曹騫 王磊 代立勤

摘要? ? 本文建立了雞肉中金剛烷胺藥物殘留檢測(cè)方法。樣品經(jīng)過(guò)1%乙酸乙腈提取，C18柱凈化，以及經(jīng)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)分析，優(yōu)化了質(zhì)譜的分離參數(shù)。結(jié)果表明，金剛烷胺在1～100 μg/mL范圍內(nèi)線性滿足要求，相關(guān)系數(shù)r為0.998，定量限為1.0 μg/kg。該方法簡(jiǎn)單、靈敏度高、穩(wěn)定性好，能夠滿足雞肉中金剛烷胺藥物殘留檢測(cè)要求，為雞肉中金剛烷胺藥物檢測(cè)提供一定技術(shù)參考。

關(guān)鍵詞? ? 金剛烷胺;雞肉;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;藥物殘留

金剛烷胺可用于亞洲甲-Ⅱ型流感的預(yù)防和治療，畜牧養(yǎng)殖業(yè)中金剛烷胺主要用于雞禽流感的預(yù)防和早期治療，但其具有致精神異常的副作用。流感耐藥性日益增強(qiáng)，長(zhǎng)時(shí)間超量食用這些藥物則會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物中毒、免疫抑制以及藥物殘留，重則可能會(huì)使病毒發(fā)生變異，為預(yù)防和控制帶來(lái)很大難題，對(duì)動(dòng)物源性食品的消費(fèi)者存在較大安全隱患[1-3]。2005年，我國(guó)農(nóng)業(yè)部也曾經(jīng)發(fā)出《關(guān)于清查金剛院胺等抗病毒藥物的緊急通知》，禁止金剛烷胺等抗病毒獸藥的生產(chǎn)和使用。由于金剛烷胺在禽類(lèi)養(yǎng)殖中仍有非法使用，因而對(duì)于禽類(lèi)食品中金剛烷胺殘留含量的檢測(cè)方法研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本文旨在建立高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，同時(shí)探討雞肉中金剛烷胺的殘留檢測(cè)方法，為開(kāi)展雞肉中金剛烷胺藥物的殘留檢測(cè)提供一定的參考。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 儀器與試劑

試驗(yàn)儀器：Waters ACQUITY UPLC H-Class Xevo TQD 超高效液相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國(guó)Waters公司;高速冷凍離心機(jī)，湖南湘儀公司;渦旋混合器，德國(guó)IKA公司;氮吹儀，上海安譜公司;百分之一電子天平，德國(guó)賽多利斯公司。

試劑：乙腈、甲醇、正己烷、甲酸（HPLC級(jí)，上海安譜公司）;試驗(yàn)用水為屈臣氏蒸餾水;C18固相萃取柱（60 mg/3 mL）購(gòu)自上海安譜公司;金剛烷胺、金剛烷胺-D15購(gòu)自德國(guó)Dr公司。

1.2? ? 試驗(yàn)方法

1.2.1? ? 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置。將金剛烷胺、金剛烷胺-D15各10 mg用甲醇溶解并定容于10 mL棕色容量瓶，配置成1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于0～5 ℃冰箱中保存。準(zhǔn)確移取適量金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液用0.1%甲酸乙腈/水（體積比為3∶7）溶液配置成目標(biāo)藥物濃度為1、2、5、10、20、50、100 μg/L，其中同位素內(nèi)標(biāo)濃度為20 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.2.2? ? 試劑配置。5.0 mol/L氫氧化鈉溶液：稱取10 g氫氧化鈉，溶解于50 mL水中。1%乙酸乙腈溶液：取5 mL乙酸，用乙腈稀釋至500 mL。0.1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液：稱取6.8 g磷酸二氫鉀，用水溶解，定容至500 mL，用5.0 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.00±0.05。0.1%甲酸乙腈/水溶液：取0.5 mL甲酸，用乙腈/水（體積比為3∶7）溶液稀釋至500 mL。

1.2.3? ? 樣品處理。提?。簻?zhǔn)確稱取2.00 g（精確至0.01 g）均質(zhì)雞肉樣品于50 mL離心管中，加入5 mL 1%乙酸乙腈，渦旋提取2 min，10 000 r/min離心5 min（建議溫度設(shè)為4 ℃），上清液轉(zhuǎn)入另一支50 mL離心管中。重復(fù)提取1次，離心后合并上清液，加入10 mL正己烷，渦旋混合1 min，10 000 r/min離心1 min（建議溫度設(shè)為4 ℃），移去正己烷，將乙腈層轉(zhuǎn)入于氮吹管中，40 ℃水浴氮吹至近干，用3 mL磷酸鹽緩沖液溶解殘?jiān)?，待凈化[4]。

凈化：C18固相萃取柱（100 mg/3 mL），分別用2 mL乙腈、2 mL磷酸鹽緩沖液活化和平衡，將待凈化的溶液以自然滴液速度過(guò)柱，用2 mL水淋洗，真空抽干。用1 mL 0.1%甲酸乙腈/水（體積比為3∶7）溶液洗脫，真空抽干，收集洗脫液，過(guò)0.22 μm濾膜后上機(jī)測(cè)定[5-6]。

1.2.4? ? 色譜條件。色譜柱為Waters ACQURRY UPLC BEHC18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），柱溫40 ℃，樣品室溫度20 ℃，進(jìn)樣量5 μL，流速0.4 mL/min，流動(dòng)相A為0.1%甲酸水溶液、B為乙腈溶液。梯度洗脫條件：0～0.5 min，維持95% A，5% B;0.5～4 min，95%A線性變化至5%，5%B線性變化至95%;4.1 min線性變化至95%A，5%B;4.1～6 min維持95%A，5%B。

1.2.5? ? 質(zhì)譜條件。電噴霧電壓為3.00 kV;離子源溫度為120 ℃;色譜柱溫度為40 ℃;洗脫溶劑溫度為450 ℃;氣體流量（N2）為1 000 L/h;錐孔氣流量（N2）為50 L/h。

2? ? 結(jié)果與討論

2.1? ? 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

分別將金剛烷胺和金剛烷胺-D15標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液配置成0.5 μg/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以5 μL/min的流速注入質(zhì)譜儀，在正離子模式下進(jìn)行掃描，確定目標(biāo)化合物的分子離子、定性及定量離子，并且優(yōu)化質(zhì)譜的各項(xiàng)參數(shù)，質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2? ? 線性范圍和檢出限

將金剛烷胺分別配置成1、2、5、10、20、50、100 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定。雞肉中金剛烷胺檢出限為0.3 μg/kg，定量限為1.0 μg/kg。金剛烷胺在1～100 μg/L范圍內(nèi)，線性方程為Y=0.011 991 5x+0.065 052，相關(guān)系數(shù)為0.998 407。

2.3? ? 加標(biāo)回收率

在空白雞肉樣品中添加20 ng/mL金剛烷胺進(jìn)行回收試驗(yàn)可知，回收量為19.3 ng/mL，金剛烷胺回收率為96.5%。

3? ? 結(jié)論

本文建立了雞肉中金剛烷胺檢測(cè)分析的LC-MS/MS分析方法。該方法簡(jiǎn)單、靈敏度高、穩(wěn)定性好，能滿足雞肉中金剛烷胺殘留檢測(cè)要求，可以為相關(guān)檢測(cè)提供技術(shù)參考。

4? ? 參考文獻(xiàn)

[1] 張璐，付曉燕，何強(qiáng)，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)動(dòng)物源性食品中的金剛烷胺[J].環(huán)境化學(xué)，2018，37（3）：614-616.

[2] 程忠剛，傅偉化，劉樹(shù)中.動(dòng)物抗病毒藥物的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].獸醫(yī)導(dǎo)刊，2010（8）：42-45.

[3] 張強(qiáng)，趙巧杰，熊瑞生.抗流感病毒藥物研究進(jìn)展[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2010，45（3）：289-299.

[4] 王亞會(huì)，李祥波，陸君.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞肉中的金剛烷胺[J].食品工業(yè)，2019，40（9）：277-280.

[5] 張昕怡.高效液相色譜技術(shù)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用[J].農(nóng)業(yè)與技術(shù)，2016，36（4）：235.

[6] 陽(yáng)艷娟.高效液相色譜技術(shù)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用[J].食品安全導(dǎo)刊，2015（20）：74-75.