何彥春 ，韓慶彥 ，郭慧琳 ,李旭蓉 ，李 珊 ，

（1.張掖市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅張掖734000；2.甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，蘭州730046）

雞白痢、雞傷寒、雞毒支原體、雞滑液支原體和禽白血病是目前規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)的常發(fā)病。為了掌握這5 種病在張掖市的感染情況，2019 年6 月，張掖市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心對(duì)張掖市甘州區(qū)、臨澤縣、高臺(tái)縣、山丹縣、民樂縣的部分規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)進(jìn)行了抽樣檢測(cè)，初步掌握了張掖市雞白痢和雞傷寒、雞毒支原體、雞滑液支原體、禽白血病目前的感染狀況，為今后的防控工作提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

在甘州區(qū)、臨澤縣、高臺(tái)縣、山丹縣、民樂縣各選擇存欄量在1000 只以上的商品代養(yǎng)雞場(chǎng)10個(gè)，每場(chǎng)最少隨機(jī)采集140 日齡以上的臨床健康的雞血樣10 份。經(jīng)實(shí)驗(yàn)室分離血清后符合檢測(cè)要求的樣品共785 份，其中甘州區(qū)、高臺(tái)縣、民樂縣各155 份，臨澤縣175 份，山丹縣145 份。

1.2 所用試劑

雞白痢雞傷寒多價(jià)染色平板凝集抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn)，批號(hào)分別為S062809、201803。雞毒支原體平板凝集試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清, 由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn)，批號(hào)為201801。雞滑液支原體平板凝集試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清, 由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn)，批號(hào)為201807。禽白血病P27抗原ELISA 檢測(cè)試劑盒，由深圳真瑞生物科技公司生產(chǎn)，批號(hào)：2019053001。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 雞白痢和雞傷寒血清平板凝集試驗(yàn)操作方法

在室溫下滴加雞白痢雞傷寒多價(jià)染色平板凝集抗原50μl 于玻璃板上，再加入被檢血清50μl，用牙簽攪勻至直徑為2 cm，不斷搖動(dòng)玻璃板，計(jì)時(shí)判定結(jié)果，同時(shí)設(shè)陽(yáng)性血清、陰性血清對(duì)照。在2 min 內(nèi)，抗原與陽(yáng)性血清應(yīng)呈100%凝集，陰性血清不凝集，判試驗(yàn)有效。被檢血清與抗原出現(xiàn)50%以上凝集者為陽(yáng)性，不發(fā)生凝集則為陰性，介于兩者之間為可疑反應(yīng)。

1.3.2 雞毒支原體和滑液支原體平板凝集試驗(yàn)操作方法

室溫中加30μl 被檢血清于玻板上，再加等量染色抗原，用牙簽棒將其混合，輕輕搖動(dòng)玻板使之混合均勻。試驗(yàn)設(shè)陽(yáng)性血清及陰性血清對(duì)照。結(jié)果判定：室溫條件下，雞血清2 min 內(nèi)，發(fā)生完全凝集的，判為陽(yáng)性。如僅在液滴邊緣部分出現(xiàn)凝集，或超過2 min 在邊緣出現(xiàn)凝集，判為可疑。超過規(guī)定時(shí)間無凝集者，判為陰性。

1.3.3 禽白血p27 抗原ELISA 檢測(cè)方法

1.3.3.1 取預(yù)包被純化抗禽白血病P27 抗原單抗檢測(cè)板，每孔加入50μl 微升樣本稀釋液，將陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和待檢樣品各取50μl 加至相應(yīng)微孔中，陰、陽(yáng)性對(duì)照各設(shè)2 孔，待檢樣品設(shè)1孔，蓋好封板膜，輕輕振蕩酶標(biāo)板，充分混勻，置37℃溫育 60 min。

1.3.3.2 揭開封板膜，甩掉孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液250μL，甩去液體，重復(fù)6 次，在干凈吸水紙上拍打去除殘存洗滌液。每孔加入100μL 酶結(jié)合物，蓋好封板膜，置37℃溫育60 min。

1.3.3.3 揭開封板膜，甩掉孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液250μl，甩去液體，重復(fù)6 次，在干凈吸水紙上拍打去除殘存洗滌液。每孔加入顯色液100μl，蓋上封板膜，37℃避光顯色15min。

1.3.3.4 每孔加入終止液 50μl，10 min 內(nèi)在酶標(biāo)儀上于650 nm 讀各孔吸光度OD 值SC。計(jì)算出陰性對(duì)照孔OD 均值NC 和陽(yáng)性對(duì)照孔OD 均值PC。當(dāng) NC 值＜0.25 且 PC 值 ＞0.7，試驗(yàn)結(jié)果成立。

1.3.3.5 陰陽(yáng)性判斷：按照公式計(jì)算出IRPC 值，IRPC 值 =（SC-NC）/（PC-NC）×100。如果 IRPC≥20，說明樣品中有禽白血病病毒P27 蛋白，判斷為陽(yáng)性；如果IRPC＜20，說明樣品中無禽白血病病毒P27 蛋白，判為陰性。

2 結(jié)果

共檢測(cè)雞白痢和雞傷寒785 份，檢出陽(yáng)性76份，陽(yáng)性率9.7%；檢測(cè)雞毒支原體785 份，檢出陽(yáng)性319 份，陽(yáng)性率40.6%；檢測(cè)雞滑液囊支原體785 份，檢出陽(yáng)性 213 份，陽(yáng)性率 27.1%；檢測(cè)雞白血病184 份，檢出陽(yáng)性20 份，陽(yáng)性率10.9%。詳見表1：檢測(cè)結(jié)果匯總表。

表1 ：檢測(cè)結(jié)果匯總

3 討論

3.1 雞白痢和雞傷寒是由雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌引起的可經(jīng)種蛋垂直傳播的傳染病，各種日齡的雞均可發(fā)生。董永毅等[1]采用血清平板凝集試驗(yàn)對(duì)江蘇省8 個(gè)縣市送檢的21274份血清樣品進(jìn)行雞白痢抗體檢測(cè)，結(jié)果表明：8 個(gè)縣市均存在不同程度的雞白痢感染情況, 平均陽(yáng)性率達(dá)25.5%。本次檢測(cè)采集的均是140 日齡以上成年商品雞的血樣，且無明顯臨床癥狀。經(jīng)檢測(cè)雞白痢和雞傷寒陽(yáng)性率為9.7%，其中民樂縣陽(yáng)性檢出率最高，為 15.5%（24/155），高臺(tái)縣最低，為3.2%(5/155)。本次檢測(cè)中各檢測(cè)縣均從無臨床癥狀的雞群中檢出一定比例的雞白痢和雞傷寒陽(yáng)性病例，說明部分病雞處于隱形感染狀態(tài)，或?qū)儆陔r雞階段感染后的耐過病例。由于用雞白痢雞傷寒多價(jià)染色平板凝集抗原無法區(qū)分雞白痢和雞傷寒各自的陽(yáng)性率，故本次的檢測(cè)結(jié)果是雞白痢和雞傷寒兩種病的綜合結(jié)果。對(duì)這兩種病的具體感染情況有待于今后進(jìn)一步做細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)并結(jié)合臨床表現(xiàn)確定。

3.2 雞毒支原體可通過種蛋垂直傳播和直接接觸病雞傳播，主要引起雞群慢性呼吸道疾病，容易繼發(fā)其他疫病造成死亡、飼料轉(zhuǎn)化率降低、產(chǎn)蛋下降等。雞毒支原體在張掖市的規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)中多發(fā)多見。魏玉明[2]報(bào)道，1992 年對(duì) 1062 份血樣進(jìn)行檢測(cè)，檢出陽(yáng)性585 份，陽(yáng)性率為55.1%。本次檢測(cè)785 份，檢出陽(yáng)性319 份，陽(yáng)性率40.6%,其中民樂縣檢出率最高，為43.9%（68/155）,甘州區(qū)檢出率最低，為32.9%（51/155）。從檢測(cè)數(shù)據(jù)初步說明，從1992 年至2019 年，張掖市的雞毒支原體的感染率并未明顯減輕，防控形勢(shì)依然很嚴(yán)峻。

3.3 雞滑液囊支原體主要引起雞的關(guān)節(jié)腫大，滑液囊和腱鞘發(fā)炎。該病病程長(zhǎng)，經(jīng)常給養(yǎng)雞生產(chǎn)造成難于彌補(bǔ)的損失。冀錫霖等[3]報(bào)道，我國(guó)雞滑

液囊支原體在國(guó)內(nèi)的很多地區(qū)雞群中普遍存在，陽(yáng)性感染率為20.7%。馬爽等[4]采集來自華北、華中、華南、東北、西北、華東6 個(gè)地區(qū)11 個(gè)省份無MS 疫苗免疫背景雞場(chǎng)的雞群血樣應(yīng)用平板凝集檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，平均陽(yáng)性率為41.42%。近年來，該病的臨床發(fā)病率在張掖市有逐漸增多趨勢(shì)。本次共檢測(cè)785 份，檢出陽(yáng)性213 份，陽(yáng)性率37.1%。其中高臺(tái)縣檢出率最高，為 32.9%（51/155）,民樂縣檢出率最低，為 18.7%（29/155）。今后應(yīng)加強(qiáng)對(duì)滑液囊支原體的防控力度。

3.4 禽白血病主要要引起感染雞在性成熟前后發(fā)生腫瘤死亡。根據(jù)《禽白血病診斷技術(shù)》（GB／T 26436—2010）[5]，采用禽白血 p27 抗原 ELISA 檢測(cè)時(shí)，當(dāng)樣本中檢測(cè)出禽白血p27 抗原時(shí)，判為禽白血陽(yáng)性，否則判為陰性。本次檢測(cè)中利用禽白血p27 抗原ELISA 檢測(cè)方法共檢測(cè)184 份，檢出陽(yáng)性20 份，陽(yáng)性率10.9%。其中高臺(tái)縣檢出率最高，為30.60%（51/155）,山丹縣和民樂縣未檢出。臨床檢查健康的雞群中檢出較高比例的禽白血病，說明張掖市部分養(yǎng)雞場(chǎng)中有較高比例的禽白血病隱形感染情況，要引起高度重視，并采取綜合措施加以防控。