趙 颯 時藝珊

（沈陽醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院內(nèi)分泌科，遼寧 沈陽 110002）

肥胖在發(fā)達國家和發(fā)展中國家廣泛流行，已成為世界范圍內(nèi)最受注目的營養(yǎng)性疾病之一。所以，肥胖的研究越來越受到人們的重視，已成為研究的熱點。在過去的十幾年中許多學者將研究的重點放在成年時飲食對肥胖發(fā)生的影響上[1]，而近幾年的大量流行病學研究和動物學研究發(fā)現(xiàn)，早期飲食可以持續(xù)影響機體的代謝，使機體對早期經(jīng)歷產(chǎn)生記憶，進而影響成年時肥胖的發(fā)生[2]。所以，本研究從生命早期（胚胎期和斷乳后）的飲食入手，探討早期高脂飲食對大鼠肥胖相關(guān)基因表達產(chǎn)生何種影響，動態(tài)觀察作用的持續(xù)性，報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物：本實驗所用Wistar大鼠，40只，體質(zhì)量325～378 g，SPF級（購于遼寧長生生物科技股份有限公司）。

1.1.2 飼料：基礎(chǔ)飼料配方參考了美國官方分析化學師協(xié)會（AOAC）配方，原料組成：酪蛋白20（g/100 g）；豬油5（g/100 g）；玉米淀粉63（g/100 g）；混合無機鹽3.5（g/100 g）；混和維生素1.5（g/100 g）；膳食纖維1（g/100 g）；總能量1682.57（kJ）。高脂飼料：標準飼料基礎(chǔ)上添加15%豬油、0.1%膽固醇。

1.2 方法

1.2.1 動物分組及處理：Wistar雌性大鼠40只，受孕后隨機分為高脂飲食組（HFG）20只及正常飲食組（NG）20只，分娩后胎仔由妊娠期間正常飲食的母鼠喂哺，斷乳后給予正常飲食至出生后8周，每組再分為兩個亞組（1、2），分別給予高脂飲食（HFG-1、NG-1）和正常飲食（HFG-2、NG-2），再持續(xù)6周，分別記錄每組動物的體質(zhì)量。分別在剛出生、出生后8周、出生后14周等不同時期處死動物，取出肝臟，0.1%DEPC水處理，迅速用液氮速凍，放于-80 ℃冰箱長保存，備用。

1.2.2 實驗儀器和所用試劑。RT-PCR試劑盒：大連TaKaRa公司（大連寶生物技術(shù)有限公司）；總RNA提取試劑：美國Promega公司提供Trizol；DNAMarker：大連TakaRa公司DL，2000；測定RNA濃度和純度：UV-120型（日本）紫外分光光度計；Primer合成：上海生工生物工程公司；美國國立圖書館medilin基因庫檢索基因全序列。

1.2.3 RT-PCR測定：取肝臟組織100 mg，用RNA提取試劑盒提取肝臟組織總RNA，用紫外分光光度計測量、計算RNA純度及濃度。將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，1 μL cDNA為模板進行PCR反應，反應體系10 μL，最佳退火溫度均為60 ℃。目的基因FAS引物序列為：上游：5'-GGCGGGTCTATGCCACTAT-3'；下游：5'-TGGATGAGTTGTTCCTGTGC-3'。內(nèi)參照物β-actin引物序列為：上游：5'-ACGAGGCCCAGAGCAAGAG-3'，下游：5'-GGTGTGGTGCCAGATCTTCTC-3'。

1.2.4 統(tǒng)計學方法：采用SPSS14.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間差異采用方差分析進行處理。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同飲食組的大鼠在不同時期體質(zhì)量對比：高脂組（HFG）大鼠分娩后胎仔體質(zhì)量、出生后8周體質(zhì)量及出生后14周體質(zhì)量均明顯高于正常飲食組（NG），對比有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；出生后14周，組間比較高脂飲食亞組（HFG-1、NG-1）體質(zhì)量明顯高于正常飲食亞組（HFG-2、NG-2），對比有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 各組體質(zhì)量變化（g，±s）

表1 各組體質(zhì)量變化（g，±s）

注：組間比較，#P＜0.05；亞組比較，*P＜0.05

2.2 高脂飲食對不同時期大鼠肝臟中脂肪合成相關(guān)基因FAS mRNA表達量的影響：高脂組（HFG）大鼠分娩后胎仔、出生后8周FAS基因mRNA表達量均明顯高于正常飲食組（NG），對比有統(tǒng)計學意義（#P＜0.05）；出生后14周，HFG-1組雖然經(jīng)歷一段時間的正常飲食，但8周后再予高脂飲食后，F(xiàn)AS基因mRNA表達量明顯升高，分別與HFG-2組、NG-1組、NG-2組比較均有統(tǒng)計學意義（*P＜0.05）；出生后14周，HFG-2組雖然一直給予正常飲食，但與NG-1組比較，F(xiàn)AS基因mRNA表達量明顯升高，對比有統(tǒng)計學意義（*P＜0.05）；出生后14周，NG-1組雖然8周后改為高脂飲食，但與NG-2組比較，F(xiàn)AS基因mRNA表達量無明顯升高，對比無統(tǒng)計學意義（#*P＞0.05），見表2、圖1。

表2 各組大鼠FAS基因mRNA表達量（FAS/β-actin，±s）

表2 各組大鼠FAS基因mRNA表達量（FAS/β-actin，±s）

注：#P＜0.05，*P＜0.05，**P＜0.05，*#P＞0.05

圖1 各組大鼠FAS基因mRNA表達量對比圖

3 討論

肥胖是能量攝入大于能量消耗的一種常見的營養(yǎng)失調(diào)癥，由于食物攝入過多或機體代謝的改變而導致體內(nèi)脂肪積聚過多造成體質(zhì)量過度增長并引起人體病理、生理改變或潛伏。引起肥胖發(fā)生的原因很多，主要包括內(nèi)因和外因兩個方面。內(nèi)因是指肥胖發(fā)生的遺傳學基礎(chǔ)[3]，近年來的研究發(fā)現(xiàn)了一些與肥胖有關(guān)的基因，其中比較重要的基因：與脂肪合成代謝有關(guān)的脂肪酸合成酶（FAS）、脂蛋白脂肪酶（LPL），與脂肪分解代謝有關(guān)的激素敏感性脂肪酶（HSL）、肉堿?；D(zhuǎn)移酶Ⅰ（CPTⅠ）及與熱能消耗有關(guān)的解耦聯(lián)蛋白（UCPs）等[4]。已有研究證實，肥胖相關(guān)蛋白酶脂肪酸合成酶（FAS）是動物體內(nèi)長鏈脂肪酸從頭合成途徑中最后一步關(guān)鍵酶，是一種關(guān)于脂肪酸再生能力并起重要作用的限速酶[5]，其蛋白質(zhì)的多寡、活性的高低直接影響著脂肪合成能力的強弱，肥胖就是由于它過度的表達，導致了生物體內(nèi)脂肪的沉積[6-7]。外因主要包括飲食、體力活動、社會行為等因素，其中飲食對肥胖的影響最大，尤其是高脂肪飲食與肥胖的關(guān)系密切[8]。目前的研究認為，絕大多數(shù)肥胖的發(fā)生是內(nèi)因和外因相互作用的結(jié)果，并且生命早期（尤其是胎兒期和嬰兒期）的飲食與基因的相互作用對肥胖的發(fā)生、發(fā)展具有更為重要的意義[9-10]。

本研究中從孕鼠時期開始給予高脂飲食組，雖然出生后恢復正常飲食，但其后代不同時段檢測FAS基因呈持續(xù)高表達，同時體質(zhì)量明顯增高甚至發(fā)生肥胖；而從孕鼠時期開始正常飲食組，雖然成年后進食高脂飲食，但FAS基因表達增高不明顯，體質(zhì)量增加緩慢。說明孕期飲食程序化影響著后代肥胖相關(guān)蛋白FAS基因的表達，對成年肥胖的發(fā)生有長期影響，為早期預防和控制肥胖提供科學依據(jù)。