管緒龍，陳 卉

（江蘇巨邦制藥有限公司，江蘇常州 213300）

維生素B1常見(jiàn)的有硝酸硫胺和鹽酸硫胺，是一種重要的維生素。目前國(guó)內(nèi)的生產(chǎn)工藝均以丙烯腈為起始原料合成硫代硫胺，硫代硫胺經(jīng)過(guò)氧化、中和結(jié)晶就得到了硝酸硫胺，所以硫代硫胺是維生素B1的一個(gè)重要中間體。一般測(cè)定硫代硫胺含量使用的是溴酸鉀滴定法，原理是溴酸鉀與硫代硫胺反應(yīng)生成溴化鉀，稍過(guò)量的溴酸鉀就與溴化鉀反應(yīng)生成單質(zhì)溴并使甲基紅指示劑褪色。該法中溴酸鉀與中間體硫代硫胺中的還原性雜質(zhì)反應(yīng)，從而使得結(jié)果經(jīng)常性偏高。為了減少測(cè)定偏差，建立了采用高效液相色譜法測(cè)定硫代硫胺的含量。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

美國(guó)Agillent 1100型高效液相色譜儀

1.2 試藥

甲醇和乙腈均為色譜純，冰乙酸和1-辛烷磺酸鈉為分析純，硫代硫胺對(duì)照品為實(shí)驗(yàn)室精制，然后用溴酸鉀滴定法標(biāo)定。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（5μm，4.6mm*250mm）流動(dòng)相為甲醇∶乙腈∶1%冰乙酸（比例為36∶24∶40）配制的0.005mol/L的1-辛烷磺酸鈉溶液，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，進(jìn)樣量為10μL。

2.2 對(duì)照品和樣品溶液的制備

精密稱取硫代硫胺對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并配制成濃度約為400μg/mL的溶液。

精密稱取樣品適量，加流動(dòng)相溶解并配制成濃度約為400μg/mL的溶液。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性

取樣品溶液，按照2.1的色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)量峰面積。硫代硫胺主峰拖尾因子小于2，硫代硫胺主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)按照硫代硫胺主峰計(jì)算均不低于1 500。

2.4 檢測(cè)限度

精密稱取硫代硫胺對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并逐步稀釋成一系列濃度的溶液，取10μL進(jìn)樣，當(dāng)主峰峰高為最大噪音峰高3倍時(shí)，進(jìn)樣量即為檢測(cè)限，本法測(cè)定的檢測(cè)限為0.03μg/mL。

2.5 線性關(guān)系考察

精密稱取硫代硫胺對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋成濃度分別為200μg/mL、300μg/mL、400μg/mL、500μg/mL和600μg/mL的溶液，各取10μL進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，測(cè)量主峰面積，以峰面積（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度（x）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合得到回歸方程y=99.467x+213.4，R=0.999 9。在200-600μg/mL，線性良好。

2.6 精密度

取濃度約為400μg/mL的對(duì)照品溶液，按照2.1的色譜條件進(jìn)樣，記錄圖譜，測(cè)量峰面積，主成分峰面積的RSD=0.9%（n=6）

表1 精密度試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

2.7 穩(wěn)定性

取濃度約為400μg/mL的樣品溶液，按照2.1的色譜條件，分別放置0h、2h、4h、6h、8h、12h后進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)量主峰面積，計(jì)算得到RSD為1.0%（n=6）。表明樣品溶液在12h內(nèi)測(cè)定，穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率

精密移取已知濃度約為400μg/mL的樣品溶液，分別加入同體積濃度約為200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL的對(duì)照品溶液，每個(gè)濃度的溶液均配制3份，按照2.1的色譜條件進(jìn)樣，記錄圖譜，測(cè)量峰面積，用外標(biāo)法計(jì)算硫代硫胺的含量。

表2 加樣回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

2.9 準(zhǔn)確性

取3批干燥后的硫代硫胺樣品，分別使用本法和溴酸鉀滴定法測(cè)定含量。

表3 準(zhǔn)確性試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)語(yǔ)

建立了高效液相色譜法測(cè)定硫代硫胺的含量，與常規(guī)的溴酸鉀滴定法相比，能夠排除樣品中還原性雜質(zhì)的干擾，使得測(cè)定結(jié)果更加準(zhǔn)確。