劉恩，高鑫，宋蕙男，徐福利，王杲強(qiáng)，單春喬,2，劉艷,2*

(1. 江蘇三儀科研質(zhì)量控制中心，江蘇 邳州 221300；2. 大連三儀生物工程研究所，遼寧 大連 116036)

目前，歐盟及中美等國已經(jīng)出臺(tái)政策在畜禽飼料中禁止或慎重添加抗生素[1]。由于抗生素在抵抗畜禽細(xì)菌感染和促進(jìn)生長方面的功效，在其被限制使用乃至禁用前曾被獸醫(yī)和畜牧從業(yè)者廣泛使用。根據(jù)Jones等[2]的統(tǒng)計(jì)，當(dāng)作添加劑或藥物用在家禽生產(chǎn)上的抗生素多達(dá)30余種，而在畜禽用抗生素中，有超過13.7%的抗生素被用來當(dāng)作促進(jìn)生長的添加劑使用。

在尋找家禽抗生素替代品的探索中，益生菌[3]和酶制劑被逐漸重視。微生物對(duì)家禽的益生作用主要表現(xiàn)在促進(jìn)生長、改善腸道黏膜結(jié)構(gòu)，促進(jìn)腸道和機(jī)體健康、促進(jìn)對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收、降解細(xì)胞毒性物質(zhì)、合成維生素、抑制病原菌、刺激腸道蠕動(dòng)、刺激免疫系統(tǒng)、產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸及抗菌物質(zhì)等[4]。

單胃動(dòng)物如家禽、豬等不能合成降解吸收營養(yǎng)物質(zhì)的全部酶類，因此在飼料中添加外源酶有助于單胃動(dòng)物更好的吸收利用飼料中的養(yǎng)分。在過去的多年中，像纖維素酶、木聚糖酶、植酸酶、脂肪酶、蛋白酶、半乳糖苷酶等都得到了應(yīng)用。家禽飼料中添加的酶類被廣泛應(yīng)用于降低食糜黏稠度和降解未經(jīng)熟化的飼料原料中的果膠、纖維素、交聯(lián)β-葡聚糖等非淀粉多糖。

目前大量的研究集中在益生菌或酶制劑各自對(duì)畜禽發(fā)揮作用的研究上，關(guān)于酶和益生菌在畜禽飼喂過程中聯(lián)合使用的研究較少，尤其對(duì)種鴨相關(guān)生產(chǎn)性能的研究寥寥無幾。本研究重點(diǎn)關(guān)注了復(fù)合酶(纖維素酶和蛋白酶)與益生菌(枯草芽孢桿菌、丁酸梭菌、糞腸球菌)制劑對(duì)不同周齡肉種鴨種蛋性能的影響，探討了復(fù)合酶與益生菌制劑相互作用的可能，為后續(xù)基礎(chǔ)研究以及生產(chǎn)應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用種鴨

選取健康狀況良好且生產(chǎn)性能接近的8棚父母代肉種鴨(櫻桃谷SM3)，其中33周齡產(chǎn)蛋高峰期種鴨4棚，70周齡產(chǎn)蛋末期種鴨4棚，各棚種鴨數(shù)量均為2 760羽(公鴨460羽，母鴨2 300羽)。每個(gè)周齡段4棚種鴨隨機(jī)分為菌酶復(fù)合組、酶制劑組、菌制劑組、空白對(duì)照組。每組種鴨隨機(jī)平均分3個(gè)重復(fù)。

1.2 飼喂和管理

7天預(yù)飼期，預(yù)飼期內(nèi)各棚種鴨飼喂基礎(chǔ)飼糧。待各周齡4棚種鴨生產(chǎn)性能無顯著差異后正式試驗(yàn)。正式試驗(yàn)開始后，空白對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，在此基礎(chǔ)上酶制劑組按照500 g/t的添加量投喂混合酶制劑；菌制劑組按照500 g/t的添加量投喂混合益生菌制劑；菌酶復(fù)合組每天除飼喂基礎(chǔ)飼糧外按照500 g/t的添加量拌料投喂酶加益生菌制劑。試驗(yàn)周期為46 d。

試驗(yàn)周期內(nèi)各周齡種鴨自由采食飲水，保持每天光照時(shí)間17 h。

試驗(yàn)用酶制劑、菌制劑和酶加益生菌混合制劑均由江蘇三儀生物工程有限公司提供，酶制劑由蛋白酶和纖維素酶組成，總酶活為300萬U/t；菌制劑由丁酸梭菌、糞腸球菌和枯草芽孢桿菌組成，總活菌數(shù)為1.2×1012CFU/g；酶加益生菌制劑由前述2種酶和3種益生菌共同組成，總酶活為300萬U/t，總活菌數(shù)為1.2×1012CFU/g。種鴨基礎(chǔ)飼糧，營養(yǎng)水平參照NRC(1994)家禽營養(yǎng)需要量設(shè)計(jì)?；A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 試驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)

每隔3天收取并統(tǒng)計(jì)各組種蛋的平均蛋重、可孵率、正品率、破蛋率、無精蛋率、孵化率。

平均蛋重=總蛋重/產(chǎn)蛋總數(shù)

可孵率=(入孵蛋數(shù)/產(chǎn)蛋總數(shù))×100%

正品率=(正品蛋數(shù)/產(chǎn)蛋總數(shù))×100%

破蛋率=(破損蛋數(shù)/產(chǎn)蛋總數(shù))×100%

無精蛋率=(未受精蛋數(shù)/產(chǎn)蛋總數(shù))×100%

孵化率=(出殼的全部雛雞數(shù)/入孵蛋數(shù))×100%

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)多維和微量元素為每千克飼糧提供：VA 1500 mg，VD3200 IU，VE 12.5 mg，VK 1.5 mg，VB12.2 mg，VB25.0 mg，煙酸 nicotinicacid 65 mg，VB62 mg，生物素biotin 0.2 mg，泛酸 pantothenate 15 mg，膽堿 choline 1000 mg，F(xiàn)e 90 mg，Cu 12 mg，Mn 85 mg，Zn 85 mg，I 0.42 mg，Se 0.3 mg，Co 2.5 mg

2)代謝能為計(jì)算值，其余為實(shí)測(cè)值

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

各項(xiàng)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均經(jīng)過SPSS 20.0單因素方差分析(one-way ANOVA, LSD)處理，并用Duncan法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以平均值和均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示，P<0.05表示數(shù)據(jù)差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 酶加益生菌制劑對(duì)70周齡種鴨生產(chǎn)性能的影響

蛋重：表2結(jié)果表明，試驗(yàn)開始10 d以后，菌酶復(fù)合組較其他三組開始出現(xiàn)顯著差異(P<0.05)并保持到試驗(yàn)結(jié)束，菌酶復(fù)合組蛋重較酶劑組、菌劑組、對(duì)照組分別增加了1.30%、1.74%、3.08%。

可孵率：菌酶復(fù)合組與酶劑組和菌劑組無顯著差異(P>0.05)，與對(duì)照組有差異顯著(P<0.05)；菌酶復(fù)合組可孵率較酶劑組、菌劑組、對(duì)照組分別增加了1.08%、1.32%、4.06%。

正品率：菌酶復(fù)合組與酶劑組無顯著差異(P>0.05)，與菌劑組和對(duì)照組均有顯著差異(P<0.05)；菌酶復(fù)合組正品率較酶劑組、菌劑組、對(duì)照組分別增加了1.46%、2.45%、5.29%。

破蛋率：從統(tǒng)計(jì)結(jié)果來看，菌酶復(fù)合組破蛋率比酶劑組、菌劑組、對(duì)照組分別降低了10.6%、4.55%、19.2%。

無精蛋率：菌酶復(fù)合組與酶劑組、菌劑組均無顯著差異(P>0.05)，與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)；菌酶復(fù)合組無精蛋率比酶劑組、菌劑組、對(duì)照組分別降低了5.08%、5.08%、17.6%。

孵化率：菌酶復(fù)合組與酶劑組、菌劑組均無顯著差異(P>0.05)，與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)；菌酶復(fù)合組無精蛋率比酶劑組、菌劑組、對(duì)照組分別升高了0.22%、0.33%、1.23%。

表2 “酶加益生菌”制劑對(duì)70周齡種鴨生產(chǎn)性能的影響

項(xiàng)目組別對(duì)照組酶劑組菌劑組 菌酶復(fù)合組均值標(biāo)準(zhǔn)誤P值 蛋重/g90.84a92.39bc92.02b93.56c0.24<0.01可孵率/%81.26a83.73b83.49b84.63b0.28<0.01正品率/%79.43a82.40bc81.60b83.59c0.31<0.01破蛋率/%5.16a4.71b4.42bc4.19c0.07<0.01無精蛋率/%13.58a11.85b11.80b11.18b0.27<0.01孵化率/%89.16a90.07b90.04b90.30b0.14<0.05

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無字母或相同字母表示差異不顯著(P<0.05)，不同字母表示差異顯著(P<0.05)。下同

2.2 酶加益生菌制劑對(duì)33周齡種鴨生產(chǎn)性能的影響

蛋重：從表3結(jié)果可知，試驗(yàn)開始的10 d以內(nèi)菌酶復(fù)合組與菌劑組和對(duì)照組已經(jīng)出現(xiàn)顯著差異(P<0.05)，試驗(yàn)開始10 d以后菌酶復(fù)合組與酶劑組也出現(xiàn)顯著差異(P<0.05)，并保持到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。菌酶復(fù)合組蛋重較酶劑組、菌劑組、對(duì)照組分別增加了0.78%、1.12%、2.50%。

可孵率：菌酶復(fù)合組與酶劑組、菌劑組均無顯著差異(P>0.05)，但與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)。菌酶復(fù)合組可孵率較酶劑組、菌劑組、對(duì)照組分別增加了0.54%、0.76%、1.87%。

正品率：菌酶復(fù)合組與酶劑組、菌劑組和對(duì)照組均無顯著差異(P>0.05)。菌酶復(fù)合組正品率較酶劑組、菌劑組、對(duì)照組分別增加了0.58%、1.52%、3.58%。

破蛋率：菌酶復(fù)合組破蛋率比酶劑組、菌劑組、對(duì)照組分別降低了18.1%、6.15%、37. 4%。

無精蛋率：菌酶復(fù)合組與酶劑組、菌劑組無顯著差異(P>0.05)，與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)。菌酶復(fù)合組無精蛋率比酶劑組、菌劑組、對(duì)照組分別降低了5.26%、5.85%、12.6%。

孵化率：菌酶復(fù)合組與酶劑組無顯著差異(P>0.05)，與菌劑組和對(duì)照組差異顯著(P<0.05)。菌酶復(fù)合組孵化率比酶劑組、菌劑組、對(duì)照組分別升高了0.53%、0.85%、1.29%。

表3 “酶加益生菌”制劑對(duì)33周齡種鴨生產(chǎn)性能的影響

項(xiàng)目組別對(duì)照組酶劑組 菌劑組 菌酶復(fù)合組均值標(biāo)準(zhǔn)誤P值蛋重/g87.92a89.35bc89.06b90.13c0.17<0.01可孵率/%91.05a92.24b92.01b92.65b0.15<0.01正品率/%83.9386.3585.6086.900.72>0.05破蛋率/%1.95a1.49b1.30c1.22c0.05<0.01無精蛋率/%7.00a6.46ab6.50ab6.13b0.13>0.05孵化率/%93.17a93.94bc93.57ab94.44c0.13<0.01

3 討論

正常情況下，家禽出生后的幾天之內(nèi)胃腸道中便會(huì)形成大約由400～500種微生物構(gòu)成的微生物區(qū)系，含量約1014CFU/g腸內(nèi)容物[5]。消化道內(nèi)穩(wěn)定的微生物區(qū)系是機(jī)體保持健康的重要保證。另外，動(dòng)物機(jī)體需要借助自身或者微生物合成的酶類對(duì)食物進(jìn)行消化吸收。酶對(duì)飼糧中不同組成成分的消化效果有很大差異。Haddadin等[6]報(bào)道，在20～68周齡的蛋雞飼料中添加乳桿菌培養(yǎng)物能明顯提高蛋重，改善蛋品質(zhì)。Sohail等[7]發(fā)現(xiàn)添加益生菌和酶制劑都能夠提高產(chǎn)蛋率、蛋重和蛋品質(zhì)。本研究結(jié)果顯示，無論是70周齡還是33周齡，單獨(dú)添加益生菌或酶制劑都能夠顯著增加種蛋的重量，這與Loh等[8]、Daneshyar等[9]、Kalavathy等[10]的研究結(jié)果一致。聯(lián)合添加酶制劑和益生菌制劑與單獨(dú)添加酶制劑、菌制劑組相比差異顯著。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，77周齡組種蛋重量普遍較33周齡組大，飼喂酶加益生菌制劑對(duì)產(chǎn)蛋末期種鴨蛋重的影響更明顯。Chen等[11]認(rèn)為腸道內(nèi)益生菌的生長抑制了病原菌，同時(shí)益生菌刺激小腸并增強(qiáng)酶類的活性，這增強(qiáng)了腸道的吸收能力，最終改善了種禽的生產(chǎn)性能。益生菌與酶制劑聯(lián)合使用，在發(fā)揮益生菌正常功能的同時(shí)及時(shí)補(bǔ)充了機(jī)體消化所需的外源酶，從而增加了營養(yǎng)和能量的吸收，增加了種蛋重量。

可孵率是一個(gè)較為寬泛的指標(biāo)，通常又可細(xì)分為正品率和次品率?？煞趼手饕艿捌焚|(zhì)的影響，而鴨品種、日齡、環(huán)境、飼料以及飼養(yǎng)管理水平等都會(huì)對(duì)蛋品質(zhì)產(chǎn)生影響。破蛋率是衡量蛋品質(zhì)的一個(gè)重要指標(biāo)，因此，通常情況下可孵率與破蛋率呈負(fù)相關(guān)。80%～90%的蛋品質(zhì)不良是由于蛋殼裂紋或破碎導(dǎo)致的[12]，在蛋品生產(chǎn)過程中會(huì)出現(xiàn)6%～10%的破損，從而造成經(jīng)濟(jì)損失。蛋殼質(zhì)量通常會(huì)隨著家禽年齡的增加而降低，本實(shí)驗(yàn)顯示，不同周齡種蛋的可孵率、正品率和破蛋率存在顯著差異。這主要是由于蛋重增加，而蛋殼中鈣含量降低、碳酸鹽沉積以及維生素D3代謝紊亂導(dǎo)致的。在產(chǎn)蛋末期，裂紋蛋的比例甚至?xí)黾?0%。Kurtoglu等[13]報(bào)道補(bǔ)充益生菌地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌增加了Brown-Nick雜種蛋雞的產(chǎn)蛋量并降低了破損蛋的百分比。Panda等[14]向處于產(chǎn)蛋后期的白來航種蛋雞飼糧中添加益生菌可提高產(chǎn)蛋率，飼料轉(zhuǎn)化率和蛋殼重。在48～64周齡白來航蛋雞飼料中添加益生菌蛋殼厚度和重量也顯著增加[15]。此外，也有研究表明，飼喂酶制劑對(duì)蛋殼厚度沒有影響[16]。本研究的結(jié)果與上述文獻(xiàn)較為一致，且本研究表明單獨(dú)使用酶制劑對(duì)改善破蛋率也有顯著影響。Karimi等[17]研究表明，飼料中添加植酸酶、α-淀粉酶、纖維素酶、蛋白酶等多種酶制劑混合物能夠顯著改善生長性能和小腸形態(tài)。益生菌改善了腸道環(huán)境，從而有助于同化更多的鈣、磷等礦物質(zhì)[18]，使殼體鈣化殼重增大從而降低了種蛋的破損率。酶與益生菌的聯(lián)合使用顯著改善了蛋品指標(biāo)。

無精蛋率的高低直接影響種蛋的孵化率。除此之外，種鴨品種、周齡、產(chǎn)蛋水平、種蛋品質(zhì)、健康狀況及管理水平等諸多因素都會(huì)對(duì)孵化率產(chǎn)生影響。從本研究結(jié)果來看，33周齡組種蛋孵化率顯著高于77周齡組，而無精蛋率則顯著低于77周齡。Nickolova等[19]在俄羅斯27周齡鴨飼料中添加益生菌并未發(fā)現(xiàn)其對(duì)種蛋受精率有顯著影響，這與本研究中33周齡種蛋無精蛋率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果相符。但77周齡種蛋無論是酶制劑組、菌制劑組還是混合制劑組，無精蛋率都較對(duì)照組有顯著升高。飼糧中維生素A、維生素D、維生素B以及礦物元素鈣、磷、鋅、錳等都會(huì)對(duì)種蛋孵化率產(chǎn)生影響。益生菌能夠促進(jìn)機(jī)體對(duì)維生素尤其是B族維生素的吸收并且能夠通過提高腸道酶活力改善腸道健康[20]。長期飼喂益生菌制劑能夠使家禽十二指腸、空腸、回腸的腸絨毛高度、寬度以及隱窩深度明顯改善。外源酶制劑能夠破壞飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子釋放營養(yǎng)成分、增加淀粉、蛋白以及礦物質(zhì)的生物利用率從而改善種蛋孵化率。

4 結(jié)論

酶與益生菌聯(lián)合應(yīng)用的效果要好于單獨(dú)使用酶制劑或益生菌制劑。酶與益生菌聯(lián)合應(yīng)用能夠有效的抑制高周齡種蛋可孵率、正品率的下降以及破蛋率、無精蛋率的上升，提高種蛋的蛋重和孵化率；能夠提升低周齡種蛋的可孵率和孵化率，促進(jìn)低周齡種蛋破蛋率的降低。