丁佳棟 張曉萍王媛 楊楠張麗娟 王藝媛 張曉晶 黃曉燕 趙小麗

1.甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州730000；2.蘭州大學(xué)，甘肅 蘭州730000

Rh血型系統(tǒng)是所有血型系統(tǒng)中已知的最復(fù)雜的［1］，最初發(fā)現(xiàn)的Rh血型只有D抗原，后來發(fā)現(xiàn)有55種抗原。在最初的輸血中，只提到ABO、RhD血型相合，后來發(fā)現(xiàn)的血型抗體中，除抗D外，最多的是抗Rh其他抗原的抗體，如抗E、抗C等，說明在RhD相合的血液中必定有很多Rh其他抗原不相合的血液輸注到患者體內(nèi)。不同地區(qū)而言，因?yàn)椴煌拿褡逍院偷赜蛐?，?dǎo)致了各個地區(qū)的Rh血型分布均有差異。所以，對于本地區(qū)的Rh血型的分布情況有必要進(jìn)行調(diào)查分析。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2019年1月1日至2019年6月30日，血液中心發(fā)往本院的RhD陽性血液標(biāo)本總共4034份。

1.2 試劑設(shè)備 抗人球蛋白卡由中山生科公司生產(chǎn)（批號20181101）；抗-A、抗B（批號20180717）、ABO細(xì)胞（批號20185348）、抗體篩選細(xì)胞（批號20197004）均由上海血液生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，Rh分型卡（批號201812003）由江蘇力博醫(yī)藥生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，抗體鑒定細(xì)胞紅細(xì)胞（16細(xì)胞系，批號201904 25）由江蘇中濟(jì)萬泰生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)。

1.3 Rh血型分型 采用微柱凝膠技術(shù)，將獻(xiàn)血員的血樣進(jìn)行Rh分型。將血液標(biāo)本離心分離，生理鹽水稀釋至試劑卡指定濃度（0.5%～1%），每孔加50μL稀釋，離心5分鐘觀察反應(yīng)結(jié)果。雙群血樣進(jìn)行二次離心，離心力為200g，離心5min，取白膜層進(jìn)行Rh抗原檢測，Rh基因型采用趙桐茂估算法公式［2］計(jì)算。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 所有數(shù)據(jù)利用SPSS2.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并對結(jié)果進(jìn)行χ2分析檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 Rh表現(xiàn)型的頻率 在4034份血液樣本中，出現(xiàn)了所有9種表現(xiàn)型，見表1。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)分析，A型、B型、O型的ccEE、ccEe、CcEE、CCee、Ccee、CCEe、ccee、CCEE這8種抗原的概率分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），A型和B型在CcEe的概率分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），B型和O型在CcEe的概率分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），A型和O型在CcEe的概率分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖1。

2.2 C、c、E、e抗原頻率 總體上，C、c、E、e抗原比例分別為87.43%、58.03%、46.13%、91.84%，各個血型之間略有不同。A型獻(xiàn)血員中C抗原和c抗原均與B型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），E抗原與B型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與O型有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。其中CC的比例為41.32%，cc的比例為12.74%，Cc的比例為45.94%，與B型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；E為純合子的比例為8.54%，e為純合子的比例為50.69%，與B型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），E、e為雜合子的比例為40.77%，與B型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。B型獻(xiàn)血員中E抗原與O型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。其中CC的比例為43.68%，cc的比例為13.39%，Cc的比例為42.93%；EE的比例為8.60%，ee的比例為54.27%，Ee的比例為37.17%。O型獻(xiàn)血員中CC的比例為41.32%，cc的比例為12.74%，Cc的比例為45.93%；EE的比例為8.54%，ee的比例為50.69%，Ee的比例為40.77%。見表2。

2.3 RhCE基因頻率 總體上，RhC、Rhc、RhE、Rhe基因頻率為64.69%、35.31%、28.26%、71.74%，各型之間略有不同。A型獻(xiàn)血員、B型獻(xiàn)血員、O型獻(xiàn)血員中RhC、Rhc、RhE、Rhe基因頻率分別為：64.67%、35.32%、28.61%、71.39%；65.19%、34.88%、27.21%；72.87%、64.29%、35.71%、28.93%、71.38%并且ABO型之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖2。

表1 Rh表型分布規(guī)律

圖1 Rh血型分布規(guī)律

2.4 RhCE基因在染色體上分布規(guī)律的推測 A型獻(xiàn)血員中，C、e在一條染色體，c、E在另一條染色體的概率最低為54.70%，最高為92.66%；反之，C、E在一條染色體，c、e在另一條染色體的概率最低為7.34%，最高為45.30%。A型與O型之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

B型獻(xiàn)血員中，C、e在一條染色體，c、E在另一條染色體的概率最低為59.12%，最高為91.44%；反之，C、E在一條染色體，c、e在另一條染色體的概率最低為8.56%，最高為40.88%。B型與A型之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）、B型與O型之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 C、c、E、e抗原分布［例（%）］

圖2 RhCE基因頻率

O型獻(xiàn)血員中，C、e在一條染色體，c、E在另一條染色體的概率最低為55.96%，最高為92.11%；反之，C、E在一條染色體，c、e在另一條染色體的概率最低為7.89%，最高為44.04%。見圖3。

圖3 RhCE基因在染色體上的分布

3 討論

Rh血型是人類已知血型系統(tǒng)中最復(fù)雜的血型系統(tǒng)，現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)的抗原已經(jīng)有55個，其中，最重要的是D抗原，其次為E、C、c、e抗原。Rh抗原是由位于1號染色體短臂上的兩個緊密連鎖的基因所編碼 。C抗原、c抗原、E抗原、e抗原陽性率分別為：87.43%、58.03%、46.13%、91.84%，這與江曉明［3］等類似，與莫秋紅［4-6］不符。與本研究不同的是，杜肖剛［5］、黃燕雪［6］的研究僅對C、E抗原進(jìn)行檢測，而未對c、e抗原進(jìn)行檢測。

對本地區(qū)RhCcEe抗原分布情況分析，可以為患者尋找Rh血型相合的血液，估計(jì)患者輸注難易程度，為疑難配血提供臨床依據(jù)，減少不規(guī)則抗體的產(chǎn)生［7-9］。陳婉璐等［10］對云南傣族和漢族的Rh血型進(jìn)行分析，但是樣本量過小（200例），有很多表現(xiàn)型未檢出。

本研究包含的4034份樣本中出現(xiàn)了9種Rh血型組合，即ccEE、ccEe、CcEe、CcEE、CCee、Ccee、CCEe、ccee、CCEE。但是，CCEE這種表現(xiàn)性出現(xiàn)的概率很低，總共有2份標(biāo)本，但是在不同的研究中表現(xiàn)出的概率不同，李育等［11］的研究中，3499份獻(xiàn)血者中沒有發(fā)現(xiàn)CCEE表型的獻(xiàn)血者，而在4210例受血者中卻發(fā)現(xiàn)了6例CCEE表型的患者。出現(xiàn)概率最多的是CCee、其次是CcEe，這與莫秋紅等研究類似［4-6，10-11，14］。其中，B型CcEe表現(xiàn)型的個體與A型和O型之間有顯著性差異，提示在臨床配血工作中不同血型之間的分布規(guī)律可能有差異，而莫秋紅等［4-6，10］均未對ABO不同血型之間的Rh血型進(jìn)行分析，李育等［5］雖然體現(xiàn)了不同血型之間的Rh血型的概率，但未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

莫秋紅［4］、陳婉璐［10］、李育［11］、陳榮倉［12］、唐舞［13］、王劍鋒［14］，孫蕊娟［15］，馬婷［16］RhD陽性者分別有2050、200、7709、765、1728、3419、5052、51 283例，所以，之間作對比會有不同。杜肖剛等［6］和黃燕雪等［6］的研究對象分別有14 549例、27 049例，但是，兩者均只檢測C、E抗原，未檢測c、e抗原。

Rh抗原中C抗原出現(xiàn)的概率遠(yuǎn)大于c抗原（87%/58%），e抗原出現(xiàn)的概率遠(yuǎn)大于E抗原（92%/48%），與莫秋紅等［4］相似。但是，A型、B型、O型3個血型中還是存在差異性，可能的原因是RhCE基因是連鎖在一條染色體上的，RhCE基因在人群中的分布是均衡的，而在遺傳時會因?yàn)檫B鎖的原因?qū)е路植疾痪Ｒ虼?，在從事臨床輸血工作時，應(yīng)當(dāng)注意不同血型之間的差異，尋找Rh血型相合的血液。

本研究發(fā)現(xiàn)，4034個標(biāo)本中，RhC、Rhc、RhE、Rhe基因的概率分別為：64.69%、35.31%、28.26%、71.74%，且A型、B型、O型3個血型之間沒有顯著性差異。與莫秋紅等［4］研究不同，可能的原因?yàn)槠溲芯繉ο鬄閴炎?，有民族差異性?/p>

由于本研究實(shí)驗(yàn)條件不允許，所以未做RhCE基因的分析，無法確定其單倍體的基因型。因此，做“基因偏好性”推測，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得知，除CcEe基因型的個體外，單倍體RhCe/RhcE的概率為87.65%，單倍體RhCE/Rhce的概率為12.25%。另外，排除了CcEe基因型的情況，由于CcEe基因型的個體未做基因分型，不能區(qū)分RhCE基因的排布，可以假設(shè)兩種極端情況，即第一種情況：全部CcEe的個體中單倍體全為RhCe和RhcE；第二種情況：全部CcEe的個體單倍體全為RhCE和Rhce；分別算出概率即為最低和最高的概率。根據(jù)計(jì)算單倍體RhCe/RhcE的概率最低為55.96%，最高為92.11%；而反之，單倍體RhCE/Rhce的概率最低為7.89%，最高為44.04%。由此可以得出，即使在最極端的情況下，單倍體RhCe/RhcE的概率仍然大于50%，最高可達(dá)92.11%，說明C、e可能存在“偏好性”，容易出現(xiàn)在同一條染色體上，這有待下一步的試驗(yàn)證明。莫秋紅［4］報(bào)道RhCe概率為81.34%，但是CcDEe表型的患者未見其進(jìn)行基因分析以確定單倍體概率，其他研究［12、15-16］也是同樣的情況，所以其單倍體概率不準(zhǔn)確，必須經(jīng)過基因分型才能確定CcDEe表型樣本的基因型。本研究日后的一個目標(biāo)就是將RhCE基因的單倍體型進(jìn)行分析，從而準(zhǔn)確地得到各個單倍體的概率。

另外，本研究所選取的標(biāo)本均來自血液中心發(fā)放的血液標(biāo)本，僅代表健康獻(xiàn)血員的表型，對于臨床中需要輸血的患者，我們正在統(tǒng)計(jì)Rh血型并進(jìn)行分析。本實(shí)驗(yàn)中排除了AB型血液是由于例數(shù)太少，今后的研究中會進(jìn)行補(bǔ)充。

本研究發(fā)現(xiàn)，Rh抗原分布，其中CCDee血型為最常見的，其次是CcDEe，Rh抗原中C＞c、e＞E，且不同血型之間存在差異性。RhCE基因分布，RHCE基因中RhC＞Rhc、Rhe＞RhE，且不同血型之間存在差異性。RhCE基因單倍體分布推測，RHCE基因中單倍體RhCe/RhcE占大多數(shù)，單倍體RhCE/Rhce較稀有。

（本文編輯：馬佰菁）