程秀蓮 韓利峰 唐秀麗 趙 娜 劉寧寧

張家口市第一醫(yī)院消化科 （河北 張家口，075000）

肝癌患者預(yù)后較差，5年總生存率低于15%，是全球第二大癌癥死亡原因［1，2］。肝癌主要與慢性乙型肝炎病毒（HBV）和慢性丙型肝炎病毒（HCV）的感染有關(guān)［3］。其他主要危險(xiǎn)因素包括長(zhǎng)期接觸黃曲霉毒素、慢性酒精中毒、身體肥胖、糖尿病、口服避孕藥的使用和營(yíng)養(yǎng)缺乏等［4，5］。肝癌是最難治療的癌癥之一，很多患者被診斷時(shí)已是晚期。目前經(jīng)導(dǎo)管肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)（TACE）是治療晚期肝癌患者的重要方法之一，本研究探討TACE聯(lián)合索拉菲尼對(duì)肝癌患者血清miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21表達(dá)的影響，為臨床選擇治療方案提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2014年3月至2016年4月本院收治的原發(fā)性肝癌患者124例，隨機(jī)分為對(duì)照組和研究組，每組62例。納入標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)病理診斷或歐洲肝病協(xié)會(huì)（EASL）制定的原發(fā)性肝細(xì)胞癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，即兩種影像學(xué)監(jiān)測(cè)到2 cm以上的富血供病變或一種影像學(xué)顯示為富血供病變且甲胎蛋白＞400 ng／m l。肝功能分級(jí)依據(jù)Child-Pugh評(píng)估。患者不能接受根治性治療（如肝移植、腫瘤切除術(shù)或經(jīng)皮射頻消融術(shù)）。排除標(biāo)準(zhǔn)：不愿參與本研究或不符合診斷標(biāo)準(zhǔn)者；患有艾滋病等具有較重傳染性疾病的患者；其他腫瘤轉(zhuǎn)移到肝臟者；兩周內(nèi)使用其他藥物藥物者；妊娠或哺乳期婦女；合并有嚴(yán)重心、腎功能不全疾病的患者；對(duì)索拉非尼過(guò)敏者；患有精神類疾病不能配合研究者。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本收集 對(duì)照組患者給予TACE治療，研究組患者給予TACE聯(lián)合索拉菲尼治療，索拉菲尼劑量為400 mg／次，bid。術(shù)后8周收集兩組患者清晨空腹靜脈血注入無(wú)抗凝劑干燥管，輕輕混勻后離心10 min，吸取上層血清于無(wú)RNA酶的EP管中，放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。收集患者清晨空腹靜脈血注入促凝管，離心后取上清液，放入-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 試劑和儀器 使用定量PCR檢測(cè)miR-21-5p表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用相對(duì)定量法進(jìn)行分析，計(jì)算2-ΔΔCT表示研究組相對(duì)對(duì)照組表達(dá)量的比值。RNA提取試劑盒mirvana PARIS、定量PCR檢測(cè)試劑盒Tag Man MIRNA Reverse2 Transcription Kit和Taqman Real-time PCR assays購(gòu)自于德國(guó)Qiagen公司。主要儀器有Rotor-Gene Q實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、ThermoNanoDrop 2000 Lite分光光度計(jì)、旋渦震蕩器、高低速離心機(jī)等。ELISA法檢測(cè)survivin蛋白、IL-21水平，試劑盒由北京博奧生物有限公司提供，按試劑盒操作步驟說(shuō)明進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用χ2或配對(duì)樣本t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析使用Pearson相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般情況 見表1。

2.2 兩組患者血清中miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21檢測(cè)結(jié)果 見表2。

2.3 miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21判斷原發(fā)性晚期肝癌患者術(shù)后病情控制效果的臨床意義 將124例患者重新分為術(shù)后疾病控制組和疾病進(jìn)展組。采用RECIST標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估治療效果，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、穩(wěn)定（SD）和疾病進(jìn)展（PD）4個(gè)等級(jí)。疾病控制組為CR、PR、SD的總例數(shù)，共82例；疾病進(jìn)展組為PD的例數(shù)，42例。疾病進(jìn)展代表術(shù)后病情在8周后未得到控制。本研究應(yīng)用受試者操作特性曲線（ROC）分析患者血清中miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21水平判斷晚期肝癌患者術(shù)后病情控制效果的ROC曲線下面積（AUC）分別為0.879、0.924、0.845，見圖1。說(shuō)明使用此3項(xiàng)指標(biāo)判斷晚期肝癌患者術(shù)后病情是否得到控制準(zhǔn)確性較高。

表1 一般臨床資料在兩組患者間比較

表2 兩組患者miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21的結(jié)果比較（±s）

表2 兩組患者miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21的結(jié)果比較（±s）

與對(duì)照組比較，*P＜0.05

組別 例數(shù) miR-21-5p survivin蛋白（ng／L） IL-21（ng／L）62 78.69±5.32 1034.69±627.81研究組 62 0.56±0.05* 52.85±4.25* 2154.23±504.95對(duì)照組*

圖1 miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21判斷晚期肝癌患者術(shù)后病情控制效果ROC曲線圖

2.4 兩組患者1和3年存活率 電話隨訪兩組患者，研究組患者1、3年存活分別為53例（85.4%）和18例（48.4%），對(duì)照組分別為45例（72.6%）和18例（29.0%），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

3 討論

自20世紀(jì)80年代的分子革命以來(lái)，對(duì)癌癥病因的認(rèn)識(shí)更加深入，從而發(fā)現(xiàn)和發(fā)展了針對(duì)性的治療方法，以抑制癌癥特異性途徑。由于索拉非尼對(duì)腎細(xì)胞癌和肝細(xì)胞癌的作用，已被臨床批準(zhǔn)用于治療晚期腎細(xì)胞癌和肝細(xì)胞癌［6］。索拉非尼與傳統(tǒng)療法相結(jié)合也具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。一項(xiàng)臨床試驗(yàn)表明，索拉非尼聯(lián)合TACE治療不能切除的肝癌，疾病控制率高達(dá)91.2%，聯(lián)合治療大大延長(zhǎng)了中晚期肝癌患者的生存時(shí)間［7］。在本研究中，索拉非尼聯(lián)合TACE組患者的治療有效率和疾病控制率相對(duì)于單純TACE治療組患者均顯著提高。

許多研究表明，小RNA調(diào)控許多細(xì)胞過(guò)程，包括分化、增殖、遷移和凋亡［8］。小RNA miR-21-5p在多種癌癥中高度表達(dá)，如喉癌、胃癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌等，可以促進(jìn)癌細(xì)胞增殖［9-13］。本研究發(fā)現(xiàn)索拉非尼和TACE聯(lián)合應(yīng)用能明顯降低患者血清中的miR-21-5p含量，有助于改善患者預(yù)后。survivin蛋白在大多數(shù)人類癌癥中呈高度表達(dá)，通過(guò)抑制凋亡等多種途徑促進(jìn)腫瘤的發(fā)展［14］。survivin蛋白的過(guò)度表達(dá)與腫瘤惡性、化療抵抗和局部腫瘤復(fù)發(fā)相關(guān)，使其成為人類癌癥治療的一個(gè)有吸引力的靶點(diǎn)。本研究發(fā)現(xiàn)索拉非尼和TACE聯(lián)合應(yīng)用能明顯降低患者血清中的survivin蛋白含量。IL-21是T細(xì)胞的生長(zhǎng)因子，在T細(xì)胞的活化和增殖中起重要作用，激活B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，激活T細(xì)胞分泌IL-2［15］。IL-21可以激活免疫系統(tǒng)，顯著抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)［16］。本研究發(fā)現(xiàn)索拉非尼聯(lián)合TACE能明顯升高患者血清中的IL-21含量，這有助于幫助患者抵抗癌癥，改善預(yù)后。本研究應(yīng)用受試者操作特性曲線（ROC）發(fā)現(xiàn)miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21在判斷晚期肝癌患者術(shù)后病情控制效果方面的價(jià)值。本研究通過(guò)對(duì)患者電話隨訪發(fā)現(xiàn)索拉非尼聯(lián)合TACE治療可顯著增加肝癌患者的3年生存率，降低復(fù)發(fā)率。因此，聯(lián)合索拉非尼和TACE治療可能通過(guò)調(diào)節(jié)肝癌患者體內(nèi)miR-21-5p、survivin蛋白、IL-21表達(dá)水平，影響治療效果。三者可能是晚期肝癌患者術(shù)后病情控制效果的診斷標(biāo)志物，對(duì)患者術(shù)后病情評(píng)估具有重要臨床意義，但具體機(jī)制有待于進(jìn)一步探討。