劉永， 谷諾諾

（石家莊市中醫(yī)院東院區(qū)，河北石家莊 050051）

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是結(jié)腸的一種功能性疾病，臨床多見(jiàn)，常因患者的結(jié)腸蠕動(dòng)、環(huán)形肌收縮、黏液分泌等功能出現(xiàn)紊亂而導(dǎo)致各種癥狀，與精神因素關(guān)聯(lián)密切，以腹痛、腹脹等腹部不適及排便習(xí)慣、大便性狀異常為臨床表現(xiàn)，癥狀持續(xù)或間歇發(fā)作[1]。IBS 便秘型（IBS-C）是其亞型之一[2]。流行病學(xué)調(diào)查報(bào)告顯示:我國(guó)IBS-C 發(fā)病率約占26.70%[3]，逐年增高，且癥狀頑固，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，但研究較少，發(fā)病機(jī)制不明確，西醫(yī)藥治療作用局限。導(dǎo)師楊倩教授基于文獻(xiàn)研究及臨床實(shí)踐，發(fā)現(xiàn)中醫(yī)辨治本病有標(biāo)本兼治、減少?gòu)?fù)發(fā)等優(yōu)勢(shì)，結(jié)合“濁毒理論”，自擬通腑降濁方治療本病，見(jiàn)效頗多，但機(jī)理未明，推廣受限。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，IBS的發(fā)病與腸道微生物有密切關(guān)系，腸道菌群是一個(gè)復(fù)雜而龐大的微生態(tài)系統(tǒng)，往往通過(guò)“微生物—腦—腸軸”而影響本病[4]，因此，我們以大鼠糞便菌群的變化為切入點(diǎn)，以IBS-C模型大鼠為研究對(duì)象，探討腸道微生物的變化，進(jìn)而明確通腑降濁方治療本病的作用機(jī)制，開(kāi)拓中藥研究思路，并豐富臨床治療本病的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物6 周齡清潔級(jí)雄性健康SD 大鼠49 只，體質(zhì)量（100 ± 20）g，購(gòu)自河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào):SCXK（冀）2013-1-003，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):1610300。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物通腑降濁方免煎顆粒劑（柴胡9 g、枳實(shí)9 g、白芍12 g、檳榔6 g、黃連6 g、飛揚(yáng)草10 g、八月札10 g、冬葵子6 g、茯苓12 g、火麻仁9 g、羅漢果10 g、干姜6 g、甘草6 g），由廣東一方制藥有限公司提供，按比例溶于蒸餾水配制成質(zhì)量濃度為1.156、2.313、4.625 g/mL 的溶液。西沙必利片（規(guī)格:5 mg/片），西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H10960289，溶于蒸餾水配成0.9 g/L混懸液。乳果糖口服溶液（規(guī)格:667 g/L；批準(zhǔn)文號(hào):進(jìn)口藥品注冊(cè)證號(hào)H20120387），由荷蘭Abbott Biologicals B.V.公司生產(chǎn)，溶于蒸餾水配成416.875 g/L溶液。

1. 3 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器蘇木素—伊紅染色液（天津市永大化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心）；VECTASTAIN ABC試劑（美國(guó)Vecteor 公司）； TruSeq PCR-Free DNA建庫(kù)試劑盒（美國(guó)Illumina 公司）；GeneJET 膠回收試劑盒（美國(guó)Thermo Scientific 公司）；DNA 提取試劑盒（天根生化科技北京有限公司）。Illumina HiSeq2500 測(cè)序平臺(tái)（美國(guó)Illumina 公司）；ABI Gene Amp9700 型PCR 儀（美 國(guó)Gene 公 司）；Sartorious 精密電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；灌胃針（北京廣源達(dá)科技發(fā)展有限公司）；HMIAS-2000 顯微圖像分析系統(tǒng)（武漢同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)）；8-F兒童型帶氣囊導(dǎo)尿管（南通三利醫(yī)療器械有限公司）。

1.4 動(dòng)物分組與處理將大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表分為正常組，模型組，西沙必利組，益生元組，中藥高、中、低劑量組，每組各7只，并將除正常組外統(tǒng)稱為造模組。將造模組大鼠給予普通飼料喂養(yǎng)7 d 適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境后，采用冰水灌胃法建立IBS-C大鼠模型[5]，即每日8∶30給予大鼠0 ～4 ℃冰水混合物灌胃，共14 d。每日于灌胃前稱取大鼠體質(zhì)量，于灌胃后更換大鼠墊料，24 h后撿取大鼠糞便，稱取糞便質(zhì)量，記錄糞便粒數(shù)，觀察糞便硬度及形態(tài)。若見(jiàn)大鼠糞便質(zhì)硬、形狀變小、含水量減少，鼠性易激惹，可判斷造模成功[6]。

造模成功后，根據(jù)公式[大鼠每日用藥劑量=成人每日用藥總量/一般成人體質(zhì)量（60 kg）× 10×大鼠體質(zhì)量][7]（正常成人每日口服中藥顆粒劑量為111 g，每日口服西沙必利片15～30 mg，口服乳果糖口服溶液15 mL）換算各組灌胃給藥劑量。正常組與模型組:給予等體積生理鹽水灌胃，每日1 次；西沙必利組:給予西沙必利片0.9 g/L 混懸液，按劑量為3.6 mg·kg-1灌胃，每日1次；益生元組:予乳果糖口服藥417 g/L 溶液，按劑量為1 667.5 mg·kg-1灌胃，每日1 次；中藥高、中、低劑量組:將通腑降濁方顆粒劑溶于蒸餾水分別配成濃度為4.625、2.313、1.156 g/mL 的溶液，按劑量為18.500、9.250、4.625 g·kg-1灌胃，每日1次。

1. 5 觀察指標(biāo)與方法（1）觀察大鼠精神、體質(zhì)量、飲食、毛發(fā)、尿量、糞便含水量及粒數(shù)等一般狀況，判斷造模成功與否及治療后療效。糞便含水量=（濕糞質(zhì)量- 干糞質(zhì)量）/濕糞質(zhì)量×100%。（2）末次灌胃禁食24 h 后，收集大鼠2 粒糞便（不低于0.5 g），置入液氮中保存，后移交于北京諾禾致源生物信息科技有限公司，應(yīng)用16S rDNA 擴(kuò)增子測(cè)序技術(shù)，采用高通量測(cè)序，通過(guò)提取糞便DNA、瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)、PCR、HiSeq上機(jī)測(cè)序、操作分類單元（OTUs）聚類和物種分類，再對(duì)OTUs 進(jìn)行豐度、多樣性指數(shù)、聚類、統(tǒng)計(jì)等分析檢測(cè)大鼠糞便微生物群落結(jié)構(gòu)。（3）采取斷頭法處死大鼠，快速剖取結(jié)腸，用生理鹽水沖洗，用體積分?jǐn)?shù)10%中性甲醛溶液于瓶裝容器中固定，依此用60%乙醇（體積分?jǐn)?shù)，下同）、75%乙醇各60 min、80%乙醇18 h、90%乙醇4 h、95%乙醇1.5 h、無(wú)水乙醇1 h 脫水；二甲苯透明后常規(guī)石蠟包埋切片，制作2 μm 厚石蠟切片，80 ℃烤片30 min，常溫保存?zhèn)溆?。HE 染色觀察結(jié)腸組織病理變化。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料正態(tài)分布且方差齊者以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差(±s) 表示，偏態(tài)分布的資料常用中位數(shù)和四分位數(shù)間距表示。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步組間兩兩比較采用SNK 法，若不滿足正態(tài)分布，采用非參數(shù)檢驗(yàn)。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 大鼠一般狀況正常組大鼠一般狀況良好，糞便質(zhì)軟，色黃，如麥粒狀。造模組大鼠情緒易激惹，毛發(fā)亂，飲食減少，糞便質(zhì)硬，色白，量少，多呈小黃豆?fàn)?，提示造模成功。給藥后，各治療組大鼠情緒較之前穩(wěn)定，糞便質(zhì)地變軟，數(shù)量增多，進(jìn)食及毛發(fā)光澤好轉(zhuǎn)，提示各組藥物治療有效，且肉眼未見(jiàn)明顯差別，各階段均無(wú)大鼠死亡、腹瀉現(xiàn)象。每日于灌胃前記錄各組大鼠體質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)各組大鼠體質(zhì)量于實(shí)驗(yàn)期間均平穩(wěn)增長(zhǎng)，且增長(zhǎng)趨勢(shì)基本一致，各組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P ＞0.05）。

2.2 各組大鼠糞便含水量及糞便粒數(shù)比較造模結(jié)束后，各造模組大鼠糞便含水量及糞便粒數(shù)較正常組明顯減少（P ＜0.05），各造模組之間糞便含水量及糞便粒數(shù)無(wú)明顯差異（P ＞0.05），提示造模成功。各治療組分別給予對(duì)應(yīng)治療后糞便含水量及糞便粒數(shù)較模型組均有所增加（P ＜0.05），但仍低于正常組（P ＜0.05）。各治療組間比較:中藥各劑量組間糞便含水量及糞便粒數(shù)無(wú)明顯差異（P ＞0.05）；中藥各組糞便含水量及糞便粒數(shù)與益生元組比較，差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），但與西沙必利組比較，糞便含水量及糞便粒數(shù)均明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠糞便含水量及糞便粒數(shù)比較Table 1 Comparison of fecal moisture content and faeces number in rats of the various groups (±s)

表1 各組大鼠糞便含水量及糞便粒數(shù)比較Table 1 Comparison of fecal moisture content and faeces number in rats of the various groups (±s)

①P ＜0.05，與正常組比較；②P ＜0.05，與模型組比較；③P ＜0.05，與西沙必利組比較

組別正常組模型組西沙必利組益生元組中藥高劑量組中藥中劑量組中藥低劑量組N/只7777777糞便含水量（p/%）治療前44.77±1.21 30.50±0.85①30.63±1.62①30.43±1.23①30.70±1.00①30.77±1.19①30.40±1.62①治療后44.59±1.49 30.80±1.48①39.27±1.21②41.80±0.86②③41.29±1.75②③42.30±1.34②③42.59±1.12②③糞便粒數(shù)（n/粒）治療前53.57±5.56 37.40±5.09①37.14±4.38①36.63±5.11①37.29±3.35①37.06±5.58①36.37±5.15①治療后52.66±6.03 35.00±2.52①39.57±3.31②44.29±4.54②③45.71±3.50②③46.71±3.95②③47.29±4.11②③

2.3 各組大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)形態(tài)比較剖取結(jié)腸，HE 染色后通過(guò)顯微鏡觀察結(jié)腸組織病理學(xué)變化，結(jié)果顯示:各組大鼠結(jié)腸黏膜層完整，無(wú)充血、水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、糜爛、潰瘍等異常改變，符合IBS-C之功能性胃腸病表現(xiàn)。見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)形態(tài)比較（HE染色）Figure 1 Comparison of the pathological features of colon tissues in various groups（by HE staining）

2.4 各組大鼠糞便微生物群落結(jié)構(gòu)比較

2. 4. 1 物種相對(duì)豐度展示 根據(jù)物種注釋結(jié)果，選取每個(gè)分組在門(mén)（Phylum）、屬（Genus）水平上最大豐度排名前10 位的物種，生成物種相對(duì)豐度柱形累加圖，以便直觀查看各樣品在該水平上相對(duì)豐度較高的物種及其比例。如圖2 所示，橫坐標(biāo)（sample name）是樣品名，縱坐標(biāo)（relative abundance）表示相對(duì)豐度，Others 表示圖中這10 個(gè)門(mén)/屬之外的其他所有門(mén)/屬的相對(duì)豐度之和。在門(mén)水平，各組均有5 個(gè)相同的優(yōu)勢(shì)物種，即厚壁菌門(mén)（Firmicutes）、擬桿菌門(mén)（Bacteroidetes）、變形菌門(mén)（Proteobacteria）、放線菌門(mén)（Actinobacteria）、柔膜菌門(mén)（Tenericutes），相對(duì)豐度之和所占比例均超過(guò)95%，而各個(gè)物種在各組的相對(duì)豐度卻不盡相同?？梢?jiàn)，在門(mén)水平，各組大鼠糞便菌群優(yōu)勢(shì)物種未變，但豐度發(fā)生了明顯變化，其中厚壁菌門(mén)和擬桿菌門(mén)數(shù)量最多，變化較大；治療后異常的菌群結(jié)構(gòu)趨近于正常組，各治療組間不盡相同，中藥3 個(gè)劑量組間菌群結(jié)構(gòu)更相近。

在屬水平，各組均有10 個(gè)相同的優(yōu)勢(shì)物種:乳酸菌（Lactobacillus）、異花菌（Allobaculum）、普雷沃 氏 菌NK3B31（Prevotellaceae_NK3B31_group）、普氏菌（Prevotella_9）、Romboutsia、Alloprevotella、雙歧桿菌（Bifidobacterium）、普雷沃氏菌UCG-003（Prevotellaceae_UCG - 003）、 產(chǎn) 氣 柯 林 斯 菌（Collinsella）、Blautia；而各個(gè)菌及其總和在各組的相對(duì)豐度卻不盡相同。見(jiàn)圖3?？梢?jiàn)，在屬水平，與門(mén)水平相似，各組優(yōu)勢(shì)菌種未變，但菌群結(jié)構(gòu)明顯改變；治療后異常的菌群結(jié)構(gòu)趨近于正常組。

圖2 各分組門(mén)水平上的物種相對(duì)豐度柱形圖Figure 2 Comparison of the relative richness of species at phylum in various groups

圖3 各分組屬水平上的物種相對(duì)豐度柱形圖Figure 3 Comparison of the relative abundance of species at genus in various groups

2. 4. 2 稀釋曲線（rarefaction curve） 稀釋曲線，是從樣品中隨機(jī)抽取一定測(cè)序量的數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)它們所代表物種OTUs 的數(shù)目，以抽取的測(cè)序數(shù)據(jù)量與對(duì)應(yīng)的物種數(shù)來(lái)構(gòu)建曲線。稀釋曲線可直接反映測(cè)序數(shù)據(jù)量的合理性，并間接反映樣品中物種的豐富程度，當(dāng)曲線趨向平坦時(shí)，說(shuō)明測(cè)序數(shù)據(jù)量漸進(jìn)合理，更多的數(shù)據(jù)量只會(huì)產(chǎn)生少量新的物種。如圖4所示，曲線趨于平穩(wěn)，提示本實(shí)驗(yàn)所采取測(cè)序數(shù)據(jù)量能夠覆蓋絕大多數(shù)細(xì)菌物種，滿足后續(xù)分析，且模型組物種豐富度明顯降低，治療后物種豐富度趨近于正常組，其中中藥高劑量組、益生元組較之更近。

圖4 各組稀釋曲線Figure 4 Rarefaction Curves

2. 4. 3 Alpha 多樣性指數(shù)組間差異分析 本實(shí)驗(yàn)選用ACE 指數(shù)計(jì)算菌群豐度，其值越大，物種越豐富；Shannon 指數(shù)計(jì)算菌群多樣性，其值越大，說(shuō)明群落多樣性越高。對(duì)不同樣品的2個(gè)指數(shù)進(jìn)行Wilcox 秩和檢驗(yàn)，并通過(guò)箱形圖（見(jiàn)圖5、6）展示，可見(jiàn)除正常組與益生元組、中藥高劑量組，西沙必利組與益生元組、中藥低劑量組、中藥中劑量組，益生元組、中藥低劑量組與中藥中劑量組之間，其余各組間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P ＜0.05），其中:模型組ACE 指數(shù)值（即菌種豐度）較正常組顯著降低，各治療組ACE 指數(shù)值均較模型組升高，尤以中藥高劑量組及益生元組接近正常組；各組之間Shannon 指數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P ＞0.05），說(shuō)明各組間菌群多樣性無(wú)顯著差異。

圖5 各組ACE指數(shù)組間差異箱形圖Figure 5 The inter-group difference box diagram of ACE

圖6 Shannon指數(shù)組間差異箱形圖Figure 6 The inter-group difference box diagram of Shannon

2. 4. 4 Beta Diversity 指數(shù)—距離矩陣熱圖 Beta多樣性研究中，選用Weighted Unifrac 距離和Unweighted Unifrac 距離2 個(gè)指標(biāo)來(lái)衡量2 個(gè)樣品間的相異系數(shù)，其值越小，表示這2個(gè)樣品在物種多樣性方面存在的差異越小。以Weighted Unifrac 和Unweighted Unifrac 距離繪制的Heatmap 展示結(jié)果見(jiàn)圖7所示:各組之間均有差異。模型組與正常組的差異最大，提示IBS-C 大鼠菌群結(jié)構(gòu)明顯紊亂；各治療組與正常組的差異較模型組與正常組的差異減小，提示治療均有效，能調(diào)節(jié)紊亂的腸道菌群，且中藥高劑量組調(diào)節(jié)菌群失調(diào)作用最好。

圖7 各組Beta多樣性指數(shù)距離矩陣熱圖Figure 7 The beta diversity index chart

2. 4. 5 不加權(quán)算術(shù)平均聚類方法（UPGMA）聚類樹(shù) 為了研究不同樣品間的相似性，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)以Weighted Unifrac 距離矩陣對(duì)樣品進(jìn)行UPGMA 聚類分析，構(gòu)建樣品的聚類樹(shù)，并將聚類結(jié)果與各樣品在門(mén)水平上的物種相對(duì)豐度整合展示，見(jiàn)圖8。圖8示左側(cè)是UPGMA聚類樹(shù)結(jié)構(gòu)，右側(cè)為各樣品在門(mén)水平上的物種相對(duì)豐度分布圖，分析表明在門(mén)水平上，微生物群根據(jù)進(jìn)化關(guān)系聚類為兩大分支，模型組、西沙必利組、益生元組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組聚為一支，正常組單獨(dú)為一支，說(shuō)明正常組的細(xì)菌群落與其他各組有明顯的不同。此外，中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組、益生元組距離較近，表示菌群結(jié)構(gòu)相似，且中藥低劑量組、中藥中劑量組最為相似，提示對(duì)腸道菌群改善作用接近；西沙必利組與模型組距離較近，表示菌群結(jié)構(gòu)相似度高，提示西沙必利組對(duì)IBS-C模型大鼠腸道菌群紊亂改善作用相對(duì)不明顯。

圖8 各組不加權(quán)算術(shù)平均聚類方法（UPGMA）聚類樹(shù)Figure 8 UPGMA clustering tree

3 討論

中醫(yī)古籍中并無(wú)腸易激綜合征（IBS-C）病名的記載，根據(jù)其臨床癥狀，多將其歸屬于“便秘”“脾約”“腹痛”“郁證”“不更衣”“陰結(jié)”“陽(yáng)結(jié)”等范疇，歸結(jié)其病因?yàn)轱嬍巢还?jié)、起居失調(diào)、外邪侵襲、情志不暢、稟賦不足等，主病之臟屬脾胃，與肝相關(guān)，甚則累及心、腎，病機(jī)不外乎熱結(jié)、氣滯、寒凝、氣血陰陽(yáng)虧虛引起的腸道傳導(dǎo)失司[9]，正合《蘭室秘藏·結(jié)燥論》曰:“若饑飽失節(jié)，勞逸過(guò)度，損傷胃氣，及含辛熱厚味之物，伏于血中，耗散真陰，津液虧少，故大便燥結(jié)?！敝委煻嘁皂槡鈱?dǎo)滯、通腑泄熱、溫通寒積、補(bǔ)益虛損、潤(rùn)腸通便，臨床癥狀可緩，但難以根治，間斷復(fù)發(fā)。對(duì)此，導(dǎo)師楊倩教授結(jié)合“濁毒理論”，著眼于當(dāng)今人們生活節(jié)奏加快，社會(huì)壓力增大，多食肥膩、辛辣、煎炸，食品不安全等現(xiàn)狀，認(rèn)為其病損傷脾胃，且使身心俱疲，情志不舒，木郁克土，致脾胃失健，氣機(jī)失宣，水濕不運(yùn)，若內(nèi)停中焦，蘊(yùn)久成濁，濁邪凝滯氣機(jī)，致腸腑不通，郁而化熱，熱甚釀毒，壅滯腸腑，灼傷津液，致大腸傳導(dǎo)失司，糟粕內(nèi)停，濁毒滯留不去，使病程纏綿反復(fù)，日久變生他證。因此，提出“濁毒內(nèi)蘊(yùn)，腑氣不通”是本病反復(fù)發(fā)作、難以治愈的關(guān)鍵[10]，自擬通腑降濁方，創(chuàng)立通腑降濁法治療本病，見(jiàn)效靈驗(yàn)。但由于機(jī)理不明，使其應(yīng)用受限，因此，我們開(kāi)展此次實(shí)驗(yàn)研究，以求探索。

肝郁、氣滯貫穿本病，往往招致郁怒，脅、腹痛、脹，本研究以柴胡、八月札、白芍疏肝理氣、柔肝止痛。柴胡疏肝理氣，解郁化濁，性善調(diào)達(dá)肝氣，為治療肝氣郁結(jié)之要藥；如《神農(nóng)本草經(jīng)》曰:“主心腹腸胃中結(jié)氣，……推陳致新；”現(xiàn)代藥理研究表明，其可抗炎、鎮(zhèn)痛、提高免疫力[11]。八月札疏肝理氣，健脾利胃止痛，《本草拾遺》曰:“利大小便，宣通……食之令人心寬……下氣；”現(xiàn)代藥理研究表明，其可抗炎、抗腫瘤、抗血栓[11]。白芍柔肝止痛，養(yǎng)血斂陰，肝體陰而用陽(yáng)，本品酸斂肝陰，常配伍柴胡，養(yǎng)肝體，疏肝用，《滇南本草》言:“收肝氣逆疼，調(diào)養(yǎng)心肝脾經(jīng)血，舒經(jīng)降氣，止肝氣疼痛”；現(xiàn)代藥理研究表明，其可鎮(zhèn)痛、解痙、抗炎[11]。方選枳實(shí)、檳榔消積導(dǎo)滯，通腑降濁止痛。枳實(shí)可破氣除痞，行滯止痛，《藥品化義》曰:“主中脘以治血分，療臍腹間實(shí)滿，消痰癖，祛停水，逐宿食，破結(jié)胸，通便閉”；現(xiàn)代藥理研究表明，其可緩解小腸痙攣、增加胃腸收縮節(jié)律[11]。檳榔善行胃腸之氣，治療食積氣滯，腹脹便秘等證，現(xiàn)代藥理研究表明，其確可增加腸蠕動(dòng)[11]。方選火麻仁、羅漢果通腑降濁，潤(rùn)腸通便?！端幤坊x》言:“麻仁，能潤(rùn)腸，體潤(rùn)能去燥，專利大腸氣結(jié)便秘；”現(xiàn)代藥理研究表明，其可刺激腸壁，促進(jìn)腸道蠕動(dòng)[11]。二者配伍枳實(shí)、檳榔行氣導(dǎo)滯增通便之功。此外，方用黃連、飛揚(yáng)草、冬葵子清熱燥濕，化濁解毒，抗菌消炎，改善腸道菌群[11-12]；茯苓、甘草健脾益氣和中，加干姜溫中散寒，使?jié)崛崆澹珶o(wú)礙脾胃，無(wú)過(guò)寒涼。

腸道菌群是一個(gè)復(fù)雜而龐大的微生態(tài)系統(tǒng)，可參與宿主的生理、生化、病理、藥理及其他各方面的生理及結(jié)構(gòu)的發(fā)生、發(fā)育和衰退的全過(guò)程。數(shù)量龐大的腸道菌與宿主間相互依存、相互作用，構(gòu)成微生態(tài)平衡，維持機(jī)體健康。當(dāng)外界環(huán)境改變，微生態(tài)平衡被破壞，從而引發(fā)各種疾病[13]，IBS 即為其中之一。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通腑降濁方、西沙比利、益生元均能緩解大鼠便秘，但通腑降濁方及益生元效果更好。IBS-C 大鼠腸道確無(wú)器質(zhì)性病變，但菌群紊亂，菌種豐富度下降，且多樣性未變，無(wú)明顯致病菌滋生，口服通腑降濁方及西沙比利、益生元均能調(diào)整紊亂的腸道菌群，但調(diào)控效果不盡相同，且不同劑量通腑降濁方作用不同。通腑降濁方高劑量組與益生元組調(diào)控作用最接近，其結(jié)果也更接近于正常組。提示上述3種藥物均可通過(guò)調(diào)整患者紊亂的腸道菌群發(fā)揮對(duì)IBS-C 的治療作用，通腑降濁方效果最好。而通腑降濁方劑量的選擇對(duì)通腑降濁方的治療效果有重要的影響。通腑降濁方療效仍與正常大鼠保留顯著差異，尚需開(kāi)展更標(biāo)準(zhǔn)用藥劑量、更大樣本、長(zhǎng)療程的臨床和實(shí)驗(yàn)研究探討更精準(zhǔn)的治療方案。