湯一冰 王萬鐵

(1.溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院病理科 溫州 325000；2.溫州醫(yī)科大學病理生理教研室 溫州 325035)

甲狀腺癌屬于臨床常見的內分泌系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其發(fā)生率與放射線接觸史、高碘飲食、遺傳等因素密切相關，或由甲狀腺腺瘤、結節(jié)性甲狀腺腫等其他良性結節(jié)疾病發(fā)展所致[1～2]。多數甲狀腺癌患者術后預后較好，但部分患者會出現(xiàn)遠處轉移或淋巴結轉移，術后腫瘤復發(fā)，甚至危及生命安全。趨化因子受體4(CXCR4)是一種參與腫瘤細胞生長、轉移、侵襲等的趨化因子，而Ki-67與子宮內膜癌等多種腫瘤的預后密切相關，是腫瘤細胞增殖活性標志物之一，兩者與甲狀腺癌患者的關系是臨床研究的熱點[3～4]。本研究旨在分析甲狀腺癌組織Ki-67、CXCR4表達與臨床病理特征及預后的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年7月～2019年10月在我院行手術治療的90例甲狀腺癌患者癌組織標本，將其設為研究組，收集癌旁組織標本作為良性組。90例患者中，女52例，男38例；年齡24～73歲，平均年齡(45.24±4.96)歲；病理類型：分化型癌80例(濾泡狀腺癌27例，乳頭狀腺癌37例，髓樣癌16例)，未分化型癌10例；無淋巴結轉移58例，淋巴結轉移32例；癌灶特點：多結節(jié)48例，單結節(jié)42例；無包膜侵犯47例，有包膜侵犯43例；病理分期：Ⅰ～Ⅱ期46例，Ⅲ～Ⅳ期44例。入組患者均經病理、影像學檢查確診為甲狀腺癌且術前未接受放化療治療，臨床資料完整。另外選擇同期在我院行手術治療的90例甲狀腺良性病變患者病理標本設為對照組，其中女49例，男41例；年齡23～75歲，平均年齡(45.18±5.01)歲。3組基本資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，有可比性。

1.2 方法

將獲取的標本使用10%甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，切片厚度為4μm，以免疫組化S-P三步法染色法對CXCR4、Ki-67實施染色。使用購買自上海長島生物科技有限公司的試劑盒，操作步驟嚴格按照試劑盒說明實施。以已知陽性切片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照組。

1.3 結果判定

Ki67以細胞核呈黃色、褐色和棕黃色分布為陽性，CXCR4以細胞核和細胞質呈黃色、褐色和棕黃色分布為陽性。染色強度：0分：無色；1分：淡黃色；2分：棕黃色；3分：褐色。在400倍高倍顯微鏡下，每張切片隨機選擇5個視野，計數陽性細胞的百分數，結果取平均值。0分：陽性細胞數≤5%；1分：陽性細胞數6%～25%；2分：陽性細胞數26%～50%；陽性細胞數>50%。按照陽性細胞數和染色強度兩者得分乘積對陽性強度進行計算：陰性(-)：≤1分；弱陽性(+)：2～3分；中陽性(++)：4～6分；強陽性(+++)：>6分。

1.4 觀察指標

(1)比較3組Ki-67、CXCR4陽性表達率；(2)分析Ki-67、CXCR4陽性表達率與甲狀腺癌臨床病理特征關系，其包括年齡、性別、病理類型、有無淋巴結轉移、癌灶特點、有無包膜侵犯、病理分期等；(3)分析Ki-67、CXCR4表達與甲狀腺癌患者疾病進展時間(TTP)的相關性。

1.5 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 3組Ki-67、CXCR4陽性表達率比較

研究組Ki-67、CXCR4陽性表達率高于良性組、對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；良性組Ki-67、CXCR4陽性表達率與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 3組Ki-67、CXCR4陽性表達率比較[n(%)]

組別Ki-67CXCR4研究組(n=90)61(67.78)64(71.11)良性組(n=90)11(12.22)a19(21.11)a對照組(n=90)7(7.78)a16(17.78)aχ297.19969.187P0.0000.000

注：a與研究組相比，P<0.05。

2.2 Ki-67、CXCR4陽性表達率與甲狀腺癌臨床病理特征關系

甲狀腺癌患者病理分期Ⅲ～Ⅳ期Ki-67、CXCR4陽性表達率高于病理分期Ⅰ～Ⅱ期，有淋巴結轉移Ki-67、CXCR4陽性表達率高于無淋巴結轉移，且有包膜侵犯Ki-67陽性表達率高于無包膜侵犯，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 Ki-67、CXCR4陽性表達率與甲狀腺癌臨床病理特征關系[n(%)]

臨床病理特征例數(n)Ki-67(n=61)CXCR4(n=64)陽性χ2P陽性χ2P性別女5235(67.31)男3826(68.42)0.0130.91135(67.31)29(76.32)0.8670.352年齡(歲)≤454832(66.67)>454229(69.05)0.0580.81031(64.58)33(78.57)2.1340.144病理分期Ⅰ～Ⅱ期4626(56.52)Ⅲ～Ⅳ期4435(79.55)4.8310.02826(56.52)38(86.36)9.7490.002病理類型分化型8056(70.00)未分化型105(50.00)0.8410.20257(71.25)7(70.00)0.0830.935癌灶特點多結節(jié)4829(60.42)單結節(jié)4232(76.19)2.552011033(68.75)31(73.81)0.8420.359包膜侵犯有3226(81.25)無5835(60.34)4.1270.04225(78.13)39(67.24)1.1980.276淋巴結轉移有4339(90.70)無4722(46.81)19.5060.00037(86.05)27(57.45)8.9410.003

2.3 Ki-67、CXCR4表達與甲狀腺癌患者TTP的相關性分析

甲狀腺癌患者的中位TTP為37.89個月(95%CI為27.90～43.27)，其中Ki-67陽性者與陰性者中位TTP分別為30.98個月(95%CI為21.89～38.125)、47.78個月(95%CI為36.38～59.17)；其中CXCR4陽性者與陰性者中位TTP分別為30.29個月(95%CI為28.40～32.19)、43.12個月(95%CI為37.19～51.18)。經Log-rank檢驗顯示，Ki-67、CXCR4陽性者TTP較陰性者高，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=8.249、11.223，P=0.004、0.001)，見圖1～2。

圖1 CXCR4表達與甲狀腺癌患者TTP關系

圖2 Ki-67表達與甲狀腺癌患者TTP關系

3 討論

甲狀腺癌發(fā)病率約占全身惡性腫瘤的1%～2%，且發(fā)病率呈明顯上升趨勢。手術是臨床治療甲狀腺癌的常用手段，但部分患者術后易出現(xiàn)復發(fā)轉移，預后較差[5]。隨著分子生物學深入研究，腫瘤的侵襲性與轉移性是由多種因素相互作用的復雜動態(tài)過程而逐漸受到臨床重視，與抑癌基因、癌基因、細胞運動因子、粘附分子、水解酶類等作用相關。

趨化因子是由多種細胞產生的促炎細胞因子，具有趨化細胞運動作用，參與多種疾病的發(fā)生與進展。CXCR4是趨化因子家族成員之一，其與趨化因子基質細胞衍生因子-1生物軸可刺激多種信號通路活化，經聚合腫瘤細胞肌動蛋白絲，促進假偽足形成，進而形成局部血管，提升細胞運動、侵襲、遷移能力，參與腫瘤的生長、浸潤和轉移[6～7]。Ki-67屬于增殖細胞表達的抗原，其水平高低與細胞周期及細胞增殖密切相關，半衰期約為1h，脫離細胞周期后迅速降解，能準確反映腫瘤細胞增殖活性，是一種判斷腫瘤惡性程度和預測預后的重要指標[8～10]。本研究中，甲狀腺癌患者病理分期Ⅲ～Ⅳ期移Ki-67、CXCR4陽性表達率高于病理分期Ⅰ～Ⅱ期，有淋巴結轉Ki-67、CXCR4陽性表達率高于無淋巴結轉移，且有包膜侵犯Ki-67陽性表達率高于無包膜侵犯，提示Ki-67、CXCR4與甲狀腺癌的發(fā)生、進展密切相關，兩者高表達提示患者預后可能不良。本研究中，Ki-67、CXCR4陽性者TTP較陰性者高，可能是因Ki-67、CXCR4高表達可經增強腫瘤細胞侵襲力、增殖活性等多種機制，促進患者病情進展，導致患者無病生存期縮短。

綜上所述，Ki-67、CXCR4在甲狀腺癌中呈高表達，檢測兩者可評估甲狀腺癌惡性程度與術后疾病進展時間，可成為甲狀腺潛在的指標靶點和預測預后指標。