荀秀彪王月德

摘要：目的? 建立銀菊感冒膠囊中綠原酸含量測定的高效液相色譜法。方法? 采用Hypersil ODS2（4.6 mm×250 mm，5μm）色譜柱;乙腈-0.4%磷酸溶液（9∶91）為流動相;流速：1.0 ml/min;檢測波長：327 nm;柱溫：30 ℃;進樣量：10 μl;理論板數(shù)按綠原酸峰計算不低于1000。結(jié)果? 綠原酸進樣量在0.04348～0.39132 μg內(nèi)線性關系良好，r=0.9997（n=6），平均回收率為98.66%，RSD=0.83%（n=5）。結(jié)論? 本次建立的方法操作簡便快捷，結(jié)果可靠，可用于銀菊感冒膠囊中綠原酸的含量測定。

關鍵詞：高效液相色譜法;銀菊感冒膠囊;綠原酸;含量測定

中圖分類號：R725.1? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.09.052

文章編號：1006-1959（2020）09-0155-03

Determination of Chlorogenic Acid in Yinju Ganmao Capsules by HPLC

XUN Xiu-biao，WANG Yue-de

（Qujing City Food and Drug Inspection and Testing Center，Yunnan Province，Qujing 655000， Yunnan，China）

Abstract：Objective? To establish a high performance liquid chromatography method for the determination of chlorogenic acid in Yinju Ganmao capsules.Methods? Hypersil ODS2 （4.6 mm × 250 mm， 5 μm） chromatographic column; acetonitrile-0.4% phosphoric acid solution （9∶91） as mobile phase; flow rate： 1.0 ml/min; detection wavelength： 327 nm; column temperature： 30 ℃ Injection volume： 10 μl; theoretical plate count is not less than 1000 based on chlorogenic acid peak calculation.Results? The chlorogenic acid injection volume was in a linear relationship between 0.04348 and 0.39132 μg， r=0.9997（n=6）， the average recovery was 98.66%， and RSD=0.83%（n=5）.Conclusion? The method established this time is simple and quick， and the results are reliable. It can be used for the determination of chlorogenic acid in Yinju Ganmao capsules.

Key words：High performance liquid chromatography;Yinju Ganmao capsules;Chlorogenic acid;Content determination

銀菊感冒膠囊為曲靖市中醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)醫(yī)院制劑（批準文號：滇ZJGF＼2005-538），由金銀花、菊花、射干、氨基比林、馬來酸氯苯那敏等組成，具有清熱解毒、解熱鎮(zhèn)痛的作用。臨床用于感冒、發(fā)熱、頭痛、咽喉腫痛等癥。制劑質(zhì)量標準中綠原酸僅有薄層色譜定性鑒別，無含量測定方法[1]。本文參考有關文獻資料[1，2]，采用高效液相色譜法（HPLC）對該品種中金銀花和菊花中總的綠原酸含量進行測定，旨在為銀菊感冒膠囊質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1儀器與器材料

1.1儀器? Agilent1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）（四元泵，自動進樣器，柱溫箱，紫外檢測器）;METTLE MS205DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）;KQ-300UDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;一體式超純水儀（PURELAB Flex 3，英國ELGA公司）。

1.2藥品與試劑? 銀菊感冒膠囊（批號190915、191017、191120，規(guī)格0.25 g/粒）樣品均來自云南省曲靖市中醫(yī)醫(yī)院;綠原酸對照品（批號110753-2011817，含量96.8%）購于中國食品藥品檢定研究院;乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水。

2方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1對照品溶液制備? 取綠原酸對照品10.87 mg，精密稱定，置10 ml棕色容量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取1 ml置50 ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，制成含綠原酸21.74 μg/ml的對照品溶液，即得（10 ℃以下保存）。

2.1.2供試品溶液制備? 取銀菊感冒膠囊20粒，計算平均裝量，取內(nèi)容物，研細，混勻，取適量（約相當于綠原酸4 mg），精密稱定，放入具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，稱定重量，密塞，超聲處理（功率250 W，頻率35 kHz） 30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，濾液再用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1.3陰性樣品溶液制備? 根據(jù)制劑處方及工藝，配制缺金銀花、菊花的陰性樣品（由云南省曲靖中醫(yī)醫(yī)院提供），再按“2.1.2”項下方法制備，即得。

2.2色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗? 色譜柱：Hypersil ODS2 5 μm，4.6 mm×250 mm;乙腈-0.4%磷酸溶液（9：91）為流動相;流速：1.0 ml/min;柱溫：30 ℃;檢測波長：327 nm;進樣量：10 μl。理論板數(shù)按綠原酸峰計算不低于1000。

2.3方法學考察

2.3.1專屬性試驗? 精密量取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μl，按“2.2”項下色譜條件下，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。結(jié)果顯示綠原酸色譜峰能有效進行分離，分離度大于1.5，理論板數(shù)按所測色譜峰計算大于1000，說明測定方法專屬性較好，無干擾。

2.3.2線性關系試驗? 精密吸取“2.1.1”項下的對照品溶液各2、4、6、10、14、18 μl，分別注入液相色譜儀，按“2.2”項下色譜條件測定，記錄峰面積，計算并繪制標準曲線，以對照品溶液進樣量為橫坐標（x）、峰面積為縱坐標（y），得回歸曲線方程：y=30.04777+3.63056，r=0.9997（n=6）。表明進樣量在0.04348～0.39132 μg線性關系良好。

2.3.3穩(wěn)定性試驗? 取同一批次銀菊感冒膠囊（批號190915）的同一份供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12 h不同時間，按照“2.2”項下的色譜條件，進樣測定，記錄峰面積，結(jié)果峰面積RSD為1.52%（n=6）。結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)色譜峰面積變化不大，溶液較穩(wěn)定。

2.3.4精密度試驗? 取銀菊感冒膠囊（批號190915）按“2.1.2”項下方法制備的供試品溶液，精密吸取? 10 μl，按照“2.2”項下的色譜條件進行分析，連續(xù)進樣6次，記錄綠原酸峰面積。結(jié)果綠原酸峰面積的RSD值為0.59%（n=6），表明儀器平行精密度良好。

2.3.5重復性試驗? 取同一批次的銀菊感冒膠囊（批號190915）0.5 g，平行6份，精密稱定，按“2.1.2”項下的方法操作，按照“2.2”項下的色譜條件進行分析，每1 g樣品中含綠原酸7.10 mg，RSD為0.26%，結(jié)果表明該方法重復性良好。

2.3.6加樣回收率試驗? 取已知含量的同一批銀菊 感冒膠囊（批號190915，綠原酸含量7.10 mg/g）5份，每份約0.3 g，精密稱定;另取綠原酸對照品25.15 mg，精密稱定，置25 ml容量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取2 ml置已稱定樣品中，按“2.1.2”項下的方法制備供試品溶液，按照“2.2”項下的色譜條件進行含量測定、計算回收率，見表1。平均回收率為98.66%，RSD值為0.83%（n=5）。表明本含量測定方法準確度良好。

2.3.7樣品測定? 取3個批次的銀菊感冒膠囊（批號190915、191017、191120）分別按“2.1.2”項下的方法制備供試品溶液，每批平行取樣2份，按照“2.2”項下的色譜條件進行測定，每份測定2次，計算綠原酸含量，見表2。

3討論

根據(jù)中國藥典及相關文獻報道[3]，同時通過實驗，綠原酸在327.5 nm波長處有最大吸收，最終選用327 nm作為檢測波長。有研究報道[4]，在試驗? ?中曾采用流動相、50%甲醇、水、乙醇等溶媒超聲? ?30 min進行提取，其中以50%甲醇作為提取溶劑為佳;再以50%甲醇為提取溶劑，對同一批號樣品的超聲時間進行考察，選擇超聲15、30、45、60 min后處理的樣品溶液分別進行分析，結(jié)果各樣品含量基本接近，故選擇超聲時間30 min處理樣品。本試驗采用3種流動相進行成分分離[5]：①乙腈-磷酸溶液;②甲醇-水;③甲醇-乙腈-水，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈-0.4%磷酸溶液（9∶91）為流動相保留時間合適且各成分獲得較好的分離。因此可以采用高效液相色譜法測定銀菊感冒膠中囊金銀花與菊花的綠原酸的總量的方法來反映該制劑的內(nèi)在質(zhì)量。

綜上所述，本試驗中采用高效液相色譜法測定銀菊感冒膠中囊金銀花與菊花的綠原酸的總量，該方法操作簡便，準確可靠，重復性好，可用于該制劑質(zhì)量控制。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2015年版一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：221，310-311.

[2]王錦，馬善波，李龍，等.提高咽炎顆粒的質(zhì)量標準研究[J].西北藥學雜志，2018，33（3）：51-54.

[3]左霞，劉春霞，楊金霞，等.HPLC法測定不同來源不同采收期忍冬藤和金銀花中綠原酸含量[J].中國藥師，2015（4）：158-160.

[4]李楊，鄧剛，王豫梅，等.不同提取方法對金銀花涼茶中綠原酸含量的影響[J].食品工業(yè)，2016（9）：115-118.

[5]屠萬倩，劉曉苗，張留記，等.HPLC法同時測定不同產(chǎn)地不同品種菊花中8種成分的含量[J].中藥材，2018，41（1）：152-155.

收稿日期：2020-01-14;修回日期：2020-01-21

編輯/成森

作者簡介：荀秀彪（1968.7-），男，云南曲靖人，本科，副主任藥師，主要從事食品、藥品檢驗檢測工作