,*

(1.桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院,廣西桂林 541004;2.井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院,江西吉安 343000)

莪術(shù)醇(curcumol,Cur)又名姜黃醇,屬于倍半萜類化合物,存在于姜科植物蓬莪術(shù)、廣西莪術(shù)或溫郁金的干燥根莖中,是莪術(shù)揮發(fā)油的主要抗腫瘤成分[1-2];分子式為C15H24O2,分子量為236.35;在有機(jī)溶劑中溶解度較大,易溶于乙醚、氯仿,溶于乙醇,幾乎不溶于水,在水中的溶解度僅為0.3%。莪術(shù)醇被證明在肝癌、宮頸癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌等多種人類癌癥中具有體內(nèi)和體外抑制增殖及誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)[3-4]。

脂質(zhì)體(Liposome,Lp)具有良好的生物相容性和腫瘤靶向性,是近年來(lái)研究較多的一種藥物載體,可以作為各類化療藥物的傳遞載體[5-6]。利用脂質(zhì)體包裹莪術(shù)醇可提高其溶解度,增強(qiáng)其穩(wěn)定性。但是,普通脂質(zhì)體易從體內(nèi)清除,聚乙二醇[Poly(ethylene glycol),PEG]修飾普通脂質(zhì)體制備而得的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體可躲避巨噬細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的識(shí)別和吞噬,延長(zhǎng)脂質(zhì)體在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間,從而提高制劑在腫瘤部位的蓄積,達(dá)到更好的抗腫瘤效果[6-7]。Walkey等[8]報(bào)道稱隨著PEG修飾密度的升高,血清蛋白吸附量和巨噬細(xì)胞對(duì)制劑的攝取能力均顯著下降,證明兩者顯著相關(guān)。

本研究采用薄膜分散法制備莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體,測(cè)定了其形態(tài)、粒徑、電位、包封率;考察其體外釋放和初步穩(wěn)定性;并進(jìn)一步考察了莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的細(xì)胞攝取及細(xì)胞毒性作用。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

莪術(shù)醇(98%,批號(hào):CC070518) 上海滬云醫(yī)藥開(kāi)發(fā)有限公司;二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000,批號(hào):B03011) 上海芃碩生物有限公司;噻唑藍(lán) MTT，美國(guó)Sigma公司;香豆素-6 批號(hào):MKBV4602V，美國(guó)Alorich公司;DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、0.25%胰酶、青霉素-鏈霉素溶液 美國(guó)Gibco公司;膽固醇 上海行知化工廠;卵磷脂 德國(guó)Lipoid公司;透析袋,截留相對(duì)分子量8000-14000 上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)公司;微孔濾膜(0.22 μm) 天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司,人三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB231 桂林醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心贈(zèng)予。

LC-20A高效液相色譜儀 日本Shimadzu公司;EYEL4旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海愛(ài)朗儀器有限公司;JY88-Ⅱ超聲波細(xì)胞粉碎機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司;透射電子顯微鏡 日本Hitachi公司;SHA-B恒溫震蕩器 常州國(guó)華電器有限公司;CP225D型電子天平 德國(guó)Sartorius公司;DF-101集熱式恒溫磁力攪拌器 鞏義市英峪予華儀器廠;Nano ZS90激光散射粒度分析儀 英國(guó)Malvern公司;SynergyHTX多功能酶標(biāo)儀 美國(guó)Bio Tek公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 莪術(shù)醇含量測(cè)定方法的建立

1.2.1.1 色譜條件 色譜柱:Hypersil BDS C18反相柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流速1.0 mL·min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm;柱溫:30 ℃;流動(dòng)相:乙腈:0.2%醋酸水溶液(體積55∶45);進(jìn)樣量:20 μL[9]。

1.2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱定莪術(shù)醇對(duì)照品于容量瓶中,用甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶,搖勻,得對(duì)照品儲(chǔ)備液。濃度分別為10、20、40、80、160 μg·mL-1,精密吸取20 μL進(jìn)樣,以峰面積對(duì)質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸[10]。

1.2.1.3 精密度試驗(yàn) 精密稱取莪術(shù)醇對(duì)照品于容量瓶中,用甲醇溶解稀釋并定容至10 mL,濃度為40 μg·mL-1,搖勻,按“1.2.1.1”項(xiàng)下色譜條件,連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定5次,記錄莪術(shù)醇峰面積,計(jì)算日內(nèi)精密度[10]。

1.2.1.4 穩(wěn)定性考察 精密稱取莪術(shù)醇對(duì)照品于容量瓶中,適量甲醇溶解后,用甲醇稀釋并定容至10 mL,濃度為40 μg·mL-1,搖勻,于0、1、2、4、6、8 h,按“1.2.1.1”項(xiàng)下色譜條件,進(jìn)樣分析,測(cè)定記錄莪術(shù)醇峰面積。

1.2.1.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知質(zhì)量濃度的莪術(shù)醇脂質(zhì)體樣品溶液9份,各0.5 mL,分別加入80%、100%、120%的莪術(shù)醇對(duì)照品,加甲醇溶解超聲10 min(200 W,30 ℃),0.22 μm微孔濾膜濾過(guò),精密吸取20 μL,HPLC測(cè)定。將結(jié)果代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算質(zhì)量濃度,與實(shí)際質(zhì)量濃度相比,得到樣品回收率[9]。

1.2.2 莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備 采用薄膜分散法制備長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體[11-13],精確稱取處方量的莪術(shù)醇0.018 g,卵磷脂0.09 g,膽固醇0.009 g和DSPE-PEG2000 0.0018 g,加入三氯甲烷溶解,置于圓底燒瓶中,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜(45 ℃,轉(zhuǎn)速為80 r/min),真空干燥2 h,加0.05 mol·L-1,pH6.5的磷酸鹽緩沖液,于恒溫水浴里水化30 min,超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)探頭超聲6 min(150 W),過(guò)0.22 μm濾膜,即得莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。載熒光探針香豆素-6(Coumarin-6,C6)長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體制備:只需把莪術(shù)醇換成香豆素-6即可,其他步驟同莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。

1.2.3 莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的表征

1.2.3.1 粒徑和電位測(cè)定 取一定量脂質(zhì)體,稀釋后,置于比色皿中,于激光粒度分析儀中測(cè)定,觀察其粒徑和電位及其分布[14-15]。

1.2.3.2 透射電鏡下形態(tài)觀察 取脂質(zhì)體少量,滴加到電鏡專用銅網(wǎng),放置3 min,吸取過(guò)多的樣品,1% 磷鎢酸溶液負(fù)染,將銅網(wǎng)自然晾干,在透射電鏡下觀察其形態(tài)[16]。

1.2.3.3 包封率的測(cè)定 按“1.2.2項(xiàng)”下工藝及處方制備3批莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。精密量取莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體2 mL,加入透析袋(截留相對(duì)分子量8000～14000)中,置于磷酸鹽緩沖液(pH6.5,90 mL)中,每個(gè)樣品平行3份,避光,30 ℃恒溫振蕩8 h后,收集透析袋中的液體1 mL,轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中,加入適量甲醇超聲破乳,待脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)被充分破壞后,加入甲醇定容。另精密量取1 mL未透析莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體置10 mL容量瓶中,甲醇定容。所得溶液分別過(guò)0.22 μm濾孔濾膜,進(jìn)HPLC檢測(cè)莪術(shù)醇的含量。計(jì)算包封率(EE)[17-18]。

EE(%):為包封率,W1和W2分別表示包封于長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體中莪術(shù)醇的質(zhì)量和莪術(shù)醇的總質(zhì)量。

1.2.3.4 體外釋放的測(cè)定 精密量取莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體,莪術(shù)醇脂質(zhì)體以及莪術(shù)醇溶液2 mL,加入透析袋(截留相對(duì)分子量8000～14000)中,兩端加緊后置于磷酸鹽緩沖液(pH6.5,30 mL)中,每個(gè)樣品平行3份,避光,37 ℃恒溫振蕩。分別于1、2、4、6、8、10、12、24、48、72 h吸取2 mL透析液,并補(bǔ)加等體積磷酸鹽緩沖液[19-20]。按“1.2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定其含量,并計(jì)算藥物的累積釋放百分率。

1.2.3.5 放置穩(wěn)定性 取莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體3批,分別在4 ℃和常溫條件下放置保存,分別于第0、1、2個(gè)月取樣,觀察是否有分層、沉淀現(xiàn)象,考察粒徑及藥物含量變化情況[21-22]。

1.2.4 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

1.2.4.1 體外細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn) 采用熒光強(qiáng)度值定量測(cè)定細(xì)胞的攝取情況。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期MDA-MB231細(xì)胞加至96孔板,細(xì)胞密度為1×105個(gè)·mL-1,0.1 mL/孔,培養(yǎng)24 h。用含6.25、12.50、25 μg·mL-1載香豆素6的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體和普通脂質(zhì)體(PEG-Lp-C6,Lp-C6)的完全培養(yǎng)基,空白對(duì)照組為完全培養(yǎng)基,在37 ℃下孵育4 h,觀察細(xì)胞狀態(tài)正常,符合實(shí)驗(yàn)要求,冷PBS洗3次,每次5 min。1% TritonX-100處理細(xì)胞45 min,熒光酶標(biāo)儀測(cè)定OD值(激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為466 nm,505 nm)[23-24]。

1.2.4.2 MDA-MB231細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn) 采用MTT法考察脂質(zhì)體對(duì)細(xì)胞的毒性[25-26]。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期MDA-MB231細(xì)胞,以1×105個(gè)·mL-1的密度接種于96孔板,0.1 mL/孔,37 ℃培養(yǎng)24 h后,按6.25、12.5、25、50、100 μg·mL-1的濃度分組加入載莪術(shù)醇的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體(PEG-Lp-Cur,Lp-Cur)和莪術(shù)醇溶液(Cur)的完全培養(yǎng)基,空白對(duì)照組為完全培養(yǎng)基,作用24 h后,每孔加入MTT溶液200 μL,孵育4 h后,每孔加DMSO 150 μL,振蕩10 min。采用酶標(biāo)儀570 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,計(jì)算細(xì)胞存活率(Cell Viability,CV)及IC50。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行顯著性分析,獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)法(T-test)考察組間差異。計(jì)量數(shù)據(jù)用Mean±SD表示(n=3)。兩組數(shù)據(jù)間顯著性差異表示為P<0.05,采用GraphPad-Prism5進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 含量測(cè)定方法學(xué)考察結(jié)果

方法學(xué)考察結(jié)果顯示,HPLC測(cè)定系列濃度的莪術(shù)醇對(duì)照品溶液,以峰面積(A)對(duì)濃度(C)進(jìn)行線性回歸分析,得莪術(shù)醇標(biāo)準(zhǔn)曲線:A=35.574C+128.17(r=0.9993),表明莪術(shù)醇在10～160 μg·mL-1內(nèi)峰面積與濃度線性關(guān)系良好。方法的日內(nèi)、日間精密度分別為1.56%、1.87%,均小于2.0%;莪術(shù)醇在8 h內(nèi)的穩(wěn)定性良好,RSD小于2.0%;高中低三個(gè)濃度莪術(shù)醇的平均方法回收率為96.8%,RSD小于2.0%;符合HPLC樣品測(cè)定的方法學(xué)要求?？蛇M(jìn)行莪術(shù)醇含量測(cè)定。

2.2 莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的表征

2.2.1 粒徑和zeta電位測(cè)定 脂質(zhì)體的粒徑和電位如表1和圖1所示。莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的粒徑(150.3±4.0) nm,PDI為0.197±0.009,粒徑分布較窄,zeta電位(-24.5±0.7) mV,莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體粒徑較莪術(shù)醇脂質(zhì)體稍大,可能是PEG長(zhǎng)鏈在脂質(zhì)體表面形成了一層水化膜的緣故,其表面負(fù)電性強(qiáng)于莪術(shù)醇脂質(zhì)體,粒子間的靜電排斥可提高脂質(zhì)體的分散性,有利于其穩(wěn)定性。

表1 莪術(shù)醇脂質(zhì)體的粒徑和zeta電位Table 1 The particle size and zeta potential ofLp-Cur and PEG-Lp-Cur

圖1 莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體粒徑分布Fig.1 The particle size distribution of PEG-Lp-Cur

2.2.2 透射電鏡下形態(tài)觀察 透射電鏡結(jié)果見(jiàn)圖2,莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體外觀形態(tài)均為類球形小囊泡,偶見(jiàn)空心囊泡結(jié)構(gòu),粒子間無(wú)聚集現(xiàn)象,分布較均勻。

圖2 莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體透射電鏡形態(tài)Fig.2 Morphology of PEG-Lp-Curby transmission electron microscope

2.2.3 包封率測(cè)定 制備3批莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體,包封率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的平均包封率為80.24%,表明制備工藝穩(wěn)定可行。

表2 包封率測(cè)定結(jié)果(%)Table 2 Results of determination of entrapment efficiency(%)

表3 莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體在常溫條件下的穩(wěn)定性(n=3)Table 3 Stability of PEG-Lp-Cur at room temperature(n=3)

表4 莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體在4 ℃條件下的穩(wěn)定性(n=3)Table 4 Stability of PEG-Lp-Cur at 4 ℃(n=3)

2.2.4 體外釋放的測(cè)定 莪術(shù)醇體外釋放結(jié)果見(jiàn)圖3。在1 h時(shí),游離莪術(shù)醇溶液、莪術(shù)醇脂質(zhì)體及莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的累積釋放率分別為96.40%、19.96%和13.70%,HPLC法測(cè)定莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體在初期釋放較慢,可能是PEG在脂質(zhì)體外形成的水化膜而減慢藥物的釋放,72 h累積體外釋放百分率為52.6%,與脂質(zhì)體釋放基本一致。原因可能是脂質(zhì)體本身可使藥物具有一定的緩釋作用,加之莪術(shù)醇為脂溶性藥物和釋放介質(zhì)的影響,使得藥物釋放緩慢[27]。

圖3 莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的體外釋放曲線Fig.3 The curve of release of PEG-Lp-Cur in vitro

2.2.5 放置穩(wěn)定性 結(jié)果見(jiàn)表3和表4,莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體在常溫條件下存放2個(gè)月,有較多沉淀產(chǎn)生,振搖亦不可完全復(fù)原,粒徑有較大幅度增大,藥物含量下降明顯。在4 ℃條件下存放2個(gè)月,有少量沉淀和絮凝產(chǎn)生,經(jīng)振搖可復(fù)原,均勻性良好,含藥量為79.76%,粒徑變化不大。結(jié)果表明,莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體在4 ℃條件下穩(wěn)定性較好。

2.3 體外細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)

為了考察長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的體外靶向性,以普通脂質(zhì)體作為對(duì)照,定量觀察MDA-MB231細(xì)胞對(duì)包載香豆素-6的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體攝取情況。在37 ℃條件下,結(jié)果如圖4所示,隨著香豆素-6濃度的增加,MDA-MB231細(xì)胞對(duì)載有香豆素-6的長(zhǎng)循環(huán)和普通脂質(zhì)體的攝取量逐漸增大,提示MDA-MB231細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)循環(huán)和普通脂質(zhì)體的攝取呈濃度依賴性,并且在香豆素-6相同濃度下MDA-MB231細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體攝取明顯高于普通脂質(zhì)體。提示DSPE-PEG2000可能增加了MDA-MB231細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的攝取[28]。

圖4 MDA-MB231細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的細(xì)胞攝取效率(n=3)Fig.4 Cellular uptake efficiency of the liposomeson MDA-MB231 cells(n=3)注:組間比較，*表示具有顯著差異,P<0.05。

2.4 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

圖5 莪術(shù)醇對(duì)MDA-MB231細(xì)胞的細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)Fig.5 Cytotoxicity of curcumolon MDA-MB231 cells in vitro

莪術(shù)醇各種制劑的細(xì)胞毒性如圖5所示。與空白對(duì)照組對(duì)比,莪術(shù)醇各制劑組隨藥物濃度的增加細(xì)胞毒性均明顯增強(qiáng),莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的體外抗腫瘤活性強(qiáng)于同濃度的莪術(shù)醇普通脂質(zhì)體和游離莪術(shù)醇,經(jīng)計(jì)算Cur、Lp-Cur和PEG-Lp-Cur的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為45.14、23.50、10.22 μg·mL-1。表明莪術(shù)醇包載于脂質(zhì)體后可以提高其體外抗腫瘤活性,尤其是經(jīng)DSPE-PEG2000修飾后的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體,體外抗腫瘤活性更強(qiáng)。機(jī)制可能與長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體能夠顯著提高乳腺癌細(xì)胞對(duì)莪術(shù)醇的攝取和延長(zhǎng)莪術(shù)醇在乳腺癌細(xì)胞中的滯留時(shí)間有關(guān)。在機(jī)體中聚乙二醇(PEG)修飾的脂質(zhì)體可以減少網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)吞噬細(xì)胞的攝取,經(jīng)實(shí)體腫瘤新生血管的滲透滯留增強(qiáng)作用(EPR)實(shí)現(xiàn)腫瘤靶向[29]。

3 討論

本研究采用薄膜分散法制備了莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體,粒徑分布較集中,分散較為均勻,制備3批脂質(zhì)體,平均包封率為80.24%,體外釋放緩慢具有明顯的緩釋效應(yīng),可能由于DSPE-PEG2000的加入脂質(zhì)體中,伸展的PEG長(zhǎng)鏈在脂質(zhì)體表面形成了一層水化膜,導(dǎo)致藥物釋放減慢[21]。在4 ℃條件下存放2個(gè)月粒徑和含藥量無(wú)明顯變化,穩(wěn)定性較好,符合制備工藝要求。

細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)中,由于莪術(shù)醇無(wú)熒光,無(wú)法觀察腫瘤細(xì)胞對(duì)莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的攝取情況,故采用載香豆素-6的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體考察MDA-MB231細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的攝取情況。人三陰性乳腺癌MDA-MB231細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的體外攝取作用優(yōu)于普通脂質(zhì)體,這可能與長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體表面的PEG鏈的水化作用和細(xì)胞有更好的親和力有關(guān),增加了細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的攝取[29]。

細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)中,莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的體外抗腫瘤活性強(qiáng)于同濃度的莪術(shù)醇普通脂質(zhì)體和游離莪術(shù)醇,推測(cè)可能與脂質(zhì)體能改善莪術(shù)醇在水中的溶解度和延長(zhǎng)莪術(shù)醇在胞內(nèi)的滯留時(shí)間有關(guān),從而發(fā)揮更強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞作用,另外長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體可通過(guò)增加細(xì)胞攝取,進(jìn)而發(fā)揮莪術(shù)醇對(duì)MDA-MB231細(xì)胞的毒性作用[30],故表現(xiàn)出較強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞毒性作用。

4 結(jié)論

本研究通過(guò)薄膜分散法制備莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體,外觀形狀規(guī)整均一,理化性質(zhì)穩(wěn)定,包封率較高;體外釋放具有緩釋效果,穩(wěn)定性較好;長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體具有比普通脂質(zhì)體更高的攝取效率;體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)證明了載藥脂質(zhì)體制劑對(duì)MDA-MB231細(xì)胞的毒性具有濃度依賴性,在相同濃度下,莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體IC50值明顯低于莪術(shù)醇普通脂質(zhì)體和游離莪術(shù)醇,說(shuō)明莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體具有較強(qiáng)的MDA-MB231細(xì)胞的毒性,證明了莪術(shù)醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的抗人三陰性乳腺癌細(xì)胞作用。

以上研究結(jié)果表明,長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體能高效包載莪術(shù)醇,改善其在水中的溶解度,增加其穩(wěn)定性,提高腫瘤細(xì)胞對(duì)莪術(shù)醇的攝取,體外抗腫瘤作用較強(qiáng),為后續(xù)進(jìn)行藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究和荷瘤鼠體內(nèi)藥效學(xué)的研究打下基礎(chǔ)。