王雪俠，黨晨瀅

(鄭州市婦幼保健院 檢驗(yàn)科，河南 鄭州 453001)

新生兒遺傳代謝病一般是由遺傳物質(zhì)或者致病基因發(fā)生改變引起的，這類(lèi)疾病通常具有先天性、終身性和家族性的特點(diǎn)，且種類(lèi)繁多，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，發(fā)病輕重不一，無(wú)特異性[1]。雖然單一病種發(fā)病率較低，但是總體發(fā)病率較高，有報(bào)道新生兒遺傳代謝病的患病率在千分之五以上。部分遺傳代謝病患兒若未得到及時(shí)有效的診治，?？芍職垼瑖?yán)重者危及生命。遺傳代謝病的確診和分型常需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果來(lái)進(jìn)行，這些檢查包括特異的代謝物測(cè)定、酶活性測(cè)定、生化指標(biāo)測(cè)定和基因突變檢測(cè)。遺傳代謝病通過(guò)早期檢測(cè)、干預(yù)可以避免或減少?lài)?yán)重并發(fā)癥及神經(jīng)系統(tǒng)的損害，串聯(lián)質(zhì)譜法可以同時(shí)進(jìn)行幾十種氨基酸和肉堿的檢測(cè)。有研究表明串聯(lián)質(zhì)譜法在新生兒期進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)遺傳代謝病的早期診斷和預(yù)防有著舉足輕重的作用[2]。本研究的目的在于探討制定符合鄭州市新生兒人群的氨基酸和酰基肉堿參考區(qū)間，以使篩查更科學(xué)合理。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象選取2016年8月至2019年9月在鄭州市行政區(qū)域內(nèi)出生的新生兒[3]，其監(jiān)護(hù)人自愿參加新生兒遺傳代謝病檢測(cè)且簽署新生兒遺傳代謝病篩查知情同意書(shū)。各助產(chǎn)機(jī)構(gòu)采血人員嚴(yán)格按照《新生兒遺傳代謝病篩查血片采集技術(shù)規(guī)范》采集足跟血，采血時(shí)間要求為出生72 h后，7 d內(nèi)，并充分哺乳8次以上，對(duì)于各種原因延遲采血者，采血時(shí)間不超過(guò)出生后20 d[4]。足跟血制成干血斑，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)冷鏈遞送至實(shí)驗(yàn)室，不符合要求的血片予以退回，合格血片收入實(shí)驗(yàn)室。本研究的檢測(cè)項(xiàng)目包括11種氨基酸、31種肉堿，數(shù)據(jù)均來(lái)自日常工作，符合相關(guān)規(guī)定。本研究無(wú)任何利益沖突。

1.2 儀器與試劑廣州市豐華生物工程有限公司FH6000MD三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜分析系統(tǒng)，豐華DBS220X全自動(dòng)打孔儀，豐華恒溫微量振蕩器，超聲波清洗儀，豐華非衍生化多種氨基酸、?；鈮A測(cè)定試劑盒[5]。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1標(biāo)本采集 所有標(biāo)本均制成血斑，室溫下晾干(4～6 h)。

1.3.2樣品處理 使用自動(dòng)打孔器將質(zhì)控和標(biāo)本打孔，直徑約為3.0 mm，依次放入U(xiǎn)型底微孔板中，每孔加入已配制好的萃取液100 μL，封板，在30 ℃，700 r·min-1的條件下振蕩45 min，然后靜置5 min，揭去封板膜，每孔轉(zhuǎn)移65 μL至對(duì)應(yīng)位置的V型板內(nèi)，用鋁箔封板覆蓋，上機(jī)[6]。采用全掃描采集模式，通過(guò)IRC-Pro軟件計(jì)算各分析物濃度，整理成Excel表格供分析。

2 結(jié)果

2.1 正態(tài)性檢驗(yàn)經(jīng)單樣本Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)判斷資料的正態(tài)性，結(jié)果顯示11種氨基酸和31種肉堿為非正態(tài)分布[7]。

2.2 鄭州市新生兒11種氨基酸和31種肉堿的參考范圍本次研究數(shù)據(jù)為非正態(tài)分布，為了兼顧假陽(yáng)性和假陰性，選取雙側(cè)95%人群所在范圍作為正常參考范圍，以百分位數(shù)(P2.5，P97.5)表示，統(tǒng)計(jì)出鄭州市61 199個(gè)新生兒非衍生法遺傳代謝病篩查串聯(lián)質(zhì)譜指標(biāo)中氨基酸和?；鈮A(表1)的醫(yī)學(xué)參考范圍[8]。

表1 非衍生化法氨基酸和?；鈮A的參考范圍(μmol·L-1)

續(xù)表1

3 討論

新生兒遺傳代謝病的篩查在中國(guó)已有數(shù)年歷史，我國(guó)最早是從20世紀(jì)80年代開(kāi)始，首先開(kāi)展的醫(yī)院有上海市兒科研究所、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院，歷年的群體篩查證明，新生兒遺傳代謝病的篩查是一種行之有效的方法[9]。新生兒遺傳代謝病在群體篩查的三級(jí)預(yù)防中目標(biāo)明確，防治效果較好，可評(píng)估，獲益較大。傳統(tǒng)的新生兒遺傳代謝病篩查每個(gè)項(xiàng)目都需要各自打取血斑，分開(kāi)實(shí)驗(yàn)，而串聯(lián)質(zhì)譜篩查新生兒遺傳代謝病則具有快速、簡(jiǎn)便、標(biāo)本用量少(1個(gè)血斑)、檢測(cè)病種多等優(yōu)點(diǎn)。此外，非衍生化方法檢測(cè)多種氨基酸、?；鈮A時(shí)不易對(duì)環(huán)境和工作人員造成污染。2002年自串聯(lián)質(zhì)譜應(yīng)用于新生兒遺傳代謝病篩查以來(lái)，我國(guó)新生兒遺傳代謝病篩查工作取得了舉世矚目的成績(jī)，但是也伴隨著一些問(wèn)題，例如篩查項(xiàng)目不統(tǒng)一，各地參考范圍不同等。參考范圍不同會(huì)導(dǎo)致結(jié)果在判讀方面出現(xiàn)差異。

通過(guò)查閱文獻(xiàn)，本研究結(jié)果和國(guó)內(nèi)其他篩查中心的參考范圍有差異，考慮存在地區(qū)和環(huán)境因素，各實(shí)驗(yàn)室根據(jù)本地區(qū)情況制定相應(yīng)的參考范圍，才能夠更好地篩查出高?？梢苫純?。歷年的篩查經(jīng)驗(yàn)表明，制定科學(xué)合理的參考范圍才能使指標(biāo)更適用于臨床。從全國(guó)的統(tǒng)計(jì)來(lái)看，新生兒遺傳代謝病篩查普遍存在假陽(yáng)性率偏高的情況。本研究選取2016年8月至2019年9月在鄭州出生的61 199例新生兒作為觀察對(duì)象，通過(guò)軟件測(cè)算出11種氨基酸和31種肉堿的參考范圍。另外，還根據(jù)《新生兒疾病串聯(lián)質(zhì)譜篩查技術(shù)專(zhuān)家共識(shí)》[10]計(jì)算了一些氨基酸和酰基肉堿的比值指標(biāo)，例如常用的Arg/Orn、Arg/Phe、Phe/Tyr、C3/C2、C4/C2等37項(xiàng)比值，這些比值指標(biāo)可以用于疾病的判斷和分型。后期結(jié)合基因診斷和其他確診實(shí)驗(yàn)結(jié)果再定期進(jìn)行評(píng)估，以便于評(píng)價(jià)所有這些指標(biāo)的適宜性。新生兒遺傳代謝病篩查假陽(yáng)性率較高，合理制定醫(yī)學(xué)參考范圍，可減少假陽(yáng)性新生兒的出現(xiàn)，從而穩(wěn)定家庭情緒，減少經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。遺傳代謝病臨床表現(xiàn)形式多樣，發(fā)病年齡不定，多數(shù)表現(xiàn)不典型，缺乏特異性，全身各個(gè)器官均可受累[11]，以神經(jīng)系統(tǒng)和消化系統(tǒng)的表現(xiàn)較為突出，其余臨床表現(xiàn)還有急性代謝性腦病、高氨血癥、代謝性酸中毒等，對(duì)于不能用一般疾病解釋的臨床表現(xiàn)，應(yīng)高度懷疑為遺傳代謝病。制定合理的參考范圍，對(duì)遺傳代謝病的篩查和診斷有著非常重要的作用，可更好地提高出生人口素質(zhì)，輔助臨床診治。