李文杰, 李美陽(yáng), 宮惠

(延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 吉林 延吉 133002)

歐洲纈草(ValerianaofficinalisL.)屬于敗醬科(Valerianaceae)纈草屬(Valeriana)多年生草本植物。以根及根莖入藥[1]，具有鎮(zhèn)靜安神、解痙止痛之功效，多用于治療神經(jīng)衰弱、失眠、癲癇等[2]，主要藥用活性成分是纈草三酯和纈草烯酸[3]。近年來(lái)，人們生活節(jié)奏加快，生活壓力增大，失眠、抑郁、腫瘤等疾病越來(lái)越多，而纈草正是一種天然鎮(zhèn)靜、解痛劑[4]，所以人們對(duì)纈草提取物及其制劑的需求日益增加。

問(wèn)：“這些日子你丈夫沒(méi)給你打電話？”劉珊珊冷冷地說(shuō)：“沒(méi)打，我們雖然是夫妻，卻形同陌路，他已經(jīng)出差半年多了，也不知道去了哪里！”江帆懷疑劉珊珊在騙他，吼道：“我老婆被你老公拐跑了，我今天是來(lái)找他算賬的。找不到他，我就……”說(shuō)著，又亮出了匕首！劉珊珊被嚇出了眼淚，一臉無(wú)辜地哀求：“大哥，我真不知道。我根本管不了他！我連他手機(jī)都打不通。”江帆怒不可遏：“我快被你老公搞瘋了，再找不到李輝，我就殺了你，看他回不回來(lái)……”江帆越說(shuō)越激動(dòng)，手中的匕首亂晃！

纈草屬植物主要分布于氣候溫和潮濕的地區(qū)，遍布整個(gè)歐洲、亞洲北部、南美洲以及美國(guó)[5]。自然生長(zhǎng)十分緩慢，需求增多導(dǎo)致野生纈草資源急劇下降。建立人工種植生產(chǎn)基地，對(duì)緩解和保護(hù)野生資源意義重大。但在長(zhǎng)期人工栽培過(guò)程中，品種退化、混雜現(xiàn)象嚴(yán)重，優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的遺傳穩(wěn)定性難以保持，大大影響了藥材的質(zhì)量和產(chǎn)量[6]。所以，采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)顯得十分迫切。

“三農(nóng)”工作是我國(guó)經(jīng)濟(jì)工作的重要組成部分，長(zhǎng)期以來(lái)一直是黨的工作的重中之重。在決勝全面建成小康社會(huì)的背景下，如何滿足農(nóng)民追求美好生活需求，實(shí)施鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略是今后解決“三農(nóng)”問(wèn)題，全面激活農(nóng)村發(fā)展新活力的重大行動(dòng)。進(jìn)一步建立健全城鄉(xiāng)融合發(fā)展的體制機(jī)制和政策體系，加快推進(jìn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村現(xiàn)代化，才能使農(nóng)村的“三農(nóng)”活力被真正激發(fā)起來(lái)。堅(jiān)持農(nóng)業(yè)農(nóng)村優(yōu)先發(fā)展，鞏固和完善農(nóng)村基本經(jīng)營(yíng)制度，深化農(nóng)村集體產(chǎn)權(quán)制度改革，保持土地承包關(guān)系穩(wěn)定并長(zhǎng)久不變，把中國(guó)人的飯碗牢牢端在自己手中，構(gòu)建現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)體系，促進(jìn)農(nóng)村一二三產(chǎn)業(yè)融合發(fā)展，這些都是推進(jìn)“三農(nóng)”建設(shè)的根本。

國(guó)內(nèi)外研究表明，許多物種的不定根培養(yǎng)具有穩(wěn)定合成次生代謝物質(zhì)的能力[6]，并且已在何首烏等藥用植物中得以成功應(yīng)用[7]，而歐洲纈草正是以根和根莖入藥，所以將組織培養(yǎng)技術(shù)與歐洲纈草不定根大量繁殖相結(jié)合可以快速有效地解決纈草提取物及其制劑供應(yīng)不足的問(wèn)題。雖然國(guó)內(nèi)外學(xué)者先后開(kāi)展了纈草的組織培養(yǎng)研究，但大多都是愈傷組織誘導(dǎo)和組培快繁類研究[8]，而對(duì)纈草不定根誘導(dǎo)方面的研究多為外植體或者外源激素單一因素，對(duì)纈草不定根懸浮培養(yǎng)方面的研究很少。本研究以歐洲纈草無(wú)菌苗的葉片和莖段為外植體，研究了不同濃度吲哚乙酸(indoleacetic acid，IAA)、萘乙酸(1-naphthylacetic acid，NAA)、吲哚丁酸(3-indolebutyric acid，IBA)對(duì)不定根誘導(dǎo)的影響，將外植體類型和外源激素兩種誘導(dǎo)因素相結(jié)合，再以誘導(dǎo)的不定根為材料，考察了不同培養(yǎng)基種類、不同外源激素對(duì)不定根懸浮培養(yǎng)的影響,旨在篩選歐洲纈草不定根誘導(dǎo)及懸浮培養(yǎng)的理想條件和培養(yǎng)基，利于歐洲纈草不定根的高效生產(chǎn)，為歐洲纈草提取物及其制劑的工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。

取一定數(shù)量的種子在流動(dòng)水下沖洗30 min，然后在超凈工作臺(tái)中用75%的酒精溶液浸泡消毒30 s，再用4%的次氯酸鈉溶液浸泡消毒15 min，浸泡的過(guò)程中應(yīng)不斷攪拌，使其能夠消毒完全，然后再用無(wú)菌水沖洗3～5次后放到無(wú)菌濾紙上吸干種子表面水分后，將種子接種到MS固體培養(yǎng)基上，每瓶20粒種子，共30瓶。培養(yǎng)溫度為(25±2)℃，光照強(qiáng)度1 200 lx,光照時(shí)間12 h。每天注意記錄和觀察種子發(fā)芽時(shí)間和發(fā)芽率。待無(wú)菌苗生長(zhǎng)30 d時(shí)，從中選取較寬大的葉片(約為2.5 cm×1.0 cm)，切成0.5 cm×0.5 cm大小的葉片作為外植體，再選取粗度均勻的莖(直徑約為1.5 mm)，切成1 cm左右不含節(jié)間的莖段作為外植體，用于下一步不定根誘導(dǎo)試驗(yàn)。

首先，很多學(xué)校由于師資力量的匱乏，導(dǎo)致沒(méi)有專門(mén)的道德與法治教師，這門(mén)課程多是由其他科目的教師兼任。但是教師由于缺乏專業(yè)的法律常識(shí)，只能是依照教材內(nèi)容進(jìn)行講授，不能夠深入分析相關(guān)案例并普及相關(guān)法律知識(shí)，導(dǎo)致學(xué)生的法治觀念薄弱，不利于其綜合發(fā)展。其次，很多學(xué)校的教材內(nèi)容過(guò)于陳舊，案例不夠典型，很難真正起到提高學(xué)生道德與法治意識(shí)的作用，導(dǎo)致學(xué)生的成長(zhǎng)受阻。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

2.1.2不同濃度IAA對(duì)不定根誘導(dǎo)的影響 不同濃度IAA對(duì)不定根的誘導(dǎo)效果見(jiàn)表2和圖1。當(dāng)以莖段為外植體時(shí)，隨IAA濃度的增加不定根生根率先降低后稍稍增加之后又大幅度降低，當(dāng)IAA濃度為0.05 mg·L-1時(shí)，生根率最高，達(dá)80.56%，并且生根數(shù)較多，生長(zhǎng)旺盛、不定根粗長(zhǎng)；以葉為外植體時(shí)，隨IAA濃度的增加不定根生根率先增加后降低，當(dāng)IAA濃度為1.0 mg·L-1時(shí)，不定根生根率最高，達(dá)85.19%，同時(shí)不定根生長(zhǎng)旺盛、生根數(shù)最多但較細(xì)短。從表2可知，外植體為莖段時(shí)，生根率、生根外植體數(shù)和總根數(shù)最高的都是IAA濃度0.05 mg·L-1；外植體為葉片時(shí)，生根率、生根外植體數(shù)和總根數(shù)最高的都是IAA濃度1.0 mg·L-1，并且兩者與其他濃度存在顯著差異(P<0.05)。但從圖1看，莖段為外植體IAA濃度為0.05 mg·L-1的不定根粗長(zhǎng)明顯優(yōu)于葉片為外植體IAA濃度為1.0 mg·L-1。綜合來(lái)看，MS+0.05 mg·L-1IAA是誘導(dǎo)不定根的理想培養(yǎng)基。

1.2 歐洲纈草無(wú)菌苗的獲得

且夫兩漢而下，文之不如古者，豈其所謂繩墨轉(zhuǎn)折之精之不盡如哉？秦漢以前，儒家者有儒家本色，至如老莊家有老莊本色，縱橫家有縱橫本色，名家、墨家、陰陽(yáng)家皆有本色。雖其為術(shù)也駁，而莫不皆有一段千古不可磨滅之見(jiàn)，是以老家必不肯剿儒家之說(shuō)，縱橫必不肯借墨家之談，各自其本色而鳴之為言。其所言者，其本色也。是以精光注焉，而其言遂不泯于世。［13］294-295

1.3 歐洲纈草不定根的誘導(dǎo)

1.4.1不同培養(yǎng)基對(duì)歐洲纈草不定根懸浮培養(yǎng)的影響 試驗(yàn)所涉及6種培養(yǎng)基(MS、RCM、B5、WPM、SH、White)均為原配方組分，添加30 g·L-1蔗糖，并根據(jù)試驗(yàn)需要添加不同種類和濃度的外源激素，pH 5.7，分裝后121 ℃下滅菌15 min。選取0.5 mg·L-1NAA濃度下誘導(dǎo)的、粗細(xì)均勻的不定根，將其從根尖部位切取1 cm，接種到含有上述6種培養(yǎng)基的50 mL三角瓶中，每瓶接種10個(gè)根尖部位，每種培養(yǎng)基10瓶重復(fù)。

生根率=生根外植體數(shù)/接種外植體數(shù)×100%。

1.4 歐洲纈草不定根的懸浮培養(yǎng)

以MS為基本培養(yǎng)基，添加蔗糖30 g·L-1、瓊脂8.0 g·L-1，配制成含NAA、IAA或者IBA(3種激素濃度梯度均為0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg·L-1)的固體培養(yǎng)基。再將外植體莖段和葉片分別接種到已配制好的培養(yǎng)基中。每種激素濃度下的莖和葉均做10瓶重復(fù)，培養(yǎng)溫度為(25±2)℃，暗培養(yǎng)。注意觀察統(tǒng)計(jì)生根外植體數(shù)、生根總數(shù)以及根形態(tài)(肉眼對(duì)比觀察界定粗細(xì)和長(zhǎng)短)，計(jì)算生根率。

接種前稱量培養(yǎng)基總重量，接種時(shí)要注意用無(wú)菌水將根尖的固體培養(yǎng)基清洗干凈，接種后稱量培養(yǎng)基總重量，得到接種量。

表2為不同活化條件下酵母菌發(fā)酵特性標(biāo)準(zhǔn)化處理值之和（即OI總值），大多高于普通活化所得OI總值（5.82），表明發(fā)酵前適應(yīng)活化處理可提高釀酒酵母菌的發(fā)酵特性。

接種量(g)=接種后培養(yǎng)基總重量(g)-接種前培養(yǎng)基總重量(g)。

采用Excel軟件整理數(shù)據(jù)，采用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

干物率=收獲干重/收獲鮮重×100%；

1.4.2不同外源激素對(duì)歐洲纈草不定根懸浮培養(yǎng)的影響 以RCM為基本培養(yǎng)基，添加蔗糖30 g·L-1，制作含有NAA(濃度分別為0.1、0.5、1.0 mg·L-1)和IAA(濃度分別為0.05 mg·L-1、0.5 mg·L-1)的培養(yǎng)液，選取0.5 mg·L-1NAA下誘導(dǎo)的、粗細(xì)均勻的不定根，將其接種到上述培養(yǎng)液中，每種激素濃度10瓶重復(fù)。接種注意事項(xiàng)、培養(yǎng)條件及稱量方法等同1.4.1節(jié)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

接種后移至搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為120 r·min-1，培養(yǎng)溫度為(25±2)℃，暗培養(yǎng)，30 d后收獲。用無(wú)菌水將不定根上殘留的培養(yǎng)液沖洗干凈，用濾紙吸干水分，于分析天平稱量，得到收獲鮮重(收獲量)。在40 ℃干燥箱中干燥至恒重，于分析天平稱量，得到收獲干重。

人，無(wú)論生于哪個(gè)時(shí)代，處于何方地界，都要不同程度的面對(duì)人“生”的煩惱和對(duì)人“死”的恐懼，從這種精神境界上講，超脫生死便成了人的終極目標(biāo)，所以才有了對(duì)宗教的信仰和研究。對(duì)佛教而言，成佛是學(xué)佛的真正目的，既然佛性人本具足，為什么人仍處于“人”的狀態(tài)，而未成佛？為了解釋這一點(diǎn)，首先要了解一下對(duì)佛性的不同稱謂。隨著佛教的發(fā)展，“佛性”一詞有了更多的異名，如：中道、涅槃、法性、真如、實(shí)際、法界、如來(lái)藏……等等。這些不同的稱謂，在不同的語(yǔ)境中所表達(dá)的意義并不完全一樣，但都和佛性基本相同或相通。“如來(lái)藏”與“佛性”相通，佛教用如來(lái)藏理論來(lái)說(shuō)明人未成佛之因。

2 結(jié)果與分析

2.1 外源激素對(duì)不定根誘導(dǎo)的影響

2.1.1不同濃度NAA對(duì)不定根誘導(dǎo)的影響 不同濃度NAA對(duì)不定根的誘導(dǎo)效果見(jiàn)表1和圖1。當(dāng)以莖段為外植體時(shí)，隨NAA濃度的增加不定根生根率先增加后降低，當(dāng)NAA濃度為0.5 mg·L-1時(shí)，生根率最高，達(dá)94.44%，生根數(shù)最多、生長(zhǎng)旺盛且不定根粗長(zhǎng)；以葉為外植體時(shí)，隨NAA濃度的增加不定根生根率呈現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)，當(dāng)NAA濃度為2.0 mg·L-1時(shí)，不定根生根率最高，達(dá)88.89%，不定根生長(zhǎng)旺盛、生根數(shù)最多但不定根較細(xì)短。從表1可知，生根率、生根外植體數(shù)和總根數(shù)最高的都是NAA濃度0.5 mg·L-1，并與其他濃度存在顯著差異(P<0.05)，說(shuō)明MS+0.5 mg·L-1NAA是誘導(dǎo)不定根的理想培養(yǎng)基。

表1 NAA濃度和外植體類型對(duì)歐洲纈草不定根誘導(dǎo)的影響Table 1 Effects of NAA concentration and explant types on adventitious root induction of V. officinalis

A: 0.5 mg·L-1 NAA下莖段誘導(dǎo)的不定根; B: MS+0.05 mg·L-1 IAA下莖段誘導(dǎo)的不定根; C: MS+0.05 mg·L-1 IBA下莖段誘導(dǎo)的不定根; D: MS+2.0 mg·L-1 NAA下葉片誘導(dǎo)的不定根; E: MS+1.0 mg·L-1 IAA下葉片誘導(dǎo)的不定根; F: MS+0.1 mg·L-1 IBA下葉片誘導(dǎo)的不定根。A: Induced adventitious roots by stem segments under MS+0.5 mg·L-1 NAA; B: Induced adventitious roots by stem segments under MS+0.05 mg·L-1 IAA; C: Induced adventitious roots by stem segments under MS+0.05 mg·L-1 IBA; D: Induced adventitious roots by leaf under MS+2.0 mg·L-1 NAA; E: Induced adventitious roots by leaf under MS+1.0 mg·L-1 IAA; F: Induced adventitious roots by leaf under MS+0.1 mg·L-1 IBA.圖1 不同誘導(dǎo)條件下的歐洲纈草不定根Fig.1 Adventitious roots of V. officinalis under different induction conditions

歐洲纈草種子采自延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院3號(hào)溫室內(nèi)的三年生實(shí)生苗植株。歐洲纈草種子采下晾干后，置于4 ℃冰箱冷藏待用。

2.1.3不同濃度IBA對(duì)不定根誘導(dǎo)的影響 不同濃度IBA對(duì)不定根的誘導(dǎo)效果見(jiàn)表3和圖1。當(dāng)以莖段為外植體時(shí)，隨IBA濃度的增加不定根生根率呈逐漸降低的趨勢(shì)。當(dāng)IBA濃度為0.05 mg·L-1時(shí)，生根率最高，達(dá)83.33%，并且生根數(shù)多，生長(zhǎng)旺盛、不定根粗長(zhǎng)，與其他濃度有顯著差異(P<0.05)，說(shuō)明當(dāng)莖段為外植體時(shí)MS+0.05 mg·L-1IBA是誘導(dǎo)不定根的理想培養(yǎng)基；以葉為外植體時(shí)，隨IBA濃度的增加不定根生根率先增加后降低，當(dāng)IAA濃度為0.1 mg·L-1時(shí)，不定根生根率最高，達(dá)85.19%，同時(shí)不定根生根數(shù)較多，生長(zhǎng)較旺盛、不定根也較粗長(zhǎng)。從表3來(lái)看，葉片為外植體、IBA濃度為0.1 mg·L-1的生根率要稍優(yōu)于莖段為外植體、IBA濃度為0.05 mg·L-1，但是前者不定根總數(shù)較少，并且兩者與其他濃度存在顯著差異(P<0.05)。另外，從圖1也可以看出，后者的不定根不但總數(shù)比前者多而且不定根也比前者粗長(zhǎng)。所以，MS+0.05 mg·L-1IBA是誘導(dǎo)不定根的理想培養(yǎng)基。

表2 IAA濃度和外植體類型對(duì)歐洲纈草不定根誘導(dǎo)的影響Table 2 Effects of IAA concentration and explant types on adventitious root induction of V. officinalis

表3 IBA濃度和外植體類型對(duì)歐洲纈草不定根誘導(dǎo)的影響Table 3 Effects of IBA concentration and explant types on adventitious root induction of V. officinalis

2.1.4不定根誘導(dǎo)理想條件 將圖1中C和D、E和F、G和H進(jìn)行兩兩比較，可以看出,以莖為外植體誘導(dǎo)的不定根數(shù)目多且粗長(zhǎng)，明顯優(yōu)于以葉片為外植體。所以，莖段是不定根誘導(dǎo)的理想外植體。雖然在以莖為外植體時(shí)，0.5 mg·L-1NAA、0.05 mg·L-1IAA以及0.05 mg·L-1IBA誘導(dǎo)的不定根都生長(zhǎng)旺盛、粗長(zhǎng)，但是從誘導(dǎo)不定根的數(shù)量上看0.5 mg·L-1NAA>0.05 mg·L-1IBA>0.05 mg·L-1IAA，另外，在整體誘導(dǎo)不定根的效果上NAA>IAA>IBA。因此，歐洲纈草不定根誘導(dǎo)的理想外植體為莖，理想培養(yǎng)基為MS+0.5 mg·L-1NAA。

藤尾死亡的結(jié)局也給讀者帶來(lái)巨大的震撼，夏目漱石給送去死的世界。雖然有很多讀者對(duì)藤尾的死唏噓不已，但藤尾的死是不可避免的。本書(shū)的名字是《虞美人草》，虞美人草原本就是在虞姬去世后埋葬的草，象征著虞姬和西楚霸王項(xiàng)羽美麗悲傷的愛(ài)情，藤尾和小野無(wú)法結(jié)出愛(ài)情的果實(shí)，間接暗示藤尾的死。文中沒(méi)有明確地描繪虞美人和項(xiàng)羽的故事，但是藤尾和小野交流的作品，死亡是藤尾最終的歸宿。

2.2 不定根懸浮培養(yǎng)

2.2.1不同培養(yǎng)基種類對(duì)不定根懸浮培養(yǎng)的影響 從表4可以看出，6種培養(yǎng)基中，RCM培養(yǎng)基表現(xiàn)最好，不定根生長(zhǎng)旺盛，數(shù)目多且較粗長(zhǎng)(圖2)，其收獲鮮重達(dá)7.80 g·L-1，收獲干重達(dá)1.46 g·L-1，并且其干物率也最高，為18.73%，其次是MS培養(yǎng)基，最差的是White培養(yǎng)基(圖2)，不定根幾乎不生長(zhǎng)，不同種類培養(yǎng)基間收獲鮮重、收獲干重和增殖倍數(shù)存在極顯著差異(P<0.01)，不同種類培養(yǎng)基間干物率不存在顯著差異。雖然接種量有些差異會(huì)影響增殖情況，但是從增殖倍數(shù)和圖2綜合來(lái)看，RCM培養(yǎng)基是歐洲纈草不定根懸浮培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基。

2.2.2不同外源激素對(duì)不定根懸浮培養(yǎng)的影響

從表5可以看出，不定根的增殖倍數(shù)隨著NAA濃度的增加先增加后降低，與之前不定根誘導(dǎo)時(shí)表現(xiàn)相同，即在NAA濃度為0.5 mg·L-1時(shí)，增殖倍數(shù)達(dá)到24.51倍，不定根生長(zhǎng)旺盛(圖3)。不定根增殖倍數(shù)隨著IAA濃度的增加而降低，在IAA濃度為0.05 mg·L-1時(shí)，增殖倍數(shù)達(dá)到18.02倍，不定根生長(zhǎng)較旺盛(圖3)，不同激素濃度間纈草不定根的增殖情況有極顯著差異(P<0.01)。雖然接種量有些差異會(huì)影響增殖情況，但是從不定根生長(zhǎng)和增殖倍數(shù)(圖3)綜合來(lái)看，0.5 mg·L-1NAA是歐洲纈草不定根懸浮培養(yǎng)的理想外源激素。

表4 培養(yǎng)基種類對(duì)不定根懸浮培養(yǎng)的影響Table 4 Effects of medium types on the suspended culture of adventitious roots

表5 外源激素對(duì)不定根懸浮培養(yǎng)的影響Table 5 Effect of exogenous hormones on the suspended culture of adventitious roots

圖3 不同外源激素下懸浮培養(yǎng)的不定根Fig.3 Adventitious roots of suspended culture by the different exogenous hormones

3 討論

3.1 不定根誘導(dǎo)理想條件

近年來(lái),研究證實(shí)植物次生代謝產(chǎn)物在已分化的器官中比愈傷組織、懸浮細(xì)胞中含量高，研究重點(diǎn)也逐漸轉(zhuǎn)移到了已分化的不定根等器官的培養(yǎng)上[9]。通過(guò)使外植體在培養(yǎng)過(guò)程中分化而產(chǎn)生的不定根，其結(jié)構(gòu)和代謝特征具有合成次生代謝產(chǎn)物能力強(qiáng)、基因型穩(wěn)定和代謝產(chǎn)物穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)[10-11]，同時(shí)韓國(guó)高麗參不定根大規(guī)模培養(yǎng)[12]、雷公藤不定根中試放大[13]、紫松果菊不定根規(guī)?；a(chǎn)[14]、丹參不定根的中試[15]、甘草不定根反應(yīng)器培養(yǎng)[16]等研究充分說(shuō)明藥用植物不定根培養(yǎng)是根部活性成分含量較高植物工業(yè)化生產(chǎn)的有效途徑。

不定根的發(fā)生受許多因素的影響，其中生長(zhǎng)素類物質(zhì)和外植體類型對(duì)不定根的發(fā)生起著關(guān)鍵作用，生長(zhǎng)素類似物會(huì)影響不定根的細(xì)胞分化，發(fā)育以及形態(tài)的建成，而不同外植體對(duì)不定根的誘導(dǎo)能力不同。不同藥用植物適宜誘導(dǎo)的外植體不同，適宜誘導(dǎo)不定根的激素種類和濃度不同[17]，Wu等[18]在考察了IAA、IBA、NAA等不同生長(zhǎng)素對(duì)紫錐菊不定根的誘導(dǎo)情況后，發(fā)現(xiàn)IBA是誘導(dǎo)的最佳激素；袁媛等[19]在蒼術(shù)不定根培養(yǎng)中分別考察了根、葉片、葉柄、子葉4種材料對(duì)不定根誘導(dǎo)的影響，發(fā)現(xiàn)以葉片為外植體時(shí)不定根誘導(dǎo)率最高，根次之；張堅(jiān)等[20]在對(duì)甘草不定根研究中發(fā)現(xiàn)，NAA較IBA更有利于不定根的誘導(dǎo)，BA和KT則抑制不定根的誘導(dǎo)；外植體為根時(shí)誘導(dǎo)率為100%，而外植體為莖時(shí)不能誘導(dǎo)出不定根，形成了愈傷組織。本試驗(yàn)研究了纈草莖和葉片兩種外植體在不同濃度IAA、NAA和IBA下不定根誘導(dǎo)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)莖段為外植體要優(yōu)于葉片，NAA要優(yōu)于IBA、IAA，MS+0.5 mg·L-1NAA是誘導(dǎo)不定根的理想培養(yǎng)基。

3.2 不定根懸浮培養(yǎng)理想條件

不定根的懸浮培養(yǎng)同樣受許多因素的影響，其中,培養(yǎng)基種類和外源激素對(duì)不定根的增殖發(fā)生起著關(guān)鍵性的作用。

不同的基本培養(yǎng)基中含有不同濃度的無(wú)機(jī)鹽、碳源、維生素等物質(zhì)，可造成培養(yǎng)效果不同。李斌等[21]發(fā)現(xiàn)MS為金鐵鎖不定根生長(zhǎng)的較優(yōu)基本培養(yǎng)基；楊秀蓮等[22]研究發(fā)現(xiàn)MS培養(yǎng)基更適合海州常山葉片愈傷組織的形成。本試驗(yàn)在研究不同培養(yǎng)基種類對(duì)不定根懸浮培養(yǎng)的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，RCM培養(yǎng)基特別適合歐洲纈草不定根的懸浮培養(yǎng)，增殖倍數(shù)達(dá)7.64±1.94，生長(zhǎng)勢(shì)好，顯著優(yōu)于其他培養(yǎng)基；在以RCM為基本培養(yǎng)基，研究不同濃度NAA和IAA對(duì)歐洲纈草不定根懸浮培養(yǎng)的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)NAA和IAA對(duì)歐洲纈草不定根增殖均起到良好的作用，但NAA對(duì)不定根增殖效果優(yōu)于IAA，并且NAA濃度為0.5 mg·L-1時(shí)不定根增殖效果最好，增殖倍數(shù)達(dá)24.51±3.94，在生物量和生長(zhǎng)速度上顯著優(yōu)于崔磊[23]的研究結(jié)果(以MS+ 0.2 mg·L-1IBA + 0.2 mg·L-1KT懸浮培養(yǎng)寬葉纈草不定根，接種28 d后生物量為623 mg，生長(zhǎng)速率為420%)。本研究所得方法更有利于短期內(nèi)獲得大量不定根。可能是因?yàn)镽CM培養(yǎng)基中某種離子或者大分子可以促進(jìn)歐洲纈草不定根細(xì)胞伸長(zhǎng)和分裂，從而使得不定根長(zhǎng)度和數(shù)量的顯著增加。歐洲纈草不定根有效成分種類和含量的分析測(cè)定以及外源激素對(duì)歐洲纈草不定根誘導(dǎo)機(jī)制等問(wèn)題，還需進(jìn)一步的研究。