李敏，尹路遙，王東凱

(1.沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院，沈陽 110016；2.華北制藥河北華民藥業(yè)有限責(zé)任公司，石家莊 052165)

頭孢泊肟酯(cefpodoxime proxetil，CPDX-PR)屬于高效第3代頭孢菌素，為頭孢泊肟(cefpodoxime，CPDX)前體藥物，口服后經(jīng)腸管吸收，由腸管壁酯酶迅速水解成具有抗菌活性的頭孢泊肟。頭孢泊肟酯幾乎不溶于水[1]。在臨床主要用于敏感菌所致呼吸道感染、泌尿生殖系統(tǒng)感染、皮膚及軟組織感染及兒科感染等。干混懸劑具有藥物吸收良好，制成混懸劑后顆粒分布均勻，在胃腸道分布面積廣、吸收快、生物利用度高等優(yōu)點，還可避免片劑、膠囊劑難吞服的缺點，適用于兒童、老年人及吞咽困難的患者服用[2]。該藥由日本三共株式會社開發(fā)研制，1990年在日本上市，商品名Banan，中文名為“博拿”。

筆者在本實驗對頭孢泊肟酯干混懸劑處方及制備工藝進行研究，并參照《中華人民共和國藥典》(2015年版)有關(guān)要求，對其溶出度及溶出曲線測定方法進行研究，建立了快速、準(zhǔn)確、專屬、靈敏、重復(fù)性好的溶出曲線測定方法，可以更好地用于本品的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1儀器 LSH2-6A濕法混合制粒機(中國航空工業(yè)第一集團公司)，UV2300型紫外-可見分光光度儀(上海天美)，RC806智能溶出實驗儀(天津市天大天發(fā)科技有限公司)，XS105電子天平(梅特勒托利多儀器公司，感量：0.01 mg)。Agilent 1210高效液相色譜儀[安捷倫科技(中國)有限公司]。

1.2藥品與試劑 頭孢泊肟酯對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：130517-200802，以C15H17N6O6S2計含量為73.6%)，頭孢泊肟酯干混懸劑(公司中試產(chǎn)品，批號：H916140501，H916140502，H916140503，規(guī)格：50 mg/袋)；頭孢泊肟酯干混懸劑對照藥品(BANAN?，日本第一三共株式會社，規(guī)格：1 g：50 mg/袋，批號：0369)。蔗糖(南寧糖業(yè)股份有限公司伶俐糖廠，批號：S20141221，含量：99.8%)；交聯(lián)羧甲基纖維素鈉(德國JRS藥用輔料公司，批號：S3201011025，含量：99.4%)；黃原膠(淄博中軒生化有限公司，批號：S18140005，含量：99.9%)；羥丙甲纖維素(安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號：32062141001)；甘露醇(河北華旭藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號：32050142001，含量：99.9%)；二氧化硅(湖州展望藥業(yè)有限公司，批號：3200812C002，含量：99.7%)；阿斯巴甜(常州市牛塘化工有限公司，批號：S10024021XNM，含量：99.7%)，氯化鈉(山東肥城精制鹽廠，批號：201402008，含量：99.8%)，谷氨酸鈉(上海味之素調(diào)料品有限公司，批號：131128A4，含量：99.3%)，黃氧化鐵(寧波一品生物技術(shù)有限公司，批號：32067142001，含量：98.7%)，甜橙味粉末香精(浙江巨邦高新技術(shù)有限公司，批號：32077132001，含量：99.1%)。純化水，甘氨酸、氯化鈉、鹽酸、甲醇均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1處方前研究 頭孢泊肟酯屬于無定型粉末，無固定熔點，在水中不溶解。破壞性實驗表明，頭孢泊肟酯在光、熱、濕、酸性條件下穩(wěn)定性較差，可以被降解。頭孢泊肟酯干混懸劑采用濕法制粒，考慮到干混懸劑的制劑特性，將沉降體積比、顆粒物料性狀作為首要考察條件，溶出度指標(biāo)是處方篩選重點考察項目。綜合考慮沉降體積比、顆粒物料性狀、溶出度及pH值等指標(biāo)。

2.2處方篩選及制備工藝

2.2.1處方篩選 根據(jù)原研制劑處方[3]和專利CN101278914.B[4]中所提到的輔料種類，結(jié)合頭孢泊肟酯特點，進行處方設(shè)計，根據(jù)干混懸劑的質(zhì)量考核標(biāo)準(zhǔn)進行篩選，并與參比制劑進行對比。矯味劑、色素等輔料選用常規(guī)用量，處方篩選采用單因素考察與多因素考察聯(lián)合方式。首先采用單因素考察填充劑和助懸劑，處方篩選設(shè)計(以40袋樣品量為標(biāo)準(zhǔn))及結(jié)果見表1。

處方A顆粒偏硬，吸潮情況嚴(yán)重，考慮主要由于蔗糖易吸潮，處方B則顆粒相對適中，因此填充劑選用蔗糖與甘露醇聯(lián)合應(yīng)用。處方C、D、E的體積沉降比分別為0.88，0.57，0.94，表明黃原膠助懸效果比羥丙甲纖維素好，兩者混用效果最好。

依據(jù)初步篩選結(jié)果，采用多因素考察設(shè)計進行處方篩選，綜合考慮顆粒情況、沉降體積比、溶出度、pH值及吸濕增重等指標(biāo)。處方篩選設(shè)計見表2；綜合評價結(jié)果見表3。根據(jù)與參比制劑的結(jié)果比較，最終選用處方9。

2.2.2制備工藝 蔗糖粉碎過30目篩(篩孔內(nèi)徑：613 μm)，除原料、香精外其余輔料均過40目篩(篩孔內(nèi)徑：425 μm)備用。取羥丙甲纖維素(E5)，加純化水?dāng)嚢枞芙庵苽涑蓾舛葹?%粘合劑。稱取處方量的頭孢泊肟酯、蔗糖、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、黃原膠、甘露醇、二氧化硅、阿斯巴甜、氯化鈉、谷氨酸鈉及黃氧化鐵，加入濕法制粒機預(yù)混5～10 min，分次加入粘合劑適量，制備軟材；將所制備軟材出料至沸騰干燥機，30目制粒，50～60 ℃通風(fēng)干燥，30目整粒；加入處方量甜橙味粉末香精，混合5～10 min，即得。

表1 頭孢泊肟酯干混懸劑處方初步篩選

Tab.1 Preliminary formulation screening of cefpodoxime proxetil for suspension g

處方原輔料用量(40袋)頭孢泊肟酯(以頭孢泊肟計)蔗糖甘露醇黃原膠羥丙甲纖維素交聯(lián)羧甲基纖維素鈉低取代羥丙基纖維素二氧化硅處方A23201.2001.61.2處方B22481.2001.61.2處方C22481.2001.61.2處方D224801.201.61.2處方E22481.20.401.61.2

表2 頭孢泊肟酯干混懸劑處方篩選

Tab.2 Formulation screening of cefpodoxime proxetil for suspension g

處方頭孢泊肟酯(以頭孢泊肟計)蔗糖甘露醇黃原膠羥丙甲纖維素交聯(lián)羧甲基纖維素鈉低取代羥丙基纖維素二氧化硅處方123201.20.00.01.61.2處方222480.01.20.01.81.2處方322480.80.80.21.61.2處方422480.61.00.61.01.2處方5218140.61.01.60.01.2處方6218140.41.21.80.61.2處方7214180.41.21.60.81.2處方8214180.21.02.00.01.2處方9218140.41.22.40.01.2

表3 頭孢泊肟酯干混懸劑處方篩選評價

2.3優(yōu)化處方的性質(zhì)考察 外觀：淺黃色粉末；3批頭孢泊肟酯干混懸劑沉降體積比分別為0.99，0.98及0.98；pH 值分別為4.7，4.8及4.8；水分采用卡式水分測定法，結(jié)果分別為0.9%，1.0%及1.2%；吸濕增重分別為4.78%，4.65%及4.81%。

2.4溶出度檢查

2.4.1空白輔料干擾 取處方量空白輔料約0.1 g，照溶出度測定法進行稀釋，在200～400 nm波長范圍進行光譜掃描。輔料在波長259及264 nm處均無紫外吸收。

2.4.2測定波長選擇 取頭孢泊肟酯干混懸劑適量，以甲醇溶解后，用各溶出介質(zhì)(pH值1.2鹽酸、pH值4.0醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液、水、pH值3.0甘氨酸-氯化鈉-鹽酸)稀釋制成每毫升約含頭孢泊肟酯11 μg的溶液，作為供試品溶液。取供試品溶液，以各對應(yīng)溶出介質(zhì)為空白，按照紫外-可見分光光度法，在波長200～400 nm范圍內(nèi)掃描。

由結(jié)果可知，頭孢泊肟酯干混懸劑溶出度檢測波長為259 nm(pH值3.0甘氨酸-氯化鈉-鹽酸)、264 nm(pH值1.2鹽酸、pH值4.0醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液、水)。

2.4.3線性范圍 精密稱取頭孢泊肟酯對照品11.28 mg，置10 mL量瓶，加甲醇適量使溶解，以溶出介質(zhì)溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液。分別量取對照品貯備液0.2，0.5，0.8，1.0，1.5，2.0 mL置100 mL量瓶，加溶出介質(zhì)稀釋定容至刻度，照紫外-可見分光光度法測定，溶出介質(zhì)為空白對照，記錄吸光度值。以頭孢泊肟濃度(C，μg· mL-1)為橫坐標(biāo)，吸光度(A)為縱坐標(biāo)進行線性回歸。線性方程為A=0.042 3X-0.002，R2=0.998 4，結(jié)果表明頭孢泊肟濃度在1.66～16.6 μg· mL-1范圍內(nèi)，溶液濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.4.4精密度實驗 取上述供試品溶液，分別測定吸光度6次，結(jié)果為0.351，0.349，0.355，0.351，0.353，0.351，平均0.352，RSD為0.59%，結(jié)果表明該法測定精密度良好。

2.4.5重復(fù)性實驗 取本品(批號：H916140501)6袋，分別測定吸光度，結(jié)果為0.461，0.469，0.459，0.463，0.462，0.466，平均0.463，RSD為0.36%。結(jié)果表明該溶出測定方法重復(fù)性良好。

2.4.6回收率實驗 分別稱取頭孢泊肟酯對照品(約含頭孢泊肟酯5.5，8.9和11 mg)各3份，置9個10 mL量瓶，用pH值3.0甘氨酸-氯化鈉-鹽酸稀釋至刻度，搖勻，作為各回收率對照品儲備液。精密量取各回收率對照品儲備液1 mL，置100 mL量瓶，加入空白輔料21 mg，用pH 值3.0甘氨酸-氯化鈉-鹽酸稀釋至刻度，搖勻，作為 50%，80%，100%供試品溶液，每個濃度3份，共9份。以100%回收率溶液(11.11 mg)為對照溶液。取供試品溶液與和對照品溶液，照紫外-可見分光光度法在259 nm波長處測定吸光度，計算回收率，測定結(jié)果見表4。

結(jié)果表明本品3個濃度下溶出回收率平均值為100.4%，RSD值為1.12%，說明本法回收率良好。

2.4.7溶液穩(wěn)定性實驗 ①對照品溶液穩(wěn)定性。取頭孢泊肟酯對照品回收率對照溶液，作為穩(wěn)定性溶液，以溶出介質(zhì)甘氨酸-氯化鈉-鹽酸(pH值3.0)為空白，測定紫外吸光度，檢測波長259 nm，分別于室溫條件下在0，1，2，3，4 h末取各供試品溶液測定吸光度，RSD為0.37%，結(jié)果表明對照品溶液在4 h內(nèi)穩(wěn)定。

②樣品溶液穩(wěn)定性。取溶出儀溶出液濾過，以溶出介質(zhì)為空白對照，分別于室溫條件下在0，1，2，3，4 h末取各供試品溶液測定吸光度，計算得RSD分別為0.37%，0.33%，0.44%，0.71%和0.98%。結(jié)果本品溶液吸光度無明顯變化，4 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.8溶出度測定結(jié)果 取頭孢泊肟酯干混懸劑樣品3批，各6袋，以pH 值3.0甘氨酸-氯化鈉-鹽酸(pH值3.0)為溶出介質(zhì)，采用紫外-分光光度法測定，檢測波長259 nm，轉(zhuǎn)速 75 r·min-1，依法操作，經(jīng)30 min時取樣測定，結(jié)果見表5。

表4 溶出度測定回收率實驗結(jié)果

表5 3批樣品溶出度測定結(jié)果

Tab.5 Results of dissolution detemination in three batches of samples

%

2.4.9含量測定結(jié)果 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以水-甲醇=55：45為流動相；檢測波長為240 nm；柱溫40 ℃，精密量取供試品溶液與對照品溶液各10 μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法計算供試品中C15H17N5O6S2的含量，分別為99.1%，98.9%及99.6%。

2.5溶出曲線的繪制

2.5.1溶出均一性 取自制樣品(批號：H916140501)6袋，根據(jù)上述已確定溶出方法，測定各樣品溶出曲線，確定其溶出均一性，樣品在各時間點的溶出RSD分別為2.4%，1.4%，0.73%，1.28%，0.87%；其在15 min溶出均超過85%，溶出相似。測定結(jié)果圖1。結(jié)果表明，在pH值3.0介質(zhì)中本品溶出批內(nèi)均一性良好。

2.5.2溶出重復(fù)性 取3批供試品(批號：H916140501，H916140502，H916140503)及對照品(批號：0369)，每批取12個樣品，于5，10，15，20，30 min時吸取溶出液適量，測定溶出量，繪制4批樣品溶出曲線，結(jié)果見圖2，表明產(chǎn)品溶出均一性良好。由于其在15 min溶出均>85%，與參比制劑溶出相似。

圖1 溶出均一性測定結(jié)果

Fig.1 Uniformity results of dissolution uniformity test

圖2 溶出重復(fù)性測定結(jié)果

2.5.3溶出曲線的繪制 按照上述確定的5種溶出介質(zhì)及溶出曲線方法，測定頭孢泊肟酯干混懸劑(批號：H916140501)溶出曲線，結(jié)果見圖3。

圖3 頭孢泊肟酯5種溶出介質(zhì)溶出曲線

Fig.3 Dissolution curve of cefpodoxime proxetil in five dissolution media

3 討論

3.1處方工藝選擇 干混懸劑是提高生物利用度的優(yōu)選劑型，由于其藥物以微粒的形式混散于輔料中，因此分散度較大，有利于胃腸道吸收。干混懸劑加水分散后，應(yīng)符合混懸劑的質(zhì)量要求，即混懸液中的微粒應(yīng)均勻分散，不應(yīng)迅速下沉，沉降后不應(yīng)結(jié)成餅塊，經(jīng)振搖后應(yīng)迅速再分散。由于干混懸劑的制劑特性，沉降體積比為其處方工藝研究過程中最主要指標(biāo)之一。處方篩選主要考察助懸劑及填充劑的選擇和用量。

根據(jù)原研制劑的處方[3]和專利CN101278914.B[4]中所提到的輔料種類，選用黃原膠和羥丙甲纖維素為助懸劑，選用蔗糖和甘露醇聯(lián)合作為填充劑，頭孢泊肟酯味苦，有異臭，處方中加入適量阿斯巴甜、氯化鈉、谷氨酸鈉及甜橙味粉末香精作為矯味劑，使得干混懸劑口感更好，易被患者尤其是兒童患者接受?？刂圃o料的粒度，采用常規(guī)的濕法制粒、整粒及干燥工藝，制備工藝相對容易控制。

3.2方法學(xué)驗證溶出介質(zhì)的選擇 日本厚生省選擇水為溶出介質(zhì)[5]，而吳琦琦等[6]報道，在0.1 mol·L-1鹽酸中，轉(zhuǎn)速為50 r·min-1時，樣品可能產(chǎn)生凝膠化現(xiàn)象，膨脹結(jié)塊，不能有效溶出。研究表明，頭孢泊肟酯與食物同服會增藥物濃度-時間曲線下面積(AUC)和峰濃度(Cmax)，因而該藥宜飯后服用。人體空腹時胃液pH值為1.0，飯后被稀釋至約pH值3.5，因此《中華人民共和國藥典》2015版[7]及《美國藥典》[8]溶出介質(zhì)均為甘氨酸-氯化鈉-鹽酸(pH值3.0)更能模擬該藥品在體內(nèi)溶出的實際情況，更合理。因此溶出曲線方法學(xué)驗證選用甘氨酸-氯化鈉-鹽酸溶液(pH值3.0)作為溶出介質(zhì)。

3.3溶出測定方法的選擇 《中華人民共和國藥典》2015年版及《美國藥典》溶出度測定均選擇紫外-可見分光光度法，而日本厚生省選擇高效液相色譜(HPLC)法，通過HPLC法及紫外-可見分光光度法分別測定頭孢泊肟酯在5種溶出介質(zhì)中的溶出，F(xiàn)檢驗對測得數(shù)據(jù)進行評估，結(jié)果表明兩種方法間無顯著差異。由于頭孢泊肟酯A、B異構(gòu)體的保留時間分別為24和30 min，無法及時有效測定，不適用于溶出曲線研究，最終選定紫外-可見分光光度法進行溶出曲線測定。

3.4溶出曲線測定介質(zhì)的確定 人體消化道的pH值全范圍為1.2～6.8，參考日本厚生省公布的頭孢泊肟酯干混懸劑溶出曲線測定法，其溶出介質(zhì)分別為pH值1.2鹽酸、pH值6.8磷酸鹽緩沖液、水、pH值4.0醋酸鹽緩沖液；頭孢泊肟酯的解離常數(shù)pKa為3.20，《中華人民共和國藥典》2015年版收載品種頭孢泊肟酯干混懸劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中溶出度項以pH值3.0甘氨酸-氯化鈉-鹽酸為溶出介質(zhì)；為了真實反映藥物體內(nèi)生物利用度，并對不同產(chǎn)品作出合理區(qū)分，進而預(yù)測藥物的體內(nèi)吸收過程[9]，綜合分析選擇以pH值1.2鹽酸、pH值4.0醋酸鹽緩沖液、水、pH值6.8磷酸鹽緩沖液、pH值3.0甘氨酸-氯化鈉-鹽酸為溶出介質(zhì)，測定其溶出曲線，進行系統(tǒng)考察。

3.5溶出相似性的確定 美國食品藥品管理局提出采用溶出曲線來評價藥品內(nèi)在質(zhì)量、即延伸至仿制藥與原研藥是否生物等效的情況，并規(guī)定采用f2因子對溶出曲線的一致性進行評估。日本于1998年推出的“藥品品質(zhì)再評價工程”采用的手段是通過體外溶出度實驗來對藥品的內(nèi)在品質(zhì)進行評估[10]。溶出度測定是體外評價藥物質(zhì)量、判斷藥物臨床療效的有效方法，是評價藥物滲透吸收和生物利用度的重要指標(biāo)，即參比制劑與仿制制劑的4條溶出曲線的一致性。本品屬低溶解性-低滲透性藥物，溶出曲線主要目的在于提高BE實驗的通過率，體外溶出一致，體內(nèi)生物等效性的概率會大大提高。根據(jù)生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)，如果藥物在15 min內(nèi)溶出達到85%，可認為兩批產(chǎn)品溶出行為相似。本研究中參比制劑和自研制劑在pH值為1.2鹽酸、pH值3.0甘氨酸-氯化鈉-鹽酸、pH值4.0醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖、水5種溶出介質(zhì)中15 min溶出均超過85%，自研制劑與參比制劑在上述溶出介質(zhì)中溶出相似，本結(jié)果為進一步生物等效性研究奠定了基礎(chǔ)。