和80 ℃條件下制備的北山楂水提液，在25～45 ℃反應(yīng)溫度范圍內(nèi)，隨反應(yīng)溫度的升高，對(duì)胰脂肪酶的活性抑制能力呈現(xiàn)不斷下降的趨勢(shì)。整體結(jié)果顯示，常溫條件下制備的北山楂水提液表現(xiàn)出最高的胰脂肪酶活性抑制率，原因可能是由于較高溫度下提取的山楂液中含有較多有機(jī)酸導(dǎo)致pH降低，使得山楂液中某些活性成分產(chǎn)生凝聚作用[21]，而常溫提取條件下山楂提取液中含有的果膠以及多種有機(jī)酸含量較少，酸凝聚作用較小，其他活性成分與胰脂肪酶的接觸幾率更大，從而增強(qiáng)了山楂對(duì)胰脂肪酶的活性抑制作用。如圖3B所示，南山楂水提液與胰脂肪酶在25～45 ℃內(nèi)相互作用后，南山楂對(duì)胰脂肪酶的活性具有抑制作用，且隨反應(yīng)溫度的升高，抑制作用呈現(xiàn)先下降后上升趨勢(shì)。其中，在37 ℃下對(duì)胰脂肪酶的活性抑制作用最弱，25 ℃下對(duì)胰脂肪酶的活性抑制作用最強(qiáng)，此現(xiàn)象可能由于常壓下胰脂肪酶活性在37 ℃時(shí)酶活最高，所以山楂的抑制作用相對(duì)較弱[22] 。整體結(jié)果顯示，80 ℃提取條件下制備的南山楂水提液表現(xiàn)出最高的胰脂肪酶活性抑制率。

對(duì)比圖3A和圖3B可發(fā)現(xiàn)，3個(gè)提取溫度下制備的南山楂水提液和常溫條件下制備的北山楂水提液，在25～45 ℃反應(yīng)溫度范圍內(nèi)與胰脂酶反應(yīng)后，隨反應(yīng)溫度的升高，對(duì)胰脂肪酶的活性抑制能力均呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)，且25 ℃下南山楂和北山楂水提液均表現(xiàn)出最高的胰脂肪酶活性抑制率。整體結(jié)果顯示，南山楂水提液在不同反應(yīng)溫度下對(duì)胰脂肪酶的活性抑制作用強(qiáng)于北山楂水提液。

2.4 金屬離子對(duì)山楂抑制胰脂肪酶能力的影響

2.4.1 Ca2+對(duì)山楂抑制胰脂肪酶能力的影響 圖4顯示，在反應(yīng)體系中加入Ca2+后，北山楂和南山楂水提液對(duì)胰脂肪酶的活性抑制作用均被削弱，且常溫下提取的山楂溶液對(duì)胰脂酶的抑制作用被削弱的程度最大。Ca2+對(duì)北山楂抑制胰脂肪酶能力的削弱作用隨北山楂溶液提取溫度的升高，呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)，當(dāng)提取溫度為60 ℃時(shí)削弱作用最弱。Ca2+對(duì)南山楂抑制胰脂肪酶能力的削弱作用隨南山楂溶液提取溫度的升高而減弱，當(dāng)提取溫度為80 ℃時(shí)削弱作用最小。整體結(jié)果顯示，Ca2+對(duì)北山楂抑制胰脂肪酶能力的削弱作用更強(qiáng)。

2.4.2 Zn2+對(duì)山楂抑制胰脂肪酶能力的影響 如圖5所示，在反應(yīng)體系中加入Zn2+后，北山楂和南山楂水提液對(duì)胰脂肪酶的活性抑制作用均被增強(qiáng)。Zn2+對(duì)北山楂和南山楂抑制胰脂肪酶能力的強(qiáng)化作用隨山楂水提液提取溫度的升高，呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，當(dāng)提取溫度為60 ℃時(shí)強(qiáng)化作用最大。

2.4.3 Mg2+對(duì)山楂抑制胰脂肪酶能力的影響 如圖6所示，在反應(yīng)體系中加入Mg2+后，北山楂和南山楂水提液對(duì)胰脂肪酶的活性抑制作用均被增強(qiáng)。Mg2+對(duì)北山楂抑制胰脂肪酶活力的強(qiáng)化作用隨山楂水提液提取溫度的升高，呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，當(dāng)提取溫度為60 ℃時(shí)促進(jìn)作用最強(qiáng)。Mg2+對(duì)南山楂抑制胰脂肪酶能力的增強(qiáng)作用隨山楂水提液提取溫度的升高而增強(qiáng)，當(dāng)提取溫度為80 ℃時(shí)促進(jìn)作用最強(qiáng)。整體結(jié)果顯示，Mg2+對(duì)北山楂抑制胰脂肪酶活力的促進(jìn)作用更強(qiáng)。

3 結(jié)論與討論

從不同反應(yīng)pH和不同反應(yīng)溫度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，相同反應(yīng)條件下的南山楂水提液對(duì)胰脂肪酶的抑制能力強(qiáng)于北山楂水提液對(duì)胰脂肪酶的抑制能力，認(rèn)為此結(jié)果可能是由于南山楂中的黃酮類(lèi)成分含量較高的原因，因?yàn)辄S酮類(lèi)成分是促成山楂降血脂功效的成分之一 [23] 。通過(guò)對(duì)胰脂肪酶的活力進(jìn)行測(cè)定，證明北山楂水提液和南山楂水提液在一定條件下對(duì)胰脂肪酶均有一定的活性抑制作用，能夠降低脂肪的消化吸收率，從而具有一定的降血脂功效。其中，抑制作用表現(xiàn)最強(qiáng)的為80 ℃提取的南山楂溶液，反應(yīng)條件為pH為7.20、溫度為25 ℃。通過(guò)對(duì)金屬離子的作用考查，表明在一定條件下Ca2+會(huì)削弱山楂對(duì)胰脂肪酶的抑制作用，而Zn2+和Mg2+對(duì)提升山楂對(duì)胰脂肪酶的抑制效果，能夠進(jìn)一步增強(qiáng)山楂的降血脂功效。因此，在研發(fā)山楂降血脂功能性食品的配伍食材時(shí)，應(yīng)更多考慮富含Zn2+和Mg2+的食材，避免使用富含Ca2+的食材?！?/p>

參考文獻(xiàn)

[1]柴軍紅，任榮，柴小軍，等.山楂的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國(guó)林副特產(chǎn)，2010，105（2）：98-101.

[2]孟慶杰，王光全.山楂種質(zhì)果實(shí)營(yíng)養(yǎng)成分分析及其資源利用研究[J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，28（1）：20-23.

[3]孟慶杰，王光全，張麗.山楂功能因子及其保健食品的開(kāi)發(fā)利用[J].食品科學(xué)，2006，27（12）：873-877.

[4]Jurikova T，Sochor J，Rop O，et al.Polyphenolic proile and biological activity of Chinese hawthorn（Crataegus pinnatii da BUNGE）fruits[J].Molecules，2012，17（12）：14490-14509.

[5]唐世英，胡桂才，李來(lái)，等.山楂降血脂作用有效部位的研究[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009（5）：43-45.

[6]林科，張?zhí)?，張鶴云.山楂中熊果酸的提取及其對(duì)小鼠的降血脂作用[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2008，19（6）：1052-1054.

[7]董賀，等.山楂谷甾醇的提取及降血脂和增強(qiáng)免疫的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2009，2l（5）：60-63.

[8]Zhu Rugang，et al.Pectinpentasacehnride from hawthorn（Crataegua pinnatifida Bunge.var.major）ameliorates disorders of cholesterol metabolism in high·fat dietfed mice[J].Food Research International，2013，54（1）：262-268.

[9]范婷婷.荷葉生物堿類(lèi)物質(zhì)降脂減肥活性研究[D].杭州：浙江大學(xué)，2013.

[10]耿江楓.苦丁茶冬青胰脂肪酶抑制活性成分研究[D].貴陽(yáng)：貴州師范大學(xué)，2016.

[11]高德艷.葡萄籽原花青素分離及其對(duì)胰脂酶活性抑制功能的研究[D].濟(jì)南：齊魯工業(yè)大學(xué)，2014.

[12]李小第，姜會(huì)敏，霍雅玉，等.刺玫果果肉石油醚層化學(xué)成分及胰脂酶和α-糖苷酶抑制活性研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2015，27（6）：1011-1015.

[13]霍世欣，等.荷葉黃酮化合物對(duì)胰脂肪酶抑制作用的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2008（2）：328-331.

[14]祁靜.高吸附性米糠纖維的制備及其吸附特性的研究[D].江蘇無(wú)錫：江南大學(xué)，2016.

[15]李貴海，孫敬勇，張西林，等.山楂降血脂有效成分的實(shí)驗(yàn)研究[J].中草藥，2002，33（1）：50.

[16]Liu Yuguang，et al.Triterpenic acids present in hawthorn lower plasma cholesterol by inhibiting intestinal ACAT activity in hamsters[J].Evidence—Based Complementary and Alternative Medicine，2011（2011）：1-9.

[17]林秋實(shí)，陳吉棣.山楂及山楂黃酮預(yù)防大鼠脂質(zhì)代謝紊亂的分子機(jī)制研究[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2000，22（2）：131.

[18]張旭，等.甘肅山楂與山里紅總黃酮的提取及含量測(cè)定方法研究[J].中國(guó)獸藥雜志，2018，52（6）：34-39.

[19]何心亮.北山楂與南山楂化學(xué)成分的比較[J].中草藥，1990，21（4）：4-6、46.

[20]侯桂蘭，高敏，童麗姣，等.山楂葉總黃酮的理化性質(zhì)研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30（8）：1766-1768.

[21]崔亮，華二偉，薛潔.山楂對(duì)消化系統(tǒng)影響的研究進(jìn)展[J].新疆中醫(yī)藥，2012，30（1）：78-79.

[22]張中義，等.超高壓下豬胰脂肪酶催化橄欖油水解特性的研究[J].食品科技，2009，34（1）：10-13.

[23]朱彥陳，胡慧明，邵峰，等.南山楂化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展[J].江西中醫(yī)藥，2014，45（12）：67.

Abstract：Objective ?To explore whether Hawthorn can reduce blood lipid by inhibiting the activity of pancreatic lipase，Crataegus cuneata Sieb.et Zucc.，Crataegus pinnatifida Bge.and pancreatic lipase were used as the research objects.Themechanism of hypolipidemic effects of Crataegus cuneata Sieb.et Zucc.and Crataegus pinnatifida Bge.was investigated by measuring the enzyme activity of pancreatic lipase after it interacted with thewater extract of Hawthorn.Method ?By simulating the conditions ofintestinal fluid in vitro，the effects of aqueous extracts of Crataegus cuneata Sieb.et Zucc.and Crataegus pinnatifida Bge.prepared at different temperatures on the activity of pancreatic lipase were investigated.In addition，the effects of three metal ions on the inhibition of pancreatic lipase activity with Hawthorn were also investigated.Result ?Results proved that the aqueous extracts of Crataegus cuneata Sieb.et Zucc.and Crataegus pinnatifida Bge.，which were prepared at different temperatures，exhibited inhibitory activity against pancreatic lipase at different reaction temperatures and pH values.The aqueous extract of Crataegus cuneata Sieb.et Zucc.prepared at 80 ℃ had the strongest inhibitory effect under the reaction conditions of pH=7.20，25 ℃.The inhibition of hawthorn on pancreatic lipase could be weakened by Ca2+，while it could be enhanced by Zn2+ and Mg2+.Conclusion ?Aqueous extracts of Crataegu cuneata Sieb.et Zucc.and Crataegus pinnatifida Bge.have certain inhibitory effects on pancreatic lipase under certain conditions.Moreover，in order to achieve a better hypolipidemic effect，the materials rich in Ca2+ should be avoided when developing the functional foods of Hawthorn.

Keywords：Crataegus cuneata Sieb.et Zucc.and Crataegus pinnatifida Bge.;pancreatic lipase;hypolipidemic