李華娟 陸素君

摘 要：研究基本培養(yǎng)基MS、1/2MS、改良MS與不同濃度水平的6BA、NAA、馬鈴薯等方面對(duì)金線蓮芽的增殖、長(zhǎng)勢(shì)方面產(chǎn)生的影響。在生根方面則主要是研究基本培養(yǎng)1/4MS、1/10MS、1/4改良MS以及添加物馬鈴薯對(duì)金線蓮組培生根的方面影響。結(jié)果表明，金線蓮增殖的最佳培養(yǎng)基為改良MS+6BA3.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+200 g/L馬鈴薯，最佳生根培養(yǎng)基組合為1/4改良MS+NAA0.5 mg/L+馬鈴薯200 g/L。

關(guān)鍵詞：金線蓮;增殖;生根

中圖分類號(hào)：S567.23 ??文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ??文章編號(hào)：1004-3020（2020）01-0022-03

Abstract：Effects of combination of basal medium （MS，1/2MS and modified MS） and different concentration of 6-BA，NAA and potato on the bourgeoning and growth vigor of Anoectochilus roxburghii（Wall.） Lindl while impacts of combination of medium （1/4MS，1/10MS and 1/4modifiedMS） and adding potato on the rooting of this plant were studied.Results showed that medium of “modifiedMS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+potato200 g/L” was the best on bud proliferation while medium of “1/4modifiedMS+NAA0.5 mg/L+potato 200 g/L” was the most excellent on rooting.

Key words：Anoectochilus roxburghii;proliferation take root

金線蓮Anoectochilus roxburghii是一種蘭科多年生藥用草本植物，多生長(zhǎng)于海拔500～1 600 m的陰濕森林或竹林內(nèi)[1]，素有“烏人參”美稱，該植物有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、強(qiáng)心利尿、降血壓等功效，其提取物還有治療乳腺癌的作用[2]，具有廣闊的開(kāi)發(fā)利用前景[3]，但由于其自然繁殖率極低，生長(zhǎng)極為緩慢，加上近年來(lái)的大量采集，金線蓮資源日趨枯竭[4]。而采用組織培養(yǎng)手段對(duì)金線蓮進(jìn)行短期快速繁殖，建立一套快繁體系，對(duì)該藥材的深入研究具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

金線蓮無(wú)菌初代瓶苗。

1.2 方法

1.2.1 芽的增殖

以MS、1/2MS、改良MS為基本培養(yǎng)基（改良MS對(duì)大量元素進(jìn)行修改即KNO3 2 140 mg/L，NH4NO3 1 000 mg/L，其它成份與MS同），附加不同濃度的6-BA，NAA、馬鈴薯，采用正交表（L934）對(duì)不同組合處理試驗(yàn)，3次重復(fù)，每處理接種10瓶，每瓶10個(gè)莖段，為避免因莖段部位不同而產(chǎn)生差異，本試驗(yàn)均采用中部莖段，每10天觀察一次，50天后記錄芽的增殖情況，長(zhǎng)勢(shì)等。試驗(yàn)安排見(jiàn)表1。

1.2.2 試管苗生根

以1/4MS、1/10MS、1/4改良MS為基本培養(yǎng)基，附加濃度分別為0.5、1.0、1.5 mg/L的NAA，添加物為馬鈴薯，其濃度分別為0、100、200 g/L，碳粉0.5 g/L，三個(gè)重復(fù)，每處理接種10瓶，每瓶接種10株長(zhǎng)約2.5 cm、有兩個(gè)節(jié)點(diǎn)且生長(zhǎng)健壯的芽條。每10 d觀察一次，60 d后記錄苗的出根情況、根條數(shù)、根長(zhǎng)等。試驗(yàn)安排見(jiàn)表2。

1.3 其他培養(yǎng)條件

蔗糖30 g/L，瓊脂粉5.5 g/L，pH值5.8，培養(yǎng)溫度（25±1）℃，繼代增殖階段培養(yǎng)即800 Lx，生根階段1 200～1 500 Lx。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)基、激素水平及馬鈴薯的添加對(duì)金線蓮繼代增殖的影響 ??由表3、表4可知，不同處理間在芽的增殖系數(shù)、芽生長(zhǎng)狀況方面是有差異性的，而在芽的增殖方面增殖系數(shù)是評(píng)定增殖優(yōu)劣的主要指標(biāo)。在本次試驗(yàn)中對(duì)各因子之間進(jìn)行k值比較分析中發(fā)現(xiàn)，在不同培養(yǎng)基中以改良MS、6-BA濃度為3.0 m/L、NAA0.5 mg/L和馬鈴薯200 g/L的k值最大，是最佳理論組合。并且從芽的長(zhǎng)勢(shì)來(lái)看，基本培養(yǎng)基1/2MS芽在粗壯程度、高生長(zhǎng)、整齊度上是最差的，MS次之，最佳的是經(jīng)過(guò)改良的MS，芽粗壯、較其他兩組都高且出芽整齊。進(jìn)一步進(jìn)行方差分析，由表4可知，四個(gè)因素中6-BA對(duì)增殖的影響達(dá)到極顯著水平，說(shuō)明金線蓮對(duì)不同濃度的6-BA的誘導(dǎo)極其敏感，且6-BA濃度越高，越易在莖段節(jié)點(diǎn)處形成叢生芽點(diǎn)，而在6-BA濃度為0.5的基本無(wú)叢生芽點(diǎn);而基本培養(yǎng)基對(duì)增殖系數(shù)的影響則達(dá)到顯著水平，NAA、馬鈴薯則影響不顯著，說(shuō)明影響金線蓮增殖主要因素在于6-BA的濃度，其次是基本培養(yǎng)基成分。從k值來(lái)看，金線蓮的最佳增殖配方為改良MS+6BA3.0 m/L+NAA0.5 mg/L+馬鈴薯200 g/L。

2.2 基本培養(yǎng)基、不同激素水平、馬鈴薯的添加對(duì)金線蓮生根產(chǎn)生的影響 ??由表5可知，不同處理對(duì)金線蓮的生根率、根條數(shù)、根長(zhǎng)方面影響是不同的，現(xiàn)在對(duì)生根的主要指標(biāo)生根率的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差及極差分析，從k值大小來(lái)看，金線蓮生根產(chǎn)生最大影響的是馬鈴薯，其次是基本培養(yǎng)基，而NAA對(duì)其生根產(chǎn)生的影響相對(duì)較小，并且培養(yǎng)基以1/4改良MS最好，NAA則以1.0 mg/L、馬鈴薯以200 g/L為最佳。進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行方差檢驗(yàn)可以看出，馬鈴薯對(duì)其生根的影響是極顯著的，培養(yǎng)基則對(duì)其生根的影響顯著，NAA對(duì)生根的影響不顯著。在添加了馬鈴薯的培養(yǎng)基中，均有良好的生根體現(xiàn)。在無(wú)馬鈴薯的培養(yǎng)基里，生根則受到顯著影響，根短且生根不齊，有的只在切口處形成根點(diǎn)而無(wú)法形成有效根。從試管苗的長(zhǎng)勢(shì)來(lái)觀察，則1/4改良MS則表現(xiàn)在苗木生長(zhǎng)更加粗壯，根系更加發(fā)達(dá)，因此1/4改良MS+NAA1.0 mg/L+馬鈴薯200 g/L最佳的生根培養(yǎng)基組合。

3 結(jié)果討論

（1）在金線蓮繼代增殖中，最適宜的培養(yǎng)基為改良MS+6BA3.0 m/L+NAA0.5 mg/L+馬鈴薯200 g/L，其芽萌發(fā)快且粗壯、增殖倍數(shù)高，生長(zhǎng)速度快，苗相整齊，可達(dá)到快速育苗要求。

（2）在生根培養(yǎng)中，對(duì)基本培養(yǎng)基要求不高，三種培養(yǎng)基均可誘導(dǎo)出生根，其最佳的生根配方為1/4改良MS+NAA1.0 mg/L+馬鈴薯200 g/L能達(dá)到很好的生根效果。

（3）在對(duì)金線蓮的培養(yǎng)過(guò)程中，無(wú)論是在繼代增殖方面，還是在生根方面，均表現(xiàn)出對(duì)馬鈴薯的依賴，如在增殖中，缺少馬鈴薯的則表現(xiàn)為植株矮小，株干細(xì)弱，在生根方面則更加明顯，除了長(zhǎng)勢(shì)弱，根系短、苗木長(zhǎng)勢(shì)不齊，與添加了馬鈴薯在長(zhǎng)勢(shì)上是無(wú)法比擬的。

參 考 文 獻(xiàn)

[1]中國(guó)科學(xué)院植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志（第七卷）[M].北京：科學(xué)出版社，2000：225-226.

[2]邱運(yùn)亮，段鵬慧，趙華.植物組培快繁技術(shù).北京[M]：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：152.

[3]王小菁，陳剛，李明軍，等.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在植物組織培養(yǎng)中的應(yīng)用[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：102-103.

[4]李介元.臺(tái)灣金線蓮[J].臺(tái)灣農(nóng)業(yè)探索.2001（2）：42.

（責(zé)任編輯：唐 嵐）