劉 萍，劉 旭，王 婧，蔣國振

陜西省糧油產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心 （西安 710016）

我國人口中有65%以大米為主食，大米在國家糧食安全中的地位舉足輕重。莠去津（atrazine）是內(nèi)吸選擇性苗前、苗后封閉除草劑，主要作用于雙子葉植物，對大草效果比較不理想，是大米常用農(nóng)藥。我國現(xiàn)行國家標準GB2763—2019《食品安全國家標準 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中規(guī)定，谷物中莠去津限量指標為0.05 mg／kg。

本文根據(jù)GB／T20770—2008《糧谷中486種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法》、《化學(xué)分析中的不確定度的評估指南》（CNAS—GL06）［1］、國家計量技術(shù)規(guī)范《測量不確定度評定與表示》［2］，對大米中莠去津殘留量測定的各個分量和最終結(jié)果的進行評定，以保證莠去津殘留量測定方法的可靠性及測定結(jié)果的可信度。

1 材料與方法

1.1 儀器試劑

Waters Aquity I－Class／TQD 液相色譜－質(zhì)譜／質(zhì)譜儀；超聲發(fā)生器（昆山，KQ2200DE 型）；離心機（HERMLE，Z323）；渦旋機（EYELA，CM－1000）；電子天平（梅特勒，AB204－S）；莠去津標準品（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研檢測所，丙酮配制，100μg／mL）。

1.2 方法

1.2.1 儀器條件

1.2.1.1 色譜條件

色譜柱，Waters Aquity UPLC BEH C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.7μm）；柱溫25 ℃；進樣量2μL；流速0.3 mL／min；流動相A（0.1%甲酸水溶液），B（乙腈），流動相梯度洗脫條件見表1。

時間／min流速／（mL／min）A0.1%甲酸水溶液／%B 乙腈／%0 0.3 99 1.0 1 0.3 70 30 2 0.3 60 40 4.5 0.3 40 60 6 0.3 1.0 99 7 0.3 99 1.0

1.2.1.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧正離子（ESI＋）電離模式；電噴霧電壓3.5 kV；去溶劑氣溫度500 ℃；霧化氣流量800 L／h；監(jiān)測模式：多重反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式，定量離子對216.0／174.0，錐孔電壓34 V，碰撞能量19 eV。

1.2.2 實驗步驟

稱取粉碎混勻的大米樣品5 g（精確至0.01 g）于50 mL 離心管中，加入2.0g 無水硫酸鈉和10 mL乙腈提取液，在振蕩器上振蕩提取10 min，再超聲提取10 min，5000 rpm 離心5 min。取2.0mL上層提取液，經(jīng)C18 固相萃取小柱凈化，濾液經(jīng)0.22μm濾膜過濾于樣品瓶中，供HPLC－MS／MS測定。

1.2.3 標準曲線制備

準確吸取1.0mL莠去津標準溶液到10 mL容量瓶中，用甲醇溶液稀釋并定容，得濃度為10μg／mL的莠去津儲備溶液，儲存于－20℃冰箱中。

配制莠去津標準曲線濃度為：2.0、20、50、100、200 ng／mL。進樣2μL，以標準溶液濃度與檢測離子峰面積作標準曲線。標準曲線Y＝657.172×X＋227.845，相關(guān)系數(shù)大于0.999。

2 結(jié)果與討論

2.1 數(shù)學(xué)模型

測量不確定度數(shù)學(xué)模型如下所示：

式中：X 為試樣中被測組分殘留量，μg／kg；C為樣品溶液中被測組分的濃度，ng／mL；V 為樣品溶液最終定容體積，mL；m 為樣品溶液所代表最終試樣的質(zhì)量，g。

2.2 不確定度來源分析

根據(jù)測量過程和數(shù)學(xué)模型分析，測定莠去津的不確定度主要有以下幾方面：樣品制備引入的不確定度分量；標準溶液配制引入的不確定度分量；儀器引入的不確定度分量；回收實驗引入的不確定度分量。

2.3 制備樣品溶液的相對不確定度（B類評定）

2.3.1 試樣稱量引入的相對標準不確定度ur（m）

稱樣量為5 g，實驗所用天平的檢定證書給出了最大允許誤差為±0.05 g，取矩形分布［1］，則試樣稱量引入的標準不確定度為：

稱量試樣的值為5.02 g，故試樣稱量引入的相對標準不確定度為：

2.3.2 樣品前處理中提取、凈化過程中體積引入的相對標準不確定度

（1）移液管引入的標準不確定度

10mL移液管引入的不確定度，按照JJG196－2006《常用玻璃量器檢定規(guī)程》［3］，10mL A 級移液管最大容量允差為±0.015 mL，取三角分布，則樣品定容引入的標準不確定度u（V）為：

（2）溫度波動引入的標準不確定度

實驗過程中實驗室溫度控制在（20±4）℃，假定溫度分布為矩形分布，乙腈的膨脹系數(shù)為1.37×10－3／℃，溫度影響不確定度為：

相對標準不確定度：

配制樣品溶液體積的相對不確定度為：

故樣品制備引入的相對不確定度：

2.4 標準溶液制備引入的相對不確定度（B類評定）

2.4.1 標準物質(zhì)引入的不確定度

本實驗采用的莠去津標樣購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研檢測所，標準值為100μg／mL，擴展不確定度0.14μg／mL，引入的不確定度假定為矩形分布。相對不確定度：

2.4.2 標準溶液配制過程中量器自身引入的不確定度

根據(jù)JJG 196—2006 《常用玻璃量器檢定規(guī)程》［3］、JJG646—2006《移液器》［4］要求，按照矩形分布處理，標準溶液配制過程中用到的玻璃量器和移液器引入的相對標準不確定度如表2所示。

影響因素 項目移液器 容量瓶5 mL 1 mL 200μL 20μL 10mL量取體積／mL 5 1 0.5 0.2 0.刻度誤差02 10容量允差／mL ±0.6%×5 ±1.0%×1 ±1.0%×0.5 ±1.5%×0.2 ±4.0%×0.02 ±0.020不確定度u（v1）／mL 0.017 3 0.005 77 0.002 89 0.001 73 0.000 462 0.011 5溫度差異／℃溫度波動±4甲醇的膨脹系數(shù)／℃－1 1.2×10－3不確定度u（v2）／mL 0.013 9 0.002 77 0.001 39 0.000 554 0.000 055 4 0.027 7相對標準不確定度ur（v） 0.004 44 0.006 40 0.006 41 0.009 08 0.023 3 0.003 00

標準溶液在稀釋定容過程中，使用5 mL 移液器1次，1 mL移液器4次（吸取標液1mL3次，500 μL1次），200μL 移液器1次，20μL 移液器1次，10 mL容量瓶7次。則標準溶液配制過程中所使用的玻璃量器和移液器引入的相對標準不確定度為：

故標準溶液系列配制過程中所引入的相對標準不確定度為：

2.5 儀器引入的不確定度評定（A 類評定）

按照1.2.2實驗步驟制備6份平行樣品，每份樣品莠去津的添加濃度為50μg／kg。測定6份加標樣品的莠去津值見表3。

項目次數(shù)1 2 3 4 5 6 Xi／（μg／kg） 45.00 45.21 45.52 44.68 44.22 45.97平均值x／（μg／kg） 45.10

單次測量結(jié)果的標準偏差為：

因為在實際檢測樣品時一般只做兩個平行樣品，所以測量重復(fù)性引入的標準不確定度為：

由測量重復(fù)性引入的相對標準不確定度：

2.6 回收實驗準確度引入的不確定度ur（R）

項目次數(shù)1 2 3 4 5 6回 收 率／% 90.0 90.4 91.0 89.4 88.4 91.9平均回收率／% 90.2標準偏差／% 1.223 792

回收實驗測定結(jié)果見表4，按A 類不確定度，由加標回收率引入的標準不確定度為：

故由加標回收率引入的相對標準不確定度為：

2.7 計算合成不確定度

分量類別 來源 評定方法 分量數(shù)值ur（1） 樣品制備 B類評定 0.006 59 ur（2） 標準溶液配制 B類評定 0.029 5 ur（xi） 儀器重復(fù)性 A 類評定 0.009 67 ur（R） 回收實驗 A 類評定 0.005 54

根據(jù)不確定度來源分析，可知表5中各分量不確定度各自獨立，合成為：

所以

U（x）＝0.0322×45.10＝1.45μg／kg

2.8 擴展不確定度與測量結(jié)果表示

在95%置信水平下，取包含因子k＝2，則相對擴展不確定度為：U ＝2× U（x）＝2×1.45＝2.90μg／kg。結(jié)果表述：該樣品中莠去津殘留量為45.10μg／kg，則結(jié)果表述為（45.10±2.90）μg／kg。

3 結(jié)論

通過HPLC－MS／MS外標法測定大米中莠去津殘留量的不確定度分析，該測定方法的擴展不確定度為2.90μg／kg。各不確定度分量評定結(jié)果顯示，標準溶液配制引入的不確定度對合成不確定度的貢獻最大。因此，在檢測過程中應(yīng)規(guī)范標準溶液配制操作，盡可能減少標準溶液配制步驟降低測定結(jié)果的不確定度。