喬利敏，關(guān)文怡，馬建民，石曉峰

（1.北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系，北京 102442；2.北京乾元君健葡萄酒科技服務(wù)有限公司，北京 102447）

葡萄籽粕富含大量的多酚類物質(zhì)，簡稱葡多酚，具有抗輻射、降血脂、抗氧化、保護(hù)心血管及免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)活性，可提高機(jī)體的健康水平[1-4]。近年來，關(guān)于葡多酚在畜牧生產(chǎn)的研究較多。研究發(fā)現(xiàn)，葡多酚可以調(diào)節(jié)肉仔雞、小鼠免疫機(jī)能[3,5]，促進(jìn)五龍鵝的生長和提高其營養(yǎng)物質(zhì)利用率[6]，提高綿羊生長性能、器官指數(shù)及血液生化指標(biāo)[7]，調(diào)節(jié)羅非魚血脂水平，增強(qiáng)肝胰臟抗氧化能力[8]。葡多酚在蛋雞飼料的應(yīng)用報(bào)道多見于其對蛋雞飼養(yǎng)效果和雞蛋品質(zhì)的評價(jià)上，而通過添加葡萄籽粕對蛋雞免疫性能和血液脂肪代謝方面的應(yīng)用還鮮見報(bào)道。針對蛋雞在產(chǎn)蛋高峰后期體內(nèi)代謝和生理功能逐漸衰老、退化，免疫功能和生產(chǎn)性能大大降低的現(xiàn)象，本試驗(yàn)以64 周齡羅曼灰蛋雞為研究對象，探討飼糧中添加葡萄籽粕對蛋雞產(chǎn)蛋高峰后期雞蛋膽固醇、新城疫免疫效果及脂肪代謝的影響，為改善產(chǎn)蛋后期蛋雞健康狀況、維持產(chǎn)蛋高峰、改善雞蛋品質(zhì)以及優(yōu)化飼糧配方提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 葡萄籽粕由北京乾元君健葡萄酒科技服務(wù)有限公司提供，經(jīng)自然干燥后粉碎而成，其主要營養(yǎng)成分的實(shí)測值為粗蛋白質(zhì)12.98%、粗脂肪8.92%、粗灰分7.95%、粗纖維36.82%、鈣0.77%、磷0.45%、中性洗滌纖維40.95%、酸性洗滌纖維32.01%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理 選用810 只64 周齡常規(guī)免疫處理的健康羅曼灰蛋雞隨機(jī)分為6 個(gè)處理，每處理5 個(gè)重復(fù)，每重復(fù)27 只雞。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組分別按基礎(chǔ)日糧中玉米質(zhì)量分?jǐn)?shù)的3%、4.5%、6%、7.5%、9%添加葡萄籽粕替代玉米。預(yù)試期7 d，使對照組與試驗(yàn)組在預(yù)試期間產(chǎn)蛋率差異不顯著，正試期30 d。

試驗(yàn)蛋雞采用3 層階梯式籠養(yǎng)，每籠3 只雞。飼料為全價(jià)配合干粉料，人工每組單獨(dú)喂料，自由采食和飲水，按常規(guī)程序進(jìn)行欄舍消毒和免疫（用新城疫IV 系弱毒活疫苗噴霧免疫）。試驗(yàn)期間詳細(xì)記錄各組飼料消耗及試驗(yàn)雞的健康狀況。基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分見表1。

1.3 生產(chǎn)性能測定 觀察每組雞的健康狀況。正試期每天10:30 左右準(zhǔn)時(shí)收蛋，以重復(fù)為單位準(zhǔn)確記錄每天產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、不合格數(shù)（破、畸、軟、碎、無殼蛋）和死淘雞數(shù)，每10 d 定時(shí)結(jié)料稱重，統(tǒng)計(jì)各組實(shí)際耗料量。分別計(jì)算日均采食量、蛋均重、日均產(chǎn)蛋量、產(chǎn)蛋率、料蛋比及破軟殼率。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 雞蛋膽固醇測定 試驗(yàn)期最后1 d，每重復(fù)隨機(jī)采集3 枚雞蛋，按照《禽蛋中膽固醇含量的測定——酶法》（GB/T 37077-2018）測定雞蛋膽固醇含量。

1.5 血液生化指標(biāo)測定 于試驗(yàn)最后1 d，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取2 只蛋雞，翅下靜脈采血3 mL，將血液常溫傾斜靜置待血清析出，3 000 r/min 離心15 min，取血清于-20℃保存。血清中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）含量的測定采用全自動生化分析儀（日立7180 型，北京），所用試劑盒均購于北京康柏陽國際貿(mào)易有限公司。球蛋白（GLO）含量為TP 含量與ALB 含量差。

1.6 血清新城疫抗體水平測定 分別在免疫新城疫當(dāng)日、免疫后第15 天和第30 天，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取1 只雞，翅下靜脈采血3 mL，標(biāo)明組號，4℃傾斜靜置后3 000 r/min離心10 min，分離后血清分裝到小離心管中，-20℃保存，按《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T 16550-2008）中的方法檢測新城疫血凝抑制（HI）抗體效價(jià)?？贵w效價(jià)用X log2表示。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行方差分析，LSD 法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。P＜0.01 為差異極顯著，P＜0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄籽粕對蛋雞產(chǎn)蛋高峰后期生產(chǎn)性能的影響 由表2 可知，對照組與各試驗(yàn)組蛋雞的日均采食量、料蛋比及破軟蛋率差異不顯著。與對照組相比，在日均產(chǎn)蛋量性狀上，6%葡萄籽粕組高于對照組（P＜0.01），3%、4.5%葡萄籽粕組高于對照組（P＜0.05），7.5%、9%葡萄籽粕組與對照組差異不顯著；在產(chǎn)蛋率性狀上，3%、4.5%、6% 葡萄籽粕組較對照組分別提高了 12.38%（P＜0.05）、14.76%（P＜0.05）、18.09%（P＜0.01），7.5%、9%葡萄籽粕與對照組差異不顯著。結(jié)果表明，在日糧中添加葡萄籽粕對種雞產(chǎn)蛋高峰后期生產(chǎn)性能有促進(jìn)作用。在本試驗(yàn)條件下以添加 6%的葡萄籽粕效果最好。

2.2 葡萄籽粕對蛋雞產(chǎn)蛋高峰后期雞蛋膽固醇的影響從表 3 可見，與對照組相比，各試驗(yàn)組雞蛋膽固醇含量分別降低32.85%、36.17%、33.36%、37.00%、26.38%（P＜0.01），但沒有隨葡萄籽粕添加量增加表現(xiàn)出規(guī)律性變化，其中9%添加組雞蛋膽固醇含量較其他處理組有所升高。

2.3 葡萄籽粕對蛋雞產(chǎn)蛋高峰后期血液脂肪代謝的影響由表4 可見，與對照組相比，葡萄籽粕對血清中TG、TP 和GLO 沒有顯著影響，但試驗(yàn)組血清TP 有升高的趨勢，其中6% 葡萄籽粕組高于對照組（P＜0.05），其他各試驗(yàn)組與對照組差異不顯著；6%、7.5%、9%葡萄籽粕組血清中TC 較對照組分別降低了18.52%（P＜0.05）、20.14%（P＜0.05）、37.27%（P＜0.01）；3%、4.5%、6%、7.5%葡萄籽粕組血清中HDL 與對照組相比差異不顯著，但均有升高的趨勢；3%、6%、7.5%葡萄籽粕組血清中LDL 較對照組分別降低了7.95%（P＜0.05）、10.88%（P＜0.01）、9.62%（P＜0.01）；6%葡萄籽粕組血清中TP、ALB 含量分別較對照組提高3.90 g/L（P＜0.05）和 3.07g/L（P＜0.01）。結(jié)果表明，葡萄籽粕有助于清除血液中多余的膽固醇，減少血液中膽固醇的沉積，具有較好的調(diào)節(jié)脂類代謝的功能。在本試驗(yàn)條件下以添加 6%的葡萄籽粕效果最佳。

表2 葡萄籽粕對蛋雞產(chǎn)蛋高峰后期生產(chǎn)性能的影響

表3 葡萄籽粕對蛋雞產(chǎn)蛋高峰后期雞蛋膽固醇的影響 mg/g

表4 葡萄籽粕對種雞產(chǎn)蛋高峰后期血清生化指標(biāo)的影響

表5 葡萄籽粕對蛋雞新城疫抗體效價(jià)的影響 log2

2.4 葡萄籽粕對蛋雞產(chǎn)蛋高峰后期新城疫抗體效價(jià)的影響 從表5 可知，免疫后15 d，4.5% 和7.5% 葡萄籽粕組新城疫抗體水平高于對照組，3%和9%葡萄籽粕組低于對照組，且各組間差異不顯著；免疫后30 d，6%葡萄籽粕組抗體效價(jià)較15 d 時(shí)升高12.20%，4.5%、7.5%、9%葡萄籽粕組較15 d時(shí)分別降低4.65%、2.33%、10.26%；與對照組相比，除9%組顯著低于對照組之外，其他各試驗(yàn)組與對照組相比差異不顯著，其中以6%組抗體效價(jià)最高，顯著高于9%和3%組。結(jié)果表明，葡萄籽粕具有提高蛋雞體液免疫的作用，從而降低蛋雞患新城疫的機(jī)會，在本試驗(yàn)條件下以添加 6%的葡萄籽粕抗體效價(jià)最高。

3 討 論

3.1 葡萄籽粕對蛋雞產(chǎn)蛋高峰后期生產(chǎn)性能的影響 葡萄籽粕在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用已有學(xué)者進(jìn)行了研究，多數(shù)研究表明葡萄籽粕對畜禽的生產(chǎn)性能具有良好的促進(jìn)作用。張玉等[9]研究發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，在 64 周齡蛋雞日糧中添加50、100 mg/kg 葡萄原花青素顯著抑制了蛋雞產(chǎn)蛋率下降。胡如久等[10]報(bào)道，添加 100 mg/kg葡萄皮渣提取物極顯著提高了產(chǎn)蛋率，但是高水平添加有降低產(chǎn)蛋率的趨勢。本研究結(jié)果表明，在日均產(chǎn)蛋量性狀上，6%葡萄籽粕組極顯著高于對照組，3%和4.5%葡萄籽粕組顯著高于對照組；在產(chǎn)蛋率性狀上，3%、4.5%及6%葡萄籽粕組較對照組分別顯著提高了 12.38%、14.76%、18.09%，表明在日糧中添加葡萄籽粕對種雞產(chǎn)蛋高峰后期的生產(chǎn)性能有促進(jìn)作用。分析其主要原因是葡萄籽粕富含的原花青素是一種黃酮類化合物，具有超強(qiáng)抗氧化能力，可以改善蛋雞的生理狀態(tài)，延緩蛋雞衰老、緩解不良應(yīng)激，最終導(dǎo)致生產(chǎn)性能提高[11-12]；而且花青素具有弱雌激素活性，亦可雙向調(diào)節(jié)動物生產(chǎn)性能[10,13-14]。此外，葡萄籽粕含有部分縮合單寧，高劑量添加會影響畜禽的采食量，引起營養(yǎng)物質(zhì)利用效率的下降。本試驗(yàn)中，7.5% 和9% 葡萄籽粕組的采食量、日均產(chǎn)蛋量和產(chǎn)蛋率下降，均低于空白對照組，也進(jìn)一步驗(yàn)證了其抗?fàn)I養(yǎng)因子的作用。

3.2 葡萄籽粕對蛋雞產(chǎn)蛋高峰后期雞蛋膽固醇的影響動物性產(chǎn)品是人體攝取膽固醇的主要來源，因此降低動物性產(chǎn)品的膽固醇含量對人體健康非常重要。有研究表明，葡萄籽粕能夠抑制雞蛋膽固醇合成酶的活性、增加蛋雞體內(nèi)膽固醇的分解，進(jìn)而降低雞蛋膽固含量[15]。本研究表明，飼糧添加葡萄籽粕后，顯著降低了雞蛋膽固醇含量，但沒有隨葡萄籽粕添加量增加表現(xiàn)出規(guī)律性變化。這與胡如久等[10]、尹靖東等[16]的研究結(jié)果一致，可能原因是葡萄籽粕通過調(diào)節(jié)發(fā)育中的卵泡細(xì)胞的受體（LDL 受體基因家族產(chǎn)物）活性來調(diào)控雞蛋膽固醇，值得進(jìn)一步深入研究。

3.3 葡萄籽粕對蛋雞產(chǎn)蛋高峰后期血液脂肪代謝的影響血清生化指標(biāo)反映動物機(jī)體的健康水平及營養(yǎng)物質(zhì)的代謝情況。血清中TG 水平能直接反映機(jī)體脂肪沉積狀況[17]，所以蛋雞脂肪組織發(fā)育和脂肪沉積主要取決于血清中TG 水平。HDL 和LDL 是動物體內(nèi)運(yùn)輸膽固醇的2 種脂蛋白。HDL 是一種抗動脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，可以運(yùn)載周圍組織中的膽固醇，再轉(zhuǎn)化為膽汁酸或直接通過膽汁從腸道排出，所以血清HDL 水平相對較高有助于機(jī)體健康。而LDL 把膽固醇從肝臟運(yùn)送到全身組織，當(dāng)其含量過高時(shí)，所攜帶的膽固醇便積存在動脈壁上，引起動脈粥樣硬化，因此LDL 被稱為“壞的膽固醇”，降低LDL 水平則有助于機(jī)體健康[18]，可以降低冠心病的危險(xiǎn)。金亞倩等[7]研究表明，日糧中添加一定量的葡萄皮渣可增加綿羊血清高密度脂蛋白膽固醇含量，提高血清抗氧化水平；吳小雪[19]報(bào)道，產(chǎn)蛋高峰后期蛋雞日糧添加3%～7%的葡萄皮渣可降低血液膽固醇；另有研究表明，葡萄籽粕還可降低正常血脂大鼠的血清TG 和LDL-C 水平[15]；在倉鼠動脈硬化模型試驗(yàn)中，葡萄籽粕降低了血清TC 和TG 水平[20]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加葡萄籽粕可以顯著降低蛋雞產(chǎn)蛋后期血清中TC 和LDL 含量，提高HDL 含量。以上結(jié)果說明，葡萄籽粕有助于清除血液中多余的膽固醇，減少血液中膽固醇沉積，具有較好的調(diào)節(jié)脂類代謝的功能。

血清指標(biāo)與機(jī)體代謝、營養(yǎng)及疾病有著密切的關(guān)系[21]。當(dāng)機(jī)體受飼糧影響而發(fā)生生理變化時(shí)，必定會在血清指標(biāo)中反映出來[22]。TP 和ALB 含量的變化可以反映肝臟的功能以及機(jī)體的能量代謝和免疫功能狀況；大部分血蛋白質(zhì)均由肝臟合成，當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí)，這些血蛋白質(zhì)合成就會減少，尤其是白蛋白會明顯減少[23]。Young等[24]研究認(rèn)為，血清白蛋白含量是衡量動物蛋白質(zhì)需要量的重要標(biāo)識之一。本研究結(jié)果表明，日糧中添加葡萄籽粕能夠提高血清中TP 和ALB 含量，其中6%葡萄籽粕組血清中TP、ALB 含量分別較對照組提高3.90 g/L和3.07 g/L，這說明葡萄籽粕能夠促進(jìn)組織細(xì)胞蛋白質(zhì)代謝活動旺盛，有利于體內(nèi)蛋白質(zhì)沉積及性能發(fā)揮，提高飼料利用率。而葡萄籽粕對血清中GLB 含量無顯著影響，說明對機(jī)體無任何刺激作用，進(jìn)一步證明了葡萄籽粕的飼用安全性。

3.4 葡萄籽粕對蛋雞產(chǎn)蛋高峰后期新城疫抗體效價(jià)的影響雞新城疫已成為威脅養(yǎng)雞業(yè)最嚴(yán)重的一種傳染病[25]。眾所周知，蛋雞在產(chǎn)蛋高峰后期體內(nèi)代謝和生理功能逐漸退化、衰老，免疫功能和生產(chǎn)性能大大降低，極易引起雞新城疫等疫病發(fā)生?？贵w效價(jià)的變化可以直接反映機(jī)體的體液免疫狀態(tài)。葡萄籽粕富含葡萄籽原花青素，可作為抗原刺激機(jī)體，使機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)。葡萄籽粕富含的生物類黃酮又具有增強(qiáng)機(jī)體體液免疫和非特異性免疫的功能。本研究中，通過在蛋雞產(chǎn)蛋高峰后期日糧中添加葡萄籽粕，對照組和各試驗(yàn)組蛋雞在免疫當(dāng)日的新城疫抗體效價(jià)平均在6.2～6.8 log2；免疫后15 d，對照組和各試驗(yàn)組新城疫抗體水平升高到7.8～8.6 log2；免疫后30 d，除9%葡萄籽粕組顯著低于對照組之外，其他各試驗(yàn)組與對照組相比差異不顯著，其中以6%葡萄籽粕組抗體效價(jià)最高，顯著高于9%和3%組，表明葡萄籽粕具有提高蛋雞體液免疫的作用，從而降低蛋雞患新城疫的機(jī)會。這與李佳等[26]、郝瑞榮等[27]的報(bào)道相似，不同之處在于研究選取的試驗(yàn)對象不同。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)條件下，在蛋雞產(chǎn)蛋高峰后期飼糧中添加葡萄籽粕，能夠提高蛋雞生產(chǎn)性能和新城疫抗體效價(jià)、降低雞蛋膽固醇含量，調(diào)節(jié)血液脂肪代謝水平，且以玉米質(zhì)量分?jǐn)?shù)6%的劑量添加葡萄籽粕替代玉米效果較好。