楊銳 李玲玲 李婷 叢海建 姜鋒

摘 要 目的：優(yōu)化阿齊沙坦片體外溶出條件，為該品種的仿制藥一致性評價工作提供基礎。方法：采用中國藥典2015年版四部0931第二法（槳法），pH 1.0（含0.03% SDS）、pH 4.5（含0.4% SDS）、pH 6.8、水（含0.2% SDS）為溶出介質，轉速為50 r/min，HPLC 法測定溶出曲線。結果：阿齊沙坦在4種溶出介質中專屬性良好，平均回收率分別為99.01%（RSD 1.31%）、99.57%（RSD 1.04%）、99.87%（RSD 1.62%）、101.67%（RSD 1.53%）。結論：建立的溶出曲線測定方法準確、可靠，可為阿齊沙坦片的仿制藥體外溶出評價提供參考。

關鍵詞 阿齊沙坦片 溶出曲線 體外溶出

中圖分類號：R972.4； R917 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2020）07-0065-06

Study on in vitro dissolution method of azilsartan tablets

YANG Rui*， LI Lingling， LI Ting， CONG Haijian， JIANG Feng**

（Shanghai Haini Pharmaceutical Co.， Ltd.， Yangtze River Pharmaceutical Group， Shanghai 201318， China）

ABSTRACT Objective： To optimize the in vitro dissolution conditions of azilsartan tablets and provide experimental basis for generic drugs quality consistency evaluation. Methods： According to the second dissolution method （paddle method） stated in 0931 of Chinese Pharmacopeia （2015 Edition）， the dissolution of azilsartan in different media （pH 1.0， containing 0.03% SDS； pH 4.5， containing 0.4% SDS； pH 6.8； water， containing 0.2% SDS） with rotation of 50 rpm was determined by HPLC. Results： Azilsartan tablets had good specificity in the four kinds of dissolution media and their average recoveries were 99.01% （RSD 1.31%）， 99.57% （RSD 1.04%）， 98.77% （RSD 1.62%） and 101.67% （RSD 1.53%）， respectively. Conclusion： The established method for the determination of azilsartan dissolution is accurate and reliable and can provide a reference for in vitro dissolution evaluation of azilsartan tablets.

KEy WORDS azilsartan tablet； dissolution profile； in vitro dissolution

阿齊沙坦是新一代選擇性AT1亞型血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARBs）類抗高血壓藥，與血管緊張素轉化酶抑制劑類抗高血壓藥比，具有不會引起干咳、平穩(wěn)降壓的優(yōu)點。2012年1月，日本武田藥品工業(yè)株式會社開發(fā)的阿齊沙坦片（商品名：Azilva）在日本獲批上市[1]；2011年2月25日美國FDA也批準其前藥阿齊沙坦酯片（商品名：Edarbi）用于治療成人高血壓；2014年日本MHLW研究證明阿齊沙坦片單獨或聯(lián)合用藥均具有平穩(wěn)持久降血壓作用，而且還能通過部分激活過氧化物酶體增殖物激活受體γ而對糖尿病患者產(chǎn)生潛在的保護作用。臨床研究顯示，阿齊沙坦較奧美沙坦與坎地沙坦降壓作用更強，更持久，降壓效果更穩(wěn)定。目前，阿齊沙坦片尚未在中國上市。

藥物溶出速率決定其在體內(nèi)的吸收和利用程度，提高溶出速度和程度是改善其生物利用度的有效途徑，進而提高藥物的療效[1-2]。阿齊沙坦為難溶性藥物，屬于Biopharmaceutics Classification System（BCS）Ⅱ類藥物，其原研片在pH 1.0鹽酸溶液、水、pH 4.5醋酸鹽緩沖液中不能完全溶出，而在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中溶出速度較快，若以pH 6.8磷酸鹽緩沖液作為溶出介質與原研片進行溶出曲線比較，勢必缺乏較好的曲分力[3]。本研究通過測定阿齊沙坦原料藥在不同溶出介質中的飽和溶解度，利用原研片完成提高該藥溶出度條件的初步篩選與優(yōu)化，并驗證了溶出曲線測定方法，取得具有區(qū)分力的溶出曲線，從而可在研發(fā)階段更好地評價阿齊沙坦片的體外溶出行為。

1 材料和方法

1.1 試藥

阿齊沙坦原料藥（批號16033101-1）、阿齊沙坦對照品（批號16052401，純度99.71%）和阿齊沙坦自制片（批號：17020703）均來自揚子江藥業(yè)集團上海海尼藥業(yè)有限公司；阿齊沙坦原研片（日本武田制藥，批號AH332、AH382，規(guī)格20 mg）。

1.2 試劑

十二烷基硫酸鈉（SDS，批號20160110，分析純，天津科密歐化學試劑有限公司）；磷酸（批號150310，色譜純，F(xiàn)isher公司）；甲醇（批號I830907617，色譜純，Merck公司）；其他化學試劑均為市售分析純。

1.3 儀器

1260高效液相色譜儀（Agilent公司）；U3000高效液相色譜儀（Thermo公司）；AB204-S電子天平（Mettler Toledo公司）；THZ-82水浴恒溫振蕩器（金壇市杰瑞爾電器有限公司）；RC807D溶出儀（天大天發(fā)公司）。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Welch Ultimate XB-C18，4.6 mm×250 mm，5 mm），以0.5%磷酸水溶液-甲醇（30∶70）為流動相，檢測波長為251 nm，柱溫為30 ℃，流速為1.2 ml/min，進樣體積為10 μl；理論板數(shù)按阿齊沙坦峰計算，應不低于3 500。

1.4.2 pH-溶解度曲線測定

取阿齊沙坦原料藥50～70 mg，置8支具塞西林瓶中，分別精密移取pH 1.0、3.8、4.5、5.5、6.0、6.8、7.6、8.0的鹽酸溶液及緩沖鹽溶液[4]10 ml，平行兩份，置37 ℃水浴中振蕩過夜，使之形成過飽和溶液，濾過，取續(xù)濾液經(jīng)HPLC法測定。

1.4.3 阿齊沙坦在不同溶出介質中的飽和溶解度測定

取阿齊沙坦原料藥50～70 mg，置具塞西林瓶中，分別精密移取不同SDS濃度的pH 1.0鹽酸溶液、水、pH 4.5醋酸鹽緩沖液各10 ml，平行三份，置37 ℃水浴振蕩24 h，使之形成過飽和溶液，靜置，精密移取上清液1 ml于具塞試管中，精密加入70%甲醇溶液8 ml，搖勻，即得供試品溶液，經(jīng)HPLC法測定。

1.4.4 阿齊沙坦片溶出曲線優(yōu)化

分別取不同SDS濃度的pH 1.0鹽酸溶液、水、pH 4.5醋酸鹽緩沖液各900 ml，置溶出杯中，溫度為37 ℃，槳法，轉速為50 r/min；平行測定阿齊沙坦原研片6片，分別于5、10、15、30、45、60 min各時間點取溶液8 ml，不補液，用0.45 mm的濾膜過濾，棄去5 ml，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密稱取阿齊沙坦對照品約19 mg，置20 ml量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密量取1 ml，置50 ml量瓶中，加溶出介質稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。然后，進行HPLC法測定，并計算累積溶出度。

1.4.5 阿齊沙坦片溶出曲線方法的建立

1）供試品溶液制備 取阿齊沙坦片，照溶出度測定法（《中國藥典》2015年版四部通則0931第二法槳法）測定，分別取含0.03% SDS的pH 1.0鹽酸溶液（簡稱pH 1.0）、含0.4% SDS的pH 4.5醋酸鹽緩沖液（簡稱pH 4.5）、pH 6.8磷酸鹽緩沖液（簡稱pH 6.8）、含0.2% SDS水（水）為溶出介質，介質體積900 ml，轉速50 r/min，溫度（37±0.5）℃，分別于5、10、15、30、45、60 min取溶液8 ml，不補液，用0.45 mm的濾膜過濾，棄去5 ml，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2）對照品溶液的制備 取阿齊沙坦對照品約19 mg，精密稱定，置20 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密量取1 ml，置50 ml量瓶中，加各溶出介質稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

1.4.6 方法學研究

1）專屬性 取阿齊沙坦片空白輔料、阿齊沙坦自制片及阿齊沙坦對照品，制備供試品和對照品溶液。分別精密量取上述各溶液10 μl，進行色譜分析。

2）濾膜吸附 分別于15 min（pH 6.8磷酸鹽緩沖液）、30 min（含0.2% SDS的純化水、含0.03%SDS的pH 1.0鹽酸溶液）、45 min（含0.4%SDS的pH 4.5醋酸鹽緩沖液）時，取各溶出介質溶出液各10 ml，離心，取上清液作為供試品控制溶液；另取上述各溶出介質溶出液10 ml，經(jīng)濾膜濾過，取初濾液及分別棄去初濾液0、2、4、5、6 ml后取續(xù)濾液，作為供試品溶液。分別精密量取上述各溶液10 μl，進行色譜分析。

3）準確度 按照溶出度（以85%計）的40%、100%、120%設計回收率試驗。精密稱取阿齊沙坦對照品制備成對照品溶液；按處方比例稱取空白輔料9份，分別加入上述對照品溶液2、5、6 ml，各制備3份，用相應溶出介質稀釋至刻度，搖勻，分別于（37±0.5）℃下振搖30 min后取樣，過濾（棄去初濾液5 ml），取續(xù)濾液作為供試品溶液。然后進行色譜分析。

4）溶液穩(wěn)定性 將對照品溶液和供試品溶液分別在常溫密封條件下放置0、1、2、4、6、8、10、12、18、24、30、36、38 h。分別取樣進行色譜分析。

2 結果

2.1 阿齊沙坦溶解度與阿齊沙坦原研片溶出曲線

阿齊沙坦在酸性pH條件下難溶，而在堿性pH條件下有較高的溶解度（圖1）；不同溶出介質中加入適宜濃度的SDS可增加其溶解度（表1）；經(jīng)對在不同溶出介質中具有區(qū)分力的表面活性劑濃度的篩選和優(yōu)化[3]，得到阿齊沙坦原研片在30～45 min時的累積溶出度≥85%，達到溶出平臺（圖2）。

2.2 方法學研究

2.2.1 專屬性

阿齊沙坦在各介質溶液中的分離度均遠大于1.5，達到完全分離（圖3）。四種溶出介質和空白輔料對本品溶出度測定沒有干擾，表明其在該色譜條件下的專屬性良好。

2.2.2 濾膜吸附

供試品溶液均能保證濾膜吸附率小于1.0%（回收率大于99.0%）（表2）。

2.2.3 準確度

阿齊沙坦在pH 1.0鹽酸溶液（含0.03% SDS）、pH 4.5醋酸鹽緩沖液（含0.4% SDS）、pH 6.8磷酸鹽緩沖液、水（含0.2% SDS）中的平均回收分別為99.01%、99.57%、99.87%、101.67%，RSD（n=9）依次為1.31%、 1.04%、1.62%、1.53%，表明阿齊沙坦在四種溶出介質中回收率良好。

2.2.4 溶液穩(wěn)定性

在溶液穩(wěn)定時間范圍內(nèi)，不同時間點供試品溶液和對照品溶液峰面積與0時相應溶液峰面積對比在98%～102%范圍內(nèi)。在pH 1.0和pH 4.5介質中樣品穩(wěn)定時間為12 h、而在pH 6.8介質和水介質中穩(wěn)定時間可達到38 h（表3）。

2.3 原研片溶出曲線測定

原研片在四種溶出介質中的平均溶出曲線見圖4（n=12），表明在我們建立的溶出條件下原研片在30～45 min時的累積溶出度均可達85%以上，符合有關規(guī)定。

2.4 阿齊沙坦自制片與原研片體外溶出對比

利用以上篩選的溶出條件進行自制片與原研片的體外溶出研究，自制片與原研片在4種不同介質中的溶出曲線相似（圖5），體外溶出一致（f2>50）。

3 討論

國內(nèi)相關文獻主要針對阿齊沙坦片溶出度進行了相關研究。如朱亞東等[5]和李瑛等[6]對阿齊沙坦片溶出度方法學進行研究，但未對提高溶出度進行方法研究；唐了平等[7]對比自制制劑與原研制劑體外溶出行為，但比較的僅為常規(guī)的pH 1.0、pH 4.5、pH 6.8和水等溶出介質，且除pH 6.8外，阿齊沙坦片在其他溶出介質中的最終累積溶出度最高僅為35.8%，溶出很少，這在研發(fā)階段不利于評價自制制劑與原研制劑的體外溶出是否一致，對于處方工藝的篩選無指導價值；郭永斌[8]的研究雖然闡述了溶出曲線用于研究的重要性，但未對各個溶出介質的條件進行優(yōu)化。本研究通過對阿齊沙坦片體外溶出條件的優(yōu)化，篩選出具有區(qū)分力的溶出條件，從而能更好地指導自制制劑的研發(fā)。

阿齊沙坦為難溶性藥物，阿齊沙坦片體外溶出方法的建立難點在于表面活性劑種類的選擇。通過篩選阿齊沙坦片溶出介質中表面活性劑SDS的加入量，最終確定在水、pH 1.0鹽酸溶液及pH 4.5醋酸鹽緩沖液中的加入濃度分別為0.2%（w/v）、0.03%（w/v）、0.4%（w/v），可使阿齊沙坦片在30～45 min的累積溶出度達85%以上，從而獲得具有區(qū)分力的溶出條件[3]，更有利于評價阿齊沙坦片的溶出行為是否與原研制劑一致。

溶出曲線既是評價口服固體制劑仿制藥體外一致性的主要技術手段，也對保證藥品批間質量的一致性起著重要作用，本研究對阿齊沙坦片仿制藥質量一致性評價工作起到了一定的推進作用。

參考文獻

[1] 武田藥品工業(yè)株式會社. 藥物組合物： 中國200780037942.5[P]. 2009-09-09.

[2] 鄭忠輝， 張代銘， 吳輝， 等. 阿齊沙坦的合成工藝研究[J].化工時刊， 2015， 29（8）： 10-13.

[3] 謝沐風. 具有區(qū)分力的溶出曲線[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志， 2014， 45（7）： 687-689.

[4] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典2015年版四部[M]. 北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2015： 通則8004.

[5] 朱亞東， 黃柳. 阿齊沙坦片溶出度方法學研究[J]. 化工設計通訊， 2018， 44（8）： 197-199.

[6] 李瑛， 張騰， 戴根來. HPLC法測定阿齊沙坦片的溶出度[J]. 安徽醫(yī)藥， 2015， 19（10）： 1887-1888.

[7] 唐了平， 產(chǎn)運霞， 馬貴紅， 等. 阿齊沙坦片國產(chǎn)品溶出度試驗方法的建立及與原研品體外溶出行為比較[J]. 中國藥房， 2014， 25（17）： 1609-1611.

[8] 郭永斌. 阿齊沙坦片的制備及質量研究[D]. 石家莊： 河北醫(yī)科大學， 2016.