李 球 丁 健

(1.福建醫(yī)科大學(xué)，福州 350005)(2. 福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科，福州 350005)

作用于胃腸道的藥物，不僅與胃腸道的蠕動能力有關(guān)，還與所處的腸道內(nèi)的pH值有關(guān)。只有處在合適的部位和適宜的pH才能達到最佳的藥效。有些藥物不能經(jīng)口服，一方面對胃刺激性大，另一方面易被胃酸破壞。例如：5-氨基水楊酸(5-ASA)，是誘導(dǎo)輕-中度潰瘍性結(jié)腸炎維持緩解治療的第一線藥物[1]。Cohen等[2]對病變部位主要在左半結(jié)腸的潰瘍性結(jié)腸炎患者,采用5-ASA的灌腸液、栓劑或者泡沫制劑進行灌腸給藥，發(fā)現(xiàn)與口服給藥相比，灌腸療效更佳。

在研究中，有時需通過灌腸法來驗證某種藥物對腸道疾病的療效或制備小鼠腸道疾病模型，但目前市場上并無小鼠專用的灌腸設(shè)備，加上小鼠的腸道較狹窄并較脆弱，稍有不慎易導(dǎo)致小鼠腸道損傷和梗阻。因為課題需要構(gòu)建炎癥性腸病模型，通過查閱并參考大量文獻中介紹的灌腸方法，在實驗驗證其灌腸方法的過程中，發(fā)現(xiàn)了許多問題，雖然有些具有可操作性，但效果不明顯,且致死率高。

1 傳統(tǒng)灌腸方法及缺點

1.1 傳統(tǒng)灌腸方法

①將小鼠禁食、不禁水24 h,用5%水合氯醛使小鼠輕度麻醉；

②灌腸器 戴萌[3]利用3.5F導(dǎo)管；廣布加甫等[4]先將采血針(頭皮針)用消毒過的剪刀從兩端端頭剪斷，其斷端再與一次性注射器針頭連接套住；徐德魁[5]采用套接了涂有石蠟油的小號導(dǎo)尿管(直徑1.5 mm硅膠管)的1 mL注射器；蒲榮等[6]自制灌腸器20 mm管身，尖端鈍化，外徑2 mm，內(nèi)徑1 mm，距頂端1 mm處斜行開口，管身連梯度環(huán)狀柄8 mm，末端外徑達4 mm，末端呈喇叭狀，便于與最小刻度為0.01的菌液筒相連；

③將所需灌腸液抽入灌腸器內(nèi)，排完注射器內(nèi)的空氣，用石蠟油潤滑將另一斷端表面插入小鼠肛門3～4 cm處；

④接著將藥液緩慢注入，停20 s后抽出灌腸導(dǎo)管，再將小鼠倒懸約60 s，放入盒中，王振磊和黎曙霞[7]還采用了夾閉小鼠肛門的方法防止藥液流出。

1.2 缺點

①雖然小鼠禁食24 h，但小鼠體內(nèi)仍然會有大量的糞便未排出，導(dǎo)致灌腸過程中藥物大部分被帶出,或者灌腸過程中灌腸導(dǎo)管將糞便推向腸管前端淤積在腸道，導(dǎo)致腸梗阻；②3.5F導(dǎo)管前端和頭皮針(兩端端頭剪斷)的前端均不是圓滑的，小鼠的腸壁很薄，易導(dǎo)致穿孔；③自制灌腸器制作要求比較高，實驗人員制作困難；④將小鼠倒置，小鼠腸管內(nèi)灌腸液還是會立即排泄出來，特別是刺激性藥物，藥物未發(fā)揮藥效就被排出；⑤有的灌腸藥物所需作用時間較長[8]，用手堵住，費時費力，效率慢；⑥夾閉肛門，由于小鼠肛門肌肉非常脆弱，極易造成肛門部位的機械性損傷，加之小鼠的結(jié)腸炎模型會出現(xiàn)肛門周圍不同程度的大便結(jié)痂，兩者的共同作用極易導(dǎo)致腸梗阻，進而導(dǎo)致小鼠的死亡。

2 灌腸方法的優(yōu)化及優(yōu)點

經(jīng)實驗中不斷摸索和總結(jié)，已制作出適用于小鼠灌腸的灌腸器和肛塞，該裝置用于小鼠灌腸，具有制作簡單、造價經(jīng)濟、效果明顯、致死率低等優(yōu)點，下面介紹優(yōu)化的灌腸操作步驟：

2.1 材料

1 mL一次性注射器1個、8號兒童硅膠導(dǎo)尿管1個、剪刀1把、甘露醇1瓶、細線、灌腸液、5%水合氯醛、橡皮擦1塊、小刀1把。

2.2 制作及操作步驟

①制備灌腸器：取一根8號硅膠導(dǎo)尿管，在距離導(dǎo)尿管頭約10 cm處剪斷，將斷端處套在1 mL注射器(剪掉針的)針頭處，檢查連接處是否有漏水，如圖1；

②制備肛塞：由于市場上尚無小鼠肛塞產(chǎn)品，可用小刀將橡皮擦修飾成類似人類肛塞的小鼠肛塞，橡皮擦盡可能選用硬度小的，如圖1；

③促進排便：將小鼠禁食不禁水24 h后，在準(zhǔn)備灌腸前1 h，用灌腸器吸取1 mL甘露醇對小鼠進行灌腸，促進小鼠排便；

④灌腸操作：1 h后，將小鼠用5%水合氯醛麻醉，用該灌腸器吸取灌腸液，然后用甘油潤滑前端的硅膠管，將硅膠管緩緩?fù)迫胄∈蟾亻T3～5 cm處，將藥物緩慢推入腸道，停留1 min，然后慢慢拔出硅膠管，如圖2；

⑤肛塞操作：用肛塞堵住小鼠肛門，用線將其固定在小鼠身上，30 min后拔出肛塞，如圖2。

圖1 灌腸器及肛塞的制備過程Fig.1 The preparation of enema and anal plug

圖2 小鼠灌腸操作及肛塞操作過程Fig.2 The operation procedure of enema and anal plug

2.3 優(yōu)點

①促進排便，避免小鼠因腸刺激排便，將藥物帶出，同時避免因糞便淤積導(dǎo)致腸梗阻；②用8號導(dǎo)尿管做灌腸器插管，因其前端是圓滑的，不易損傷小鼠腸道黏膜導(dǎo)致腸穿孔；③加上了肛塞，既可以防止灌腸液的漏出，又可以節(jié)約人力和時間。最重要是保證了灌腸液在腸管內(nèi)停留的時間，提高了藥效；④導(dǎo)尿管斷端剛好可以與1 mL注射器端頭連接，特別為小劑量灌腸的實驗減少藥物的浪費，并且可以很方便地監(jiān)測灌注的藥量。

3 討論

傳統(tǒng)灌腸方法雖然具有可操作性，但灌腸過程中稍有不慎便易導(dǎo)致兩種情況：藥液溢出導(dǎo)致造模不成功或灌腸器頭部不夠圓滑導(dǎo)致小鼠死亡率過高。改進的方法均采用的是一次性材料，價格便宜，從清空腸道到灌腸器光滑的硅膠前端，再到防止灌腸液漏出三方面，保證了減少灌腸器對腸壁的損傷和藥物在腸管內(nèi)發(fā)揮作用的時間，但肛塞制作方面略顯粗糙，有待進一步改進。