王卓婷 鄒曉平 陳 敏 沈永華 黃淑玲 顧正宇

南京大學醫(yī)學院附屬南京鼓樓醫(yī)院消化科(210008)

背景：已有研究發(fā)現(xiàn)質(zhì)子泵抑制劑(PPI)可抑制空泡型質(zhì)子泵(V-ATPases)表達、影響胃癌細胞糖酵解水平。V-ATPases對腫瘤惡性生物學行為具有重要意義。目的：探討PPI通過抑制糖酵解和谷氨酰胺代謝作用于胃癌的機制。方法：在細胞實驗部分，對胃癌細胞株進行PPI加藥處理并沉默相關(guān)分子，以CCK-8法檢測細胞增殖，流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡，定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法分別檢測mRNA和蛋白表達。在動物實驗部分，將裸鼠分為空白對照組、0.9% NaCl溶液灌胃組、泮托拉唑鈉溶液灌胃組、PKM2干擾組，觀察小鼠體質(zhì)量、攝食行為、腫瘤大小以及腫瘤組織內(nèi)相關(guān)通路分子表達情況。結(jié)果：PPI可抑制胃癌細胞增殖，誘導細胞凋亡；PPI可抑制胃癌細胞糖酵解和谷氨酰胺代謝相關(guān)分子表達；干擾PKM2或PI3K均可抑制胃癌細胞增殖，誘導細胞凋亡；沉默V-ATPases可抑制胃癌細胞糖酵解和谷氨酰胺代謝相關(guān)分子表達。PPI灌胃治療荷瘤小鼠可延緩腫瘤生長、緩解小鼠惡病質(zhì)情況。結(jié)論：PPI可抑制V-ATPases和PI3K信號通路表達，進而影響胃癌細胞糖酵解和谷氨酰胺代謝水平，影響胃癌細胞增殖和凋亡水平，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。

低氧環(huán)境中腫瘤細胞依然進行糖酵解，消耗葡萄糖，并產(chǎn)生大量乳酸[1]，這些特性被認為與腫瘤強大的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力有關(guān)[2]。在酸性環(huán)境中，腫瘤細胞仍能保持中性胞內(nèi)環(huán)境，可能與空泡型質(zhì)子泵(V-ATPases)有關(guān)[3]，其由V1和V0兩個結(jié)構(gòu)域組成，V1起酶催化作用，可水解ATP；而V0可轉(zhuǎn)運質(zhì)子，從而降低胞內(nèi)由于糖酵解而產(chǎn)生的高酸水平。胞外pH值酸化可活化胞內(nèi)PI3K/Akt信號通路，活化mTOR，上調(diào)HIF-1α，進而促進PKM2表達使糖酵解水平增加。有研究表明，V-ATPases可調(diào)控細胞中AMPK和mTORC1的激活，同時參與氨基酸代謝調(diào)控，對腫瘤細胞存活、生長具有極為重要的作用[4]。近年質(zhì)子泵抑制劑(PPI)被用于腫瘤治療的研究中，其抗腫瘤作用可能與抑制V-ATPases相關(guān)[5]。此外，有研究指出PPI可影響腫瘤細胞有氧糖酵解[6]，影響腫瘤細胞增殖、凋亡、自噬水平以及侵襲轉(zhuǎn)移能力[7-11]。隨著靶向糖酵解相關(guān)分子在腫瘤治療研究中地不斷深入，有研究指出單純靶向糖酵解相關(guān)分子并不能達到理想的抗腫瘤效果，或與代謝回補通路的產(chǎn)生有關(guān)[12-13]。本研究通過以PPI處理胃癌細胞，并檢測細胞增殖、凋亡以及相關(guān)蛋白表達情況，旨在探究PPI是否通過抑制胃癌細胞糖酵解和谷氨酰胺代謝影響胃癌細胞惡性生物學行為及其作用機制，為胃癌治療研究提供新思路。

材料與方法

一、細胞株和主要試劑

不同分化程度的人胃癌細胞株SGC7901、BGC823、HGC27和MGC803均由南京鼓樓醫(yī)院消化科凍存。艾司奧美拉唑(阿斯利康制藥有限公司)，注射用泮托拉唑鈉(德國Nycomed GmbH)。CRISPR CAS9雙載體慢病毒購于上海吉瑪制藥技術(shù)公司，其中LV-EGFP-gRNA的序列(5’--3’)為GGA GAT CCT GTA CTT CGC AC+AGC AGA CAC GTT TAC TCC TC-119。AceQ qPCR SYBR Green Master Mix(南京諾唯贊生物科技股份有限公司)PI3K抗體(Abcam)，PKM2抗體、p-Akt抗體(CST)，HIF-1α抗體(Abcam),β-actin抗體(Bioworld Technology)，ATP6V1A抗體(Abcam)，SLC1A5抗體(Proteintech Group)，p-mTOR抗體(CST)，GLS抗體(Proteintech Group)，GLUT-1抗體(CST)，LDHA抗體(Bioworld Technology)；PKM2 siRNA(南京銳真生物技術(shù)有限公司)，V-ATPases shRNA(上海吉凱基因醫(yī)學科技股份有限公司)，BALB/c雄性裸鼠(南京醫(yī)科大學)；CCK-8試劑盒(同仁化學研究所)，凋亡檢測試劑盒(碧云天生物技術(shù))。

二、實驗方法

1.細胞培養(yǎng)：細胞常規(guī)培養(yǎng)于含10% FBS+1%青鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基中，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.加藥：部分細胞消化、傳代，另一部分吹打混勻后接種于6孔板，培養(yǎng)24 h后待細胞貼壁，加入現(xiàn)配的不同濃度的PPI溶液。同時以鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值，酸性環(huán)境pH值為6.5，中性環(huán)境pH值為7.5。

3.siRNA轉(zhuǎn)染：按照說明書，配制轉(zhuǎn)染體系，即400 μL OPTI MEM+5 μL siRNA+5 μL轉(zhuǎn)染試劑。消化細胞，用不含雙抗的完全培養(yǎng)基重懸，計數(shù)后稀釋至18.75萬/mL(保證每孔30萬細胞)，每孔取1.6 mL細胞懸液+410 μL轉(zhuǎn)染體系。視細胞狀態(tài)，12～24 h后換液。

4.熒光定量PCR(qPCR)法：提取細胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA。PCR引物見表1，由蘇州金唯智生物科技有限公司合成。反應體積20 μL，內(nèi)含10 μL SYBR、0.4 μL上游引物、0.4 μL下游引物、7.2 μL DD水、2 μL cDNA模板。反應條件：95 ℃ 5 s，60 ℃32～34 s，共40個循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計算各目的基因mRNA表達水平。

表1 各目的基因的PCR引物序列

5.蛋白質(zhì)印跡法：收集各組對數(shù)生長期細胞，加入蛋白裂解液提取細胞總蛋白，按照BCA試劑說明書進行蛋白定量。行電泳后將分離的蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜。轉(zhuǎn)膜后牛奶封閉2 h，加入稀釋后的一抗溶液(按各抗體說明書推薦濃度稀釋)過夜，洗滌后加入二抗，曝光，顯影，攝片。

6.免疫熒光：各組細胞接種后孵育36～48 h，置于多聚甲醛中固定10 min，0.2% Triton X-100通透10 min，PBS洗滌，血清封閉30 min，PBS洗滌，加入一抗4 ℃過夜，室溫避光孵二抗2 h，DAPI染核，拍攝熒光照片。

7.雙載體慢病毒轉(zhuǎn)染和單克隆挑?。焊鶕?jù)預染結(jié)果，MGC803細胞鋪于6孔板，每孔6萬細胞。ATP6V1A敲除慢病毒稀釋為45 μL原液+405 μL完全培養(yǎng)基，CAS9慢病毒稀釋為180 μL原液+720 μL完全培養(yǎng)基，空載體組病毒稀釋為5 μL原液+445 μL完全培養(yǎng)基，按照1 600 μL完全培養(yǎng)基+200 μL ATP6V1A敲除/空載體病毒+200 μL CAS9病毒+2 μL poly轉(zhuǎn)染試劑進行轉(zhuǎn)染。設置不處理組作為對照。嘌呤霉素篩選至熒光強度達70%～80%時，使用流式細胞儀進行熒光分選，分選后的細胞培養(yǎng)穩(wěn)定后稀釋至1個/100 μL，接種于96孔板，14～28 d后觀察熒光強度和生長情況，轉(zhuǎn)入6孔板繼續(xù)培養(yǎng)。根據(jù)qPCR和蛋白質(zhì)印跡結(jié)果判斷是否成功敲除基因，選取敲除成功的細胞凍存。

8.CCK-8實驗：將各組細胞接種于96孔板，每孔3 000～5 000個細胞，每組至少5個復孔，培養(yǎng)24、48 h后，加入10% CCK-8試劑，上酶標儀檢測波長為450 nm的吸光度值，計算細胞增殖情況。

9.細胞凋亡情況：按照細胞凋亡試劑盒說明書處理細胞，加入熒光液，遮光反應5 min，流式細胞儀檢測細胞凋亡水平。

10.葡萄糖攝取率、LDH活性和乳酸測定：使用LDH細胞毒性檢測試劑盒檢測LDH活性，采用比色法檢測葡萄糖、乳酸水平，具體步驟按說明書步驟操作。

11.動物實驗：將中分化的人胃癌細胞株SGC7901接種于BALB/c雄性裸鼠背部皮下，1～2周成瘤成功。將小鼠分為泮托拉唑鈉溶液灌胃組、0.9% NaCl溶液灌胃組、PKM2干擾組(使用慢病毒干擾PKM2表達的胃癌細胞成瘤)、陰性對照組(使用空白慢病毒轉(zhuǎn)染的胃癌細胞成瘤)、空白對照組(正常成瘤，不作處理)。5周后處死小鼠，剝離腫瘤，行后續(xù)研究。

三、統(tǒng)計學分析

結(jié) 果

一、PPI可抑制胃癌細胞增殖、誘導胃癌細胞凋亡

以不同濃度的艾司奧美拉唑處理SGC7901細胞24 h時，與對照組相比，10 μg/mL組細胞增殖率略有上升，20 μg/mL組細胞增殖率明顯降低(P<0.05)，而后隨著艾司奧美拉唑濃度的升高和作用時間的延長，細胞增殖抑制作用逐漸增強(圖1A)。流式細胞術(shù)顯示不同濃度的艾司奧美拉唑可誘導胃癌SGC7901細胞凋亡(圖1D)。

A-C：不同細胞增殖情況(CCK-8法)；D-F：不同細胞凋亡情況(流式細胞術(shù))圖1 PPI可抑制胃癌細胞增殖、誘導胃癌細胞凋亡

同時，在酸性環(huán)境中，較低濃度(20 μg/mL)組短時間內(nèi)HGC27細胞增殖水平略有上升，可能是藥物刺激性地一過性上升，而當藥物作用加強(濃度升高或作用時間增加)，細胞增殖水平開始逐漸下降；在中性環(huán)境中，隨著藥物濃度增加，HGC27細胞增殖水平下降(P<0.05;圖1B)。此外，酸性環(huán)境中泮托拉唑鈉可顯著抑制MGC803細胞增殖(P<0.05)；而在中性環(huán)境中，泮托拉唑鈉總體可下調(diào)MGC803細胞增殖水平，但差異并無統(tǒng)計學意義(圖1C)。在酸性和中性環(huán)境中，高濃度泮托拉唑鈉(100 μg/mL)可明顯促進胃癌HGC27細胞凋亡(P<0.05;圖1E)，而泮托拉唑鈉在較低濃度時即可誘導MGC803細胞凋亡(P<0.05；圖1F)?？傮w而言，PPI可抑制胃癌細胞增殖能力，并誘導胃癌細胞早期凋亡，酸性環(huán)境或可增強PPI這一作用。

二、PPI可影響胃癌細胞中PI3K、Akt、mTOR、HIF-1α和PKM2表達

qPCR法顯示，在酸性環(huán)境中，20 μg/mL艾司奧美拉唑即可抑制SGC7901細胞內(nèi)PI3K、Akt、mTOR、HIF-1α和PKM2 mRNA表達(P<0.05)，且呈濃度依賴性(圖2A)；而艾司奧美拉唑濃度為40 μg/mL時，上述指標的蛋白表達受到明顯抑制，呈濃度依賴性(圖2B)。免疫熒光法結(jié)果顯示艾司奧美拉唑(40 μg/mL)可使胃癌SGC7901細胞內(nèi)PI3K、Akt、mTOR、HIF-1α和PKM2表達減少(圖2C)。

A：mRNA表達(qPCR法)；B：蛋白表達(蛋白質(zhì)印跡法)；C：蛋白表達(免疫熒光法，×200)圖2 PPI可影響胃癌SGC7901細胞中PI3K、Akt、mTOR、HIF-1α和PKM2的表達

三、PI3K特異性抑制劑LY294002對胃癌細胞增殖和凋亡的影響

以不同濃度的LY294002處理胃癌HGC27、MGC803細胞24 h后，細胞增殖受到明顯抑制，并誘導細胞凋亡，且均呈濃度依賴性(P<0.05；圖3)。

A-B：細胞增殖(CCK-8法)；C-D：細胞凋亡(流式細胞術(shù))圖3 PI3K特異性抑制劑LY294002對胃癌細胞增殖和凋亡的影響

四、PI3K特異性抑制劑LY294002對PI3K/Akt/mTOR信號通路及其下游HIF-1α和PKM2蛋白表達的影響

與未處理組和DMSO對照組相比，10 μmol/L LY294002可明顯抑制BGC823細胞內(nèi)Akt、mTOR蛋白表達(P<0.05)；20 μmol/L組HIF-1α表達受到明顯抑制(P<0.05)；50 μmol/L組可顯著抑制PKM2表達(P<0.05)；抑制作用均呈濃度依賴性(P<0.05；圖4)。表明LY294002在低濃度時就能抑制PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信號通路活化，但較高濃度時才能對PKM2產(chǎn)生抑制作用。

圖4 不同濃度LY294002對BGC823細胞中PI3K/Akt/mTOR信號通路及其下游HIF-1α和PKM2蛋白表達的影響(蛋白質(zhì)印跡法)

五、敲減PKM2表達抑制胃癌細胞糖酵解，影響胃癌細胞增殖和凋亡

以siRNA轉(zhuǎn)染胃癌HGC27、MGC803細胞后，PKM2蛋白表達明顯降低(圖5A)。與對照組相比，PKM2 siRNA轉(zhuǎn)染組可明顯抑制胃癌細胞增殖能力(圖5B)，且細胞早期凋亡水平明顯升高(圖5C)。

蛋白質(zhì)印跡法顯示，PKM2 siRNA組GLUT-1、LDHA蛋白表達較未轉(zhuǎn)染組和空載體組明顯降低，細胞葡萄糖攝取率、乳酸產(chǎn)量、LDH活性明顯減少，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05；圖5D-5G)。

A：PKM2蛋白表達(蛋白質(zhì)印跡法)；B：細胞增殖情況(CCK-8法)；C：細胞凋亡(流式細胞術(shù))；D：GLUT-1、LDHA蛋白表達(蛋白質(zhì)印跡法)；E：葡萄糖相對攝取率；F：乳酸相對產(chǎn)量；G：LDH相對活性圖5 敲減PKM2表達抑制胃癌細胞糖酵解，影響胃癌細胞增殖和凋亡水平

六、PPI通過V-ATPases表達影響胃癌細胞谷氨酰胺代謝

在酸性環(huán)境中，泮托拉唑鈉可明顯下調(diào)胃癌HGC27、MGC803細胞中V-ATPases、SLC1A5表達，且這種抑制作用隨著藥物濃度的增加而增強(圖6A)。然而，在中性環(huán)境中，泮托拉唑鈉不能發(fā)揮此抑制作用(圖6B)。在酸性環(huán)境中，較低濃度的PPI(25 μg/mL)可抑制MGC803細胞中GLS表達，且呈濃度依賴性(圖6C)。

以ATP6V1A敲除的CRISPR CAS9雙載體慢病毒轉(zhuǎn)染MGC803細胞后，GLS和SLC1A5表達均下調(diào)(圖6D)，細胞增殖受到輕度抑制(圖6E)，細胞凋亡無明顯變化(圖6F)。

A：酸性環(huán)境中V-ATPases、SLC1A5表達(蛋白質(zhì)印跡法)；B：中性環(huán)境中V-ATPases、SLC1A5表達(蛋白質(zhì)印跡法)；C：酸性環(huán)境中GLS表達(蛋白質(zhì)印跡法)；D：敲除ATP6V1A對SLC1A5、GLS蛋白表達的影響(蛋白質(zhì)印跡法)；E：敲除ATP6V1A對MGC803細胞增殖的影響(CCK-8法)；F：敲除ATP6V1A對MGC803細胞凋亡的影響(流式細胞術(shù))圖6 PPI通過V-ATPases表達影響胃癌細胞谷氨酰胺代謝

七、PI3K信號通路與V-ATPases之間的相互作用

以shRNA干擾SGC7901細胞中V-ATPases表達后，可抑制PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信號通路和PKM2蛋白表達(圖7A)。而以siRNA干擾PKM2表達后，胃癌HGC27、MGC803細胞中ATP6V1A和SLC1A5蛋白表達無明顯差異(圖7B)。以LY294002抑制PI3K表達后，胃癌細胞中ATP6V1A和SLC1A5蛋白表達無明顯差異(圖7C)。

A：shRNA干擾SGC7901細胞V-ATPases表達后對相關(guān)蛋白表達的影響；B：siRNA PKM2對相關(guān)蛋白表達的影響；C：不同濃度LY294002對相關(guān)蛋白表達的影響圖7 PI3K信號通路與V-ATPases之間的相互作用(蛋白質(zhì)印跡法)

八、PPI治療減緩荷瘤小鼠瘤體生長，改善癌性惡病質(zhì)情況

與空白對照組和0.9% NaCl溶液灌胃組相比，泮托拉唑鈉溶液灌胃組裸鼠瘤體最小(圖8A)，腫瘤質(zhì)量明顯降低(P<0.05；圖8B)，體質(zhì)量明顯升高(P<0.05；圖8D)。與空白對照組和陰性對照組相比，PKM2干擾組裸鼠瘤體明顯減小，腫瘤質(zhì)量明顯降低(P<0.05；圖8C)，體質(zhì)量明顯升高(P<0.05；圖8E)。

此外，與空白對照組和0.9% NaCl溶液灌胃組相比，泮托拉唑鈉溶液灌胃組小鼠日均攝水量和日均攝食量呈下降趨勢，但差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05；圖8F-8G)。

A：瘤體體積；B-C：腫瘤質(zhì)量；D-E：裸小鼠體質(zhì)量；F：日均攝水量；G：日均攝食量圖8 PPI治療可減緩荷瘤小鼠瘤體生長，改善惡病質(zhì)情況

九、PPI治療影響瘤體PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信號通路表達

與空白對照組和0.9% NaCl溶液灌胃組相比，泮托拉唑鈉溶液灌胃組裸鼠腫瘤組織中PI3K、mTOR表達明顯降低(P<0.05)，而Akt、HIF-1α、PKM2無明顯差異(圖9)。

A：mRNA表達(qRCR法)；B：蛋白表達(蛋白質(zhì)印跡法)圖9 PPI治療影響瘤體PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信號通路表達

討 論

PPI作為新興的腫瘤治療藥物，其對腫瘤細胞的作用機制尚未闡明，可能為PPI通過抑制胃癌細胞PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α/PKM2信號通路來影響糖酵解，同時在酸性環(huán)境中可能通過抑制V-ATPases表達來影響谷氨酰胺代謝，從而發(fā)揮抗腫瘤的作用。

本實驗中，通過加藥實驗以及分別沉默信號通路上游、下游分子的方法，驗證了在酸性環(huán)境中，PPI可通過抑制PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α/PKM2信號通路的表達從而抑制胃癌細胞糖酵解水平，進而影響胃癌細胞增殖和凋亡水平。在體內(nèi)實驗中，采用皮下成瘤的方法成功建立了SGC7901荷瘤模型和PKM2敲除的SGC7901荷瘤模型，結(jié)果顯示PPI灌胃可抑制小鼠皮下瘤體生長且使小鼠體質(zhì)量減輕放緩，干擾PKM2表達細胞成瘤組的小鼠腫瘤生長亦放緩，惡病質(zhì)較輕；PPI灌胃治療后，小鼠腫瘤組織中PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信號通路中的上游、下游分子表達亦有所下調(diào)。進一步說明PPI可通過抑制PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信號通路起抑制腫瘤生長、緩解惡病質(zhì)的作用。然而，與對照組相比，PPI和PKM2干擾組的小鼠攝食、攝水行為并無明顯改善，且本動物實驗未驗證腫瘤的病理變化，故尚不能完全證實PPI是通過PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信號通路起抗腫瘤的作用。

有研究指出，PPI對腫瘤細胞的作用很大程度上依賴對V-ATPases的抑制作用，V-ATPases與多個細胞代謝通路有關(guān)[14]，其不僅參與MAPK等通路的調(diào)控，同時可調(diào)控氨基酸轉(zhuǎn)運分子，從而對谷氨酰胺代謝產(chǎn)生影響。本研究中，在胃癌細胞中，PPI可下調(diào)V-ATPases表達，并下調(diào)谷氨酰胺關(guān)鍵的轉(zhuǎn)運分子SLC1A5和谷氨酰胺代謝酶GLS表達。表明PPI不僅可影響糖酵解水平，而且同時影響胃癌細胞谷氨酰胺代謝。本研究對V-ATPases的重要亞基ATP6V1A基因[15]進行敲除，結(jié)果顯示胃癌細胞中SLC1A5、GLS表達明顯降低，表明抑制V-ATPases表達可下調(diào)SLC1A5和GLS表達，PPI可能通過調(diào)控V-ATPases表達來影響谷氨酰胺代謝。PKM2是PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信號通路的下游分子，是腫瘤細胞糖酵解的關(guān)鍵分子。本研究還發(fā)現(xiàn)，干擾PI3K、PKM2表達對ATP6V1A和相關(guān)分子并無明顯影響，而敲除V-ATPases后，胃癌細胞中PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α/PKM2信號通路受到明顯抑制。

綜上所述，PPI對V-ATPases的抑制作用可明顯影響胃癌細胞，V-ATPases不僅調(diào)控谷氨酰胺代謝，還在一定程度上影響胃癌糖酵解水平。但敲除V-ATPases的胃癌細胞凋亡并無明顯變化，增殖水平僅輕度下調(diào)，這可能是由于敲除基因會導致細胞基因組發(fā)生有利于細胞存活的改變，從而幫助細胞存活，也可能是由于基因敲除后的細胞產(chǎn)生了某些代謝回補通路幫助細胞躲避V-ATPases敲除后的凋亡和生長抑制作用。值得注意的是，shRNA抑制V-ATPases表達后，胃癌細胞Akt表達明顯下調(diào)，說明干擾V-ATPases對細胞增殖有抑制作用。

有研究證實，單純靶向糖酵解并不能取得良好的抗腫瘤效果[12]，這或許是由于腫瘤細胞存在抵抗機制和回補通路。已有研究[13]證實在腫瘤細胞中針對糖酵解和谷氨酰胺代謝的聯(lián)合靶向治療可取得良好的治療效果，共靶向mTORC1和LDHA可起有良好的抑制腫瘤生長的作用。在本研究中，靶向V-ATPases可能也存在回補通路的影響，因而聯(lián)合治療或許可取得較好的治療效果，而PPI可影響糖酵解和谷氨酰胺代謝，具有良好的抗腫瘤效果，故聯(lián)合靶向治療是腫瘤治療的大勢所趨。

總之，本研究證實PPI可通過抑制PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α/PKM2通路和V-ATPases/SLC1A5、GLS表達來抑制胃癌細胞糖酵解和谷氨酰胺代謝，達到抗腫瘤的作用，V-ATPases或許可作為胃癌治療的良好靶點。然而，對于靶向V-ATPases的療效和腫瘤細胞對靶向V-ATPases的抵抗機制以及腫瘤細胞中各代謝通路之間的作用機制，仍需行更多的研究進一步探討。