張艷珍 王菲

摘?要：以檸條（錦雞兒）花為原料，采用溶劑回流法提取總生物堿，并對提取的檸條花粗生物堿采用體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ瓦M(jìn)行抗氧化能力研究，同時(shí)與抗壞血酸和苯甲酸作對比。結(jié)果表明：檸條花總生物堿提取物具有顯著的抗氧化能力，清除能力遠(yuǎn)大于苯甲酸，略小于抗壞血酸。

關(guān)鍵詞：檸條花;生物堿;抗氧化

檸條（錦雞兒）主要分布于內(nèi)蒙古、甘肅、寧夏、青海等地，它生長快，生物產(chǎn)量高，根、莖、葉、花等含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，具有滋陰養(yǎng)血等藥用價(jià)值[1-2]。檸條花富含粗脂肪、粗纖維、碳水化合物、總黃酮、生物堿、多酚等，其中生物堿具有抗菌、降血糖、抗腫瘤、抗心律失常、抗血小板聚集等活性，是許多藥用植物的有效成分[3-5]。該試驗(yàn)以檸條花為原料，探討了檸條花中總生物堿提取物對有機(jī)自由基、羥自由基、超氧陰離子、亞硝酸根離子的清除作用，以期為檸條花生物堿的利用提供科學(xué)依據(jù)。

1?材料與設(shè)備

1.1?材料與試劑

檸條花：購于青海省西寧市;鹽酸小檗堿對照品，中國藥品生物制品檢定所;溴甲酚綠，天津市白世化工公司;檸檬酸（分析純），天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司;磷酸氫二鈉（分析純），天津市紅巖化學(xué)試劑廠;甲醇（色譜純），天津市白世化工有限公司;鹽酸（分析純）;氫氧化鈉（分析純）;水為蒸餾水;氯仿為分析純;無水乙醇。

1.2?儀器與設(shè)備

DK-8D型電數(shù)顯水浴鍋，金壇市盛威實(shí)驗(yàn)儀器廠;TU-1800spc型紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;BS224S型電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司;PH211型pH計(jì)，北京哈納科儀科技公司。

2?方法

2.1?生物堿的提取工藝路線

檸條花挑揀后60℃下烘干，粉碎過40目篩，稱取粉碎過的檸條花2.0g于250 mL圓底燒瓶中，采用1∶15料液比加入90%乙醇（含0.1% HCL）回流提取1h，同法提取2次，合并濾液，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.0，過濾收集濾液定容至50 mL容量瓶中，提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，揮發(fā)乙醇，即為總生物堿溶液。

2.2?體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ头ㄑ芯繖帡l花生物堿抗氧化能力

經(jīng)測定，檸條花總生物堿提取物濃度為4.8g/L。取總生物堿提取液 5、15、25、35、45、50 mL，加乙醇定容至50mL，得到 0.48、1.44、2.4、3.36、4.32、4.8g/L不同濃度的總生物堿提取物液;以苯甲酸溶液和抗壞血酸溶液作為對照，待用。

2.2.1?清除DPPH·自由基的測定?準(zhǔn)確稱取DPPH試劑3.5mg，用無水乙醇溶解，并定量轉(zhuǎn)入10mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，取2mL至100 mL容量瓶中，搖勻得濃度為0.017 8mmol/L DPPH貯備液，置于冰箱中冷藏備用。取2mL 0.017 8mmol/L DPPH無水乙醇溶液，加入不同濃度的總生物堿提取液各2 mL，充分振搖后，室溫下暗處放置 10min，然后在 517nm處比色測定，用甲醇作為空白。以抗壞血酸和苯甲酸作對照試驗(yàn)[6]。清除率計(jì)算公式為式（1）：

式（1）中，A0為空白吸光度、A1為加入生物堿溶液后的吸光度。

2.2.2?清除羥基自由基（·OH ）的測定?采用水楊酸法：取不同濃度的總生物堿提取液各2 mL，分別加入2% FeSO4溶液 1 mL 、5%水楊酸溶液 1 mL 、蒸餾水6 mL、3% 過氧化氫 1 mL，37 ℃下恒溫 0.5 h，在波長 510 nm 處測定吸光度A1，用甲醇作為空白。取等量抗壞血酸和苯甲酸作對照試驗(yàn)[7]。清除率計(jì)算公式為式（2）：

式（2）中，A0為空白吸光度、A1為加入生物堿溶液后的吸光度。

2.2.3?清除超氧陰離子（O-2）的測定?采用鄰苯三酚法。取不同濃度的總生物堿提取液各2 mL，各加入 pH為8的Tris—HC1緩沖液 5mL 、蒸餾水 2mL，25 ℃下恒溫 20 min。加入 0、1%的鄰苯三酚溶液 1mL，反應(yīng) 4 min，滴加2滴濃鹽酸溶液終止反應(yīng)，在 320 nm處測定吸光度 A1，空白對照測得吸光度 A0。取等量抗壞血酸和苯甲酸作對照試驗(yàn)[8]。清除率計(jì)算公式為式（3）：

式（3）中，A0為空白吸光度、A1為加入生物堿溶液后的吸光度。

2.2.4?清除亞硝酸根離子 （NO2-）的測定?采用重氮偶合比色法。取不同濃度的總生物堿提取液各2 mL，各加入0.1mol/L NaNO2溶液 0.5 mL、蒸餾水6 mL，振蕩搖勻，37 ℃下恒溫1 h。取出后加入0.4%的對氨基苯磺酸1 mL，靜置10 min。加入0.2%鹽酸萘乙胺試液0.5 mL，靜置5min，在540 nm 處測定吸光度A1、空白對照的吸光度A0。取等量抗壞血酸和苯甲酸作對照試驗(yàn)[9]。清除率計(jì)算公式為式（4）：

式（4）中，A0為空白吸光度、A1為加入生物堿溶液后的吸光度。

3?結(jié)果與分析

3.1?檸條花生物堿體外抗氧化活性研究結(jié)果

3.1.1?清除有機(jī)自由基?DPPH在有機(jī)溶劑中是一種穩(wěn)定的自由基，呈現(xiàn)紫紅色。當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí)，DPPH的孤電子配對，顏色變淺，吸光度變小。顏色的變化程度與配對電子呈一定關(guān)系，因此可以用吸光度的測定來評價(jià)自由基的清除作用。由圖1可知，對照品抗壞血酸表現(xiàn)出較強(qiáng)的DPPH·自由基清除能力，苯甲酸表現(xiàn)出較弱的DPPH·自由基清除能力。在低濃度的時(shí)候，總生物堿提取物的DPPH·自由基清除能力略低于抗壞血酸，但隨著濃度的增加，清除能力顯著高于苯甲酸，略低于抗壞血酸。

3.1.2?清除羥基自由基（·OH ）?研究生物堿提取物對羥自由基的清除能力具有重要的意義[10]。由圖2可知，生物堿提取物對羥自由基具有一定的清除作用，清除率隨著樣品濃度的增加呈現(xiàn)上升趨勢。綜合比較三者，生物堿提取物的清除能力明顯高于苯甲酸，稍低于抗壞血酸。

3.1.3?清除超氧陰離子（O-2）?鄰苯三酚在堿性條件下，能迅速自氧化，釋放出超氧陰離子。加入清除劑后能夠清除其中的超氧陰離子 [11]。由圖3可知，生物堿提取物具有一定的清除超氧陰離子的作用，清除率隨著樣品濃度的上升呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢。清除率不如抗壞血酸，但明顯優(yōu)于苯甲酸。

3.1.4?清除亞硝酸根離子 （NO-2）?由圖4可知，總生物堿提取物對亞硝酸根離子的清除率隨著樣品濃度的增大呈現(xiàn)上升趨勢，且在相同的濃度下清除率大于苯甲酸而小于抗壞血酸，說明檸條花總生物堿對亞硝酸根離子具有一定的清除作用。

4?結(jié)論

抗氧化試驗(yàn)結(jié)果表明，檸條花總生物堿抗氧化能力預(yù)期濃度具有量效關(guān)系，檸條花總生物堿提取物具有清除有機(jī)自由基、羥自由基、超氧陰離子、亞硝酸根離子的能力，清除能力遠(yuǎn)大于苯甲酸，略小于抗壞血酸，可見檸條花總生物堿具有明顯的抗氧化活性，這預(yù)示著生物堿在抗氧化劑、抗衰老方面存在著潛在的利用價(jià)值。

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