高翠玲 陳井麗

河南省鄭州市第七人民醫(yī)院(450006)

妊娠期糖尿病(GDM)是妊娠期間程度不一的糖耐量紊亂[1-2]。發(fā)病機(jī)制為胰島素抵抗與β細(xì)胞功能缺陷誘發(fā)糖代謝紊亂[3-4]。有文獻(xiàn)報(bào)道維生素D缺乏會誘發(fā)胰島β細(xì)胞功能衰退,導(dǎo)致胰島素抵抗,具體作用機(jī)制仍在研究[5]。另有研究指出,胎盤生長因子(PLGF)在子癇前期可作用于滋養(yǎng)細(xì)胞,發(fā)揮抑制作用,但PLGF在高糖基礎(chǔ)中表達(dá)的調(diào)控情況有待研究[6]。本文重點(diǎn)探討維生素D和PLGF在妊娠期糖尿病患者中的表達(dá)及對妊娠結(jié)局及胎兒的影響。

1 資料和方法

1.1 一般資料

以2018年1月－2019年3月本院產(chǎn)科分娩的GDM孕婦85例為GDM組,另選擇同期定期產(chǎn)前檢查的健康孕婦80例為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①GDM診斷符合《妊娠期糖尿病診治標(biāo)準(zhǔn)》[7]與《中國2型糖尿病防治指南》[8]中GDM診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡20～50歲；③單次、首胎妊娠、胎齡30～33周。排除標(biāo)準(zhǔn)：①服用對維生素D影響的藥物；②GDM高危因素包括糖尿病家族史、妊娠前超重或肥胖、多囊卵巢綜合征；③合并嚴(yán)重心肺功能不全等慢性疾病。孕婦均自愿參與本研究且簽署知情同意書,本研究經(jīng)本院倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

所有受試者首次入院第3天清晨空腹抽取靜脈血離心分離血清,全自動(dòng)生化儀(美國貝克曼庫爾特公司,AU5800貝克曼全自動(dòng)生化儀)檢測血糖濃度；高效液相色譜儀(上海儀電分析儀器有限公司,LC210高校液相色譜儀)檢測血清中維生素D水平；酶聯(lián)免疫吸附法檢測PLGF水平。待胎盤娩出后,收集母體面中心處絨毛組織,取出面積約1cm×1cm×1cm,無菌氯化鈉液0.9%漂洗胎盤組織表層血跡,一塊存放凍存管中,另一塊10%甲醛固定操作后石蠟包埋,切片,蘇木精伊紅染色,置光鏡中觀察胎盤組織形態(tài)變化。Western Bolt法提取胎盤組織蛋白,調(diào)整濃度到1μg/μl,同時(shí)抽取20μl添加十二烷基苯磺酸鈉-聚丙烯酰胺完成電泳,然后添加偏氟乙烯膜上,5%脫脂牛奶封閉1h后,一抗4℃中過夜；二抗室溫孵育1h,ECL試劑發(fā)光顯影。鏈霉菌抗生物素過氧化物酶法處理石蠟切片,2%乙二胺四乙酸溶液煮沸抗原高壓熱修復(fù),滴加3%H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫15 min,滴加一抗4℃過夜,DAB顯色蘇木精復(fù)染封固,計(jì)算PLGF平均灰度值(OD),以平均值計(jì)算PLGF相對含量。

1.3 觀察指標(biāo)

①記錄兩組維生素D和PLGF水平變化；觀察兩組胎盤HE染色結(jié)果、PLGF蛋白表達(dá)水平及光密度值；以妊娠期糖尿病患者維生素D、血清PLGF水平[9]分為正常組(維生素D≥30ng/ml、PLGF＞100pg/ml)與不足組(維生素D＜29ng、PLGF＜100pg/ml),比較兩組妊娠結(jié)局(早產(chǎn)、胎兒宮內(nèi)窘迫、剖宮產(chǎn)和產(chǎn)鉗助產(chǎn))與新生兒情況(高膽紅素血癥、巨大兒、早產(chǎn)兒和新生兒窒息)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

GDM組85例,年齡(25.6±3.6)歲,孕周(31.6±0.7)周,孕前體質(zhì)指數(shù)(BMI)(20.3±0.5)kg/m2；對照組80例,年齡(25.1±3.5)歲,孕周(31.5±0.7)周,孕前BMI(20.5±0.5)kg/m2。兩組年齡、孕周和孕前BMI無差異(P＞0.05)。

2.2 兩組血清維生素D和PLGF比較

GDM組血清維生素D(17.15±4.51 ng/ml)和PLGF水平(72.05±21.55 pg/ml)均低于對照組(43.08±3.97 ng/ml、132.36±22.78 pg/ml)(均P＜0.05)。

2.3 兩組胎盤HE染色

400倍光鏡下觀察,GDM組胎盤絨毛大小無均勻性,見密集絨毛血管分布,絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞儀單層為主,合體滋養(yǎng)細(xì)胞與細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞呈現(xiàn)為低表達(dá)。對照組中胎盤絨毛均勻,合體滋養(yǎng)細(xì)胞與細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞正常分布。見圖1(見封三)。

2.4 兩組PLGF蛋白表達(dá)水平及OD值

GDM組胎盤中PLGF蛋白相對表達(dá)(1.02±0.76)高于對照組(0.78±0.64)(P＜0.05),見圖2、圖3；免疫組織化檢測PLGF在胎盤中的原位表達(dá),GDM組PLGF陽性表達(dá)(2.97±1.12)高于對照組(1.75±0.97)(P＜0.05),見圖4(見封三)、圖5。

圖2 PLGF western blot檢測結(jié)果

圖3 PLGF Western blot檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)分析圖

圖5 兩組胎盤組織中PLGF蛋白表達(dá)

2.5 GDM組維生素D、血清PLGF與不良妊娠結(jié)局及新生兒

GDM組中,維生素D、血清PLGF不足組53例,正常組33例。不良妊娠結(jié)局發(fā)生率不足組高于正常組(P＜0.05),見表1。

表1 維生素D、PLGF與不良妊娠結(jié)局及新生兒并發(fā)癥[例(%)]

3 討論

有報(bào)道認(rèn)為,維生素D缺乏與2型糖尿病密切相關(guān)。既往文獻(xiàn)報(bào)道,于大鼠下丘腦位置將維生素D活化為25(OH)D3后,大鼠葡萄糖耐受性顯著升高,胰島素敏感性上升,認(rèn)為維生素D有良好的食欲與血糖調(diào)控作用[10-12]。人與大鼠均主要通過下丘腦調(diào)控血糖水平,通過聯(lián)合下丘腦調(diào)控中樞的維生素D受體進(jìn)一步增強(qiáng)胰島素受體對胰島素敏感性,提高對葡萄糖的耐受性,實(shí)現(xiàn)血糖水平的穩(wěn)定狀態(tài)[13]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn),孕婦維生素D缺乏與GDM發(fā)生具有相關(guān)性,維生素D缺乏的群體出現(xiàn)GDM的風(fēng)險(xiǎn)達(dá)到正常群體的2倍。因此可針對孕婦適當(dāng)補(bǔ)充維生素D,調(diào)節(jié)血漿維生素D水平[14-15]。本研究中,GDM組血清維生素D和PLGF水平低于對照組,進(jìn)一步提示GDM孕婦中維生素D與PLGF水平的異常。在產(chǎn)前檢查時(shí)針對GDM孕婦應(yīng)重視其維生素D和PLGF水平篩查,避免對妊娠結(jié)局及胎兒造成不良影響。

PLGF主要在胎盤組織中表達(dá)。有研究報(bào)道,PLGF表達(dá)異常會影響胎盤的正常功能,血流動(dòng)力學(xué)發(fā)生變化,母體營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)下降或中斷,嚴(yán)重的會誘發(fā)胎兒窒息、早產(chǎn)甚至母嬰死亡[16-19]。本文GDM組孕婦胎盤中的PLGF蛋白相對表達(dá)水平高于對照組,PLGF陽性表達(dá)高于對照組,提示GDM患者胎盤組織中PLGF呈高表達(dá),具體原因有待研究。本研究對妊娠期糖尿病患者維生素D、PLGF水平異常對妊娠結(jié)局與新生兒的影響進(jìn)行分析,結(jié)果顯示不足組不良妊娠結(jié)局及新生兒不良發(fā)生率均高于正常組,提示GDM孕婦血清維生素D不足、PLGF下降均可能導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局發(fā)生。

綜上所述,GDM患者應(yīng)在妊娠早期時(shí)定期檢測血清維生素D水平,不足時(shí)應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充維生素D,調(diào)控PLGF蛋白水平,以減少不良妊娠結(jié)局發(fā)生。