中華鱉是我國重要名特優(yōu)水產(chǎn)養(yǎng)殖品種之一，全國中華鱉年產(chǎn)量約30 萬噸，其中浙江省中華鱉養(yǎng)殖年產(chǎn)量約占全國總產(chǎn)量的一半，產(chǎn)值達(dá)60 億元以上。近年來，由于環(huán)境、飼料、養(yǎng)殖管理等因素導(dǎo)致的中華鱉病害不斷，是影響產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的重要原因。2019年4月，杭州市一養(yǎng)殖場暴發(fā)中華鱉病害，經(jīng)技術(shù)人員現(xiàn)場檢查、病原分離鑒定、藥物敏感性試驗(yàn)，指導(dǎo)養(yǎng)殖戶對癥用藥，有效控制了病害的繼續(xù)發(fā)展。現(xiàn)將有關(guān)診斷及治療情況總結(jié)如下，供從業(yè)者參考。

一、診斷

發(fā)病養(yǎng)殖池每天死亡中華鱉30～40 只，患病中華鱉體表無明顯癥狀，但活力減弱，解剖可見肝腫大充血、脾臟充血、腸道出血嚴(yán)重。剪開腸道，在胃與腸道交接處出現(xiàn)明顯的一條環(huán)狀出血點(diǎn)(圖1)，發(fā)病嚴(yán)重的中華鱉在此形成環(huán)狀失血帶并以其為起點(diǎn)，點(diǎn)狀出血現(xiàn)象由密轉(zhuǎn)稀逐漸向腸道末端蔓延。

圖1 發(fā)病中華鱉消化道出血癥狀

二、病原分離與鑒定

在無菌條件下取典型癥狀患病中華鱉的肝、脾、腎及胃腸交接處接種到普通營養(yǎng)瓊脂，28℃條件下培養(yǎng)24 小時后觀察細(xì)菌生長情況。接種患病中華鱉肝、脾及胃腸交接處的平皿上均長出淡黃色、邊緣光滑、直徑2毫米左右的菌落。挑取單菌落作革蘭氏染色，顯微鏡下觀察為革蘭氏陰性短桿菌。應(yīng)用生物梅里埃公司的ATB ID 32E 腸桿菌科半自動鑒定系統(tǒng)，對獲得的細(xì)菌進(jìn)行生化鑒定：用接種針將培養(yǎng)的細(xì)菌轉(zhuǎn)移至0.85%氯化鈉溶液制成0.5 麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙海贏TB ID 32E 細(xì)菌半自動鑒定條上，每個測試孔加入55 微升，在相應(yīng)孔滴入無菌石蠟油，28℃培養(yǎng)18 小時，利用半自動鑒定儀讀取結(jié)果見表1，初步鑒定為溫和氣單胞菌。根據(jù)臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌培養(yǎng)鑒定，初步判定此病例為細(xì)菌感染引起的中華鱉出現(xiàn)持續(xù)性緩慢死亡。

表1 細(xì)菌生化鑒定結(jié)果

三、細(xì)菌最小抑菌濃度測定

選取14 種抗菌藥物用于測試。將選用的抗菌藥物溶解配置成抗菌藥溶液，新鮮培養(yǎng)的細(xì)菌用0.85%氯化鈉溶液制成0.5 麥?zhǔn)蠞岫鹊膽揖?，?0 微升，加入19.96 毫升0.85%氯化鈉溶液制成測試菌液。將抗菌藥溶液和測試菌液依次加入測試孔，使測試孔抗菌藥最終濃度依次為0.125、0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64、128、256、512 毫克/升，每孔菌液最終濃度為6×106個/毫升。28℃培養(yǎng)18 小時，測試孔內(nèi)未見懸濁的視為該孔抗菌液濃度為最小抑菌濃度。測試結(jié)果見表2。

四、治療

根據(jù)藥敏結(jié)果，使用硫酸新霉素進(jìn)行治療，每千克體重用50 毫克水產(chǎn)用硫酸新霉素拌飼投喂，每天2次，連用7天，及時做好病死中華鱉的撈出和無害化處理。施藥后第3 天中華鱉死亡減少，至第5天死亡現(xiàn)象停止，當(dāng)年未出現(xiàn)該病的復(fù)發(fā)情況。2020年4月，該養(yǎng)殖場又出現(xiàn)同樣癥狀的中華鱉，在第一時間使用上述方案進(jìn)行控制，至用藥第3天即有效控制了病害的蔓延。

表2 細(xì)菌最小抑菌濃度測定結(jié)果

五、分析

近年中華鱉養(yǎng)殖的細(xì)菌性病害逐漸增多，導(dǎo)致抗菌藥物使用的增加，細(xì)菌性病原的抗藥性增強(qiáng)。反映到本病例上，病原菌對甲砜霉素、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲唑、磺胺嘧啶、紅霉素、氨芐青霉素等均不敏感，這是當(dāng)前中華鱉養(yǎng)殖過程中出現(xiàn)的常態(tài)。本病例選用了相對敏感的硫酸新霉素而不是最敏感的恩諾沙星，也是為了保留當(dāng)?shù)刂腥A鱉在對抗細(xì)菌性病害中的可使用藥物種類。