何飛雪，劉克新，龔本新，黎勝年，鄭英，雷華鳳

（1.中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院（光明）婦幼保健部，廣東 深圳 518107；2.中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院（光明）東院區(qū) 兒科，廣東 深圳 518107）

0 引言

哮喘（Asthma）發(fā)病率逐年增高，病因多樣，影響因素眾多，這種異質(zhì)性疾病通常以慢性氣道炎癥為特征[1]，是影響所有年齡組的全球健康問題[2-5]，嚴(yán)重喘息發(fā)作在6～7 歲兒童中發(fā)作的比例高達(dá)20%[6]。中醫(yī)藥學(xué)認(rèn)為“痰”在哮病的轉(zhuǎn)歸中處于樞紐的位置。三子養(yǎng)親湯針對“痰”“氣”“積”三大病理因素施治，其止咳平喘作用已得到廣泛的認(rèn)可。

本研究采用卵蛋白致敏配合吸入法建立大鼠幼鼠模型，應(yīng)用三子養(yǎng)親湯進(jìn)行干預(yù)，觀察其血清中IL-2 及IL-17 的變化。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雌雄各半實(shí)驗(yàn)級(jí)大鼠60 只，4 周齡，體重（100±20）g。一般狀態(tài)良好，無脫毛，無斷尾。

1.2 藥物與試劑

三子養(yǎng)親湯：實(shí)驗(yàn)所需的生藥飲片萊菔子、紫蘇子、白芥子均購于哈藥集團(tuán)世一堂中藥飲片有限責(zé)任公司，加12 倍水煎煮2 次，1.5 h/次，濃縮成所需濃度，置-4 ℃冰箱內(nèi)冷藏備用。

氫氧化鋁干粉購自天津市巴斯夫化工有限公司；卵清蛋白購自哈爾濱百杰斯生物公司；大鼠血清IL-2、大鼠血清IL-17 酶聯(lián)免疫試劑盒由南京建成生物研究所生產(chǎn)。

1.3 主要儀器

402AI 型超聲霧化器、JY5002 型電子天平（0.01～500 g）；BS223S 型分析天平（0.001～220 g）；全自動(dòng)酶標(biāo)儀、微量移液器；TGL-16G 型臺(tái)式離心機(jī)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 模型的制備、分組及給藥

將60 只大鼠隨機(jī)分為三組，即空白對照組、哮喘模型組、中藥灌胃組，每組20 只。空白對照組自由飼養(yǎng)，給藥組注射卵清蛋白和氫氧化鋁致敏，及霧化吸入OVA 造模?？瞻讓φ战M予生理鹽水進(jìn)行腹腔注射及霧化吸入。中藥灌胃組幼鼠從第1 次哮喘激發(fā)開始（造模第15 天）至處死前每天給予中藥湯劑10.5 mL/kg，灌胃1 次，中藥灌胃組連續(xù)給藥7 d 后，取10 只處死，剩余繼續(xù)給藥7 d 后處死，采集標(biāo)本。

2.2 中藥制備

將浸泡30 min 后的中藥飲片，煎煮1 次，倒出煎汁，再煎，2 次煎汁合在一起，煎煮成含量為1.5 g生藥/mL 的混懸液，混勻后裝瓶備用，放入冰箱于4 ℃保存。

2.3 血清IL-2、IL-17 含量測定

給藥結(jié)束后，以ELISA 方法檢測各組大鼠血清中IL-2 及IL-17 的含量。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 13.0 處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

血清IL-2、IL-17 的測定，詳見表1。

表1 各組大鼠血清IL-17、IL-2 含量比較（±s,OD 值）

表1 各組大鼠血清IL-17、IL-2 含量比較（±s,OD 值）

注：△與空白對照組比較P＜0.05；※與哮喘模型組比較P＜0.05。

4 討論

哮喘（Asthma）是兒童反復(fù)發(fā)作的常見疾病，以慢性氣道炎癥為特征，由多種細(xì)胞參與。與Th1/Th2 和Th17/Treg 細(xì)胞比例失衡有關(guān)[7-10]。白介素2是旁分泌生長因子及淋巴細(xì)胞生長因子，能加強(qiáng)B細(xì)胞的生長和分化、產(chǎn)生抗體，并能調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)免疫力[11]，Th17 細(xì)胞分泌IL-17 效應(yīng)因子，具有強(qiáng)大的招募中性粒細(xì)胞的作用[12-14]，促進(jìn)多種細(xì)胞釋放炎癥因子，促進(jìn)粘液腺分泌大量粘液，增加氣道的高反應(yīng)性，因而在哮喘中表現(xiàn)出促炎作用[15]。

三子養(yǎng)親湯針對“痰”“氣”“積”三大病理因素施治，紫蘇子降氣化痰，止咳平喘，使氣降則痰不逆而喘平；白芥子溫肺利氣，化痰散結(jié)，使痰化氣順而喘平；萊菔子消食除脹，降氣化痰，使氣降則痰消，食消則滿除。三者合用，可使氣順痰消，食積得化，咳喘得平，“寓運(yùn)于消”，祛邪而不傷正，適合應(yīng)用于兒童哮喘的防治。本研究表明與空白對照組比較，哮喘模型組IL-17 含量增加，其差異具有顯著性（P＜0.05）；與哮喘模型組比較，三子養(yǎng)親湯中藥灌胃組可明顯降低支氣管哮喘大鼠血清IL-17 含量，具有顯著性差異（P＜0.05）。與空白對照組比較，哮喘模型組大鼠血清IL-2 含量增加，其差異具有顯著性（P＜0.05）；而三子養(yǎng)親湯中藥灌胃組與哮喘模型組比較無顯著性差異（P＞0.05），其機(jī)制仍需進(jìn)一步研究及探討。