蒙建鳳

【摘 ?要】目的：探究血漿CRABP2與非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲的相關(guān)性研究。方法：本研究首先將siRNA以及CRABP2質(zhì)粒進(jìn)行構(gòu)建以及轉(zhuǎn)染，隨機(jī)將培養(yǎng)皿分組，共計(jì)180個(gè)，分為三組，每組各60個(gè)。分析血漿CRABP2在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果：血漿CRABP2高水平表達(dá)可加速癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，血漿CRABP2與癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲相關(guān)性強(qiáng)。結(jié)論：血漿CRABP2水平很可能是非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞侵襲性的指標(biāo)，可作為非小細(xì)胞肺癌新的診斷和預(yù)后標(biāo)志物。

【關(guān)鍵詞】細(xì)胞視黃酸結(jié)合蛋白2;非小細(xì)胞肺癌;增殖;遷移;侵襲

【中圖分類號(hào)】R45??????【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A??????【文章編號(hào)】1672-3783（2020）03-0092-01

肺癌是全世界與癌癥相關(guān)的死亡最常見(jiàn)的原因。只有18%的肺癌患者在確診后存活5年或更長(zhǎng)時(shí)間。早期診斷對(duì)降低肺癌死亡率具有重要意義。近年來(lái)，低劑量計(jì)算機(jī)斷層掃描（LDCT）被引入肺癌的早期診斷。然而，除了LDCT外，我們還可以使用各種方法檢測(cè)肺癌，而使用血樣是最簡(jiǎn)便的方法之一。有研究報(bào)道顯示，肺癌組織中一種新的遺傳標(biāo)記物細(xì)胞維甲酸結(jié)合蛋白2（CRABP2）的鑒定可有效診斷非小細(xì)胞肺癌。本研究探究血漿CRABP2與非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲的相關(guān)性研究，具體如下：

1 一般資料和方法

1.1 一般資料

研究所需的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549細(xì)胞購(gòu)買于上海研域生物科技有限公司，并將該細(xì)胞株作解凍、擴(kuò)增，觀測(cè)其生長(zhǎng)狀況，隨后再進(jìn)行細(xì)胞株培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇。

1.2 方法

（1）本研究首先將siRNA以及CRABP2質(zhì)粒進(jìn)行構(gòu)建以及轉(zhuǎn)染，隨機(jī)將培養(yǎng)皿分組，共計(jì)180個(gè)，分為三組，每組各60個(gè)。分別命名為A、B、C三組，A組是CRABP2質(zhì)粒組;B組是-CRABP2 siRNA轉(zhuǎn)染組，剩余的C組是空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組。

（2）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基，將非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株放置于培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)。

（3）隨后，需檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，采取的方法是MTT法;檢測(cè)CRABP2基因表達(dá)情況，采取的方法是RT-PCR法;檢測(cè)CRABP2/MMP9蛋白表達(dá)情況采取Western blot法。

（4）分別采用Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)法、細(xì)胞劃痕法分析CRABP2轉(zhuǎn)染前后對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549侵襲、遷移的影響。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)軟件SPSS 22.0系統(tǒng)對(duì)本研究數(shù)據(jù)作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料（均數(shù)±方差）采取T值檢驗(yàn)（獨(dú)立樣本）;計(jì)數(shù)資料（%）應(yīng)用卡方檢驗(yàn)。P<0.05，表示數(shù)據(jù)存有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

分析顯示在非小細(xì)胞肺癌中CRABP2的表達(dá)顯著上調(diào)，且高表達(dá)CRABP2 的 95-D 細(xì)胞存在更強(qiáng)的增殖抑制反應(yīng)。表明CRABP2基因在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)增加;而在siRNA 干擾 95-D 細(xì)胞中，CRABP2 在ATRA中的表達(dá)明顯降低。

3 討論

CRABP2是一種與維甲酸相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)結(jié)合蛋白，被認(rèn)為可以調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的維甲酸信號(hào)。已鑒定出兩個(gè)亞型（CRABP1和CRABP2），它們都對(duì)配體全反式維甲酸具有高親和力。這些亞型在人類中顯示出74%的序列同源性，在物種中高度保守。CRABP1在成人中廣泛表達(dá)，而CRABP2只在皮膚、子宮、卵巢和脈絡(luò)叢中表達(dá)。CRABP蛋白的生物學(xué)功能還不完全清楚。在小鼠基因敲除研究中，CRABP亞型的破壞與肢體發(fā)育的輕度缺陷有關(guān)。CRAPP1被發(fā)現(xiàn)作為一種被動(dòng)載體，根據(jù)濃度梯度結(jié)合并釋放其配體，而CRAPP2已知將維甲酸傳遞給維甲酸受體（RAR），并且維甲酸在CRAPP2和RAR之間的通道導(dǎo)致了全RAR形成和RAR轉(zhuǎn)錄的顯著上調(diào)。CRABP2在MCF-7乳腺癌細(xì)胞中的高表達(dá)與維甲酸誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制的敏感性顯著增強(qiáng)有關(guān)。相反，乳腺癌細(xì)胞株CRABP2表達(dá)的缺失與對(duì)維甲酸誘導(dǎo)的生長(zhǎng)停滯的抵抗有關(guān)。因此，CRABP2的表達(dá)似乎在視網(wǎng)膜酸致敏細(xì)胞中起作用。CRABP2蛋白的抗癌作用在其他腫瘤，包括星形細(xì)胞瘤和頭頸部腫瘤等等^[1～2]。

有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，癌組織中的細(xì)胞視黃酸結(jié)合蛋白2（CRABP2）信使RNA（mRNA）水平明顯高于癌旁正常肺組織，癌細(xì)胞中CRABP2的表達(dá)可被免疫組化檢測(cè)到，而正常肺細(xì)胞中無(wú)表達(dá)。CRABP2已被證明有助于維甲酸與其同源受體復(fù)合物的結(jié)合，但其在癌變中的作用尚不清楚。迄今為止，對(duì)非小細(xì)胞肺癌中CRABP2的研究很少。本研究結(jié)果顯示，血漿CRABP2高水平表達(dá)可加速癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，血漿CRABP2與癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲相關(guān)性強(qiáng)，與最新的一份報(bào)告^[3]結(jié)果相似：48例肺癌標(biāo)本中56%的CRABP2 mRNA水平與鄰近正常組織相比升高，56%的腫瘤標(biāo)本中也檢測(cè)到CRABP2蛋白表達(dá)。此外，NSCLC癌組織中RNA-Seq的表達(dá)較正常肺組織增加了4.9倍，72.1%的NSCLC組織中CRABP2的表達(dá)。

綜上所述，血漿CRABP2水平很可能是非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞侵襲性的指標(biāo)，可作為非小細(xì)胞肺癌新的診斷和預(yù)后標(biāo)志物。

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