楊楠 王藝媛 黃曉燕 趙小麗 張曉晶 張曉萍

甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州730000

外周血造血干細胞移植（peripheral blood hematopoietic stem cell trans plantation，PBSCT）因其外周血干細胞采集、凍存方便，安全性高［1-2］，移植后患者免疫和造血系統(tǒng)功能重建較快，移植相關(guān)的死亡率低，已成為治療惡性血液病及免疫性疾病的重要手段［3-4］。外周血造血干細胞（peripheral blood hematopoietic stem cell，PBSC）的質(zhì)量和數(shù)量是影響PBSCT成功的關(guān)鍵因素之一。目前，國內(nèi)外對不同血細胞分離機PBSC采集效果的報道較多，但對COBE Spectra血細胞分離機MNC和Auto PBSC程序采集效果的報道并不多見。本研究回顧了我院2017年1月～2019年12月應(yīng)用COBE Spectra血細胞分離機兩種采集程序?qū)?6例患者進行149次PBHSC采集，對采集效果、采集前后部分血常規(guī)指標的變化和采集過程中發(fā)生的不良反應(yīng)進行了回顧性分析評估，現(xiàn)報道如下。

1 材料和方法

1.1 一般資料 選擇2017年1月至2019年12月，利用COBE Spectra血細胞分離機的MNC和Auto PBSC程序采集我院血液科患者外周血自體干細胞66例（共149人次），年齡17～66歲，平均（43.5±9.19）歲，其中男性38例，女性28例，多發(fā)性骨髓瘤（Multiplem yeloma，MM）19例，非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma，NHL）15例，霍奇金淋巴瘤（Hodgkin lymphoma，HL）4例，急性髓系白血?。╝cute myelocytic leukemia，AML）23例，急性淋巴細胞白血?。╝cute lymphoblastic leukemia，ALL）5例。按照COBE Spectra血細胞分離機采集程序的不同分為Auto PBSC組和MNC PBSC組。兩種采集程序的患者在年齡、性別和疾病種類方面均無顯著性差異。見表1。

表1 兩種采集程序患者臨床特征

1.2 采集前準備 患者化療結(jié)束后每日檢測血常規(guī)，當白細胞計數(shù)（WBC）下降至最低點后每日皮下注射粒細胞集落刺激因子（G-CSF）5～10μg/（kg·d），連續(xù)5d動員造血干細胞，當WBC達到2～5×1010/L后開始采集PBHSC，具體情況遵循醫(yī)囑。

1.3 采集方法 COBE Spectra Auto PBSC程序（以下簡稱Auto程序），COBE Spectra MNC程序（以下簡稱MNC程序）。不同程序的采集方法按照COBE Spectra血細胞分離機操作說明書進行操作，儀器完成初始化管路預沖后根據(jù)患/供者性別、身高、體重、紅細胞壓積、白細胞計數(shù)、淋巴及單核細胞比例等參數(shù)進行分離機不同程序參數(shù)的設(shè)置。其中Auto PBSC程序采集的收獲量為3～5mL，追趕量為3～5mL，最終產(chǎn)物體積=（收獲量+追趕量）×收獲次數(shù)；COBE Spectra血細胞分離機MNC程序基本步驟同Auto PBSC程序，但需要通過目測比色法調(diào)節(jié)血漿泵的流速進行外周血造血干細胞的采集，最終產(chǎn)物體積=采集界面建立后至總循環(huán)血量結(jié)束所需時間對應(yīng)的毫升數(shù)。一般均連續(xù)采集2～3次，以達到預期PBSC為準。所有患者采集的單個核細胞計數(shù)（MNC）數(shù)大于4×108/kg為達標，停止繼續(xù)采集。

患者一般采取雙側(cè)肘靜脈進行穿刺建立閉合雙針連續(xù)循環(huán)通路，部分患者采取深靜脈置管建立循環(huán)通路采集外周血造血干細胞。采集前患者均給予口服10%葡萄糖酸鈣20mL或靜脈滴注葡萄糖酸鈣，防止枸櫞酸鈉引起的低鈣反應(yīng)，嚴密觀察患者精神狀態(tài)、血壓、心率等指標變化以及手口麻木情況，根據(jù)患者出現(xiàn)的情況及時進行相應(yīng)處理。

1.4 觀察指標 全血處理量、采集時間、抗凝劑用量、采集前后部分血常規(guī)指標的變化、采集過程中出現(xiàn)的不良反應(yīng)。

1.5 統(tǒng)計學分析 采用SPSS19.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，一般信息和臨床特征應(yīng)用描述性統(tǒng)計進行總結(jié)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同程序?qū)BHSC采集結(jié)果的影響 Auto程序與MNC程序相比，兩者總循環(huán)血量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；使用Auto程序采集結(jié)束后，采集物體積比使用MNC程序減小約53.1%，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；抗凝劑用量比使用MNC程序增加約30.1%，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；采集時間比使用MNC程序增加約15.5%，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；采集物MNC數(shù)比使用MNC程序減少約15.0%，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.2 不同程序采集干細胞后患者部分血常規(guī)指標的變化 所有患者每次PBSC采集結(jié)束后監(jiān)測血常規(guī)。兩種程序采集結(jié)束后，與正常血常規(guī)相比，患者白細胞計數(shù)（WBC）均有所升高，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；血紅蛋白（Hb）均小幅度減少，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；紅細胞壓積（HCT）均小幅度減少，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；血小板計數(shù)（PLT）均有所降低，但Auto程序采集后PLT的降低程度小于MNC程序，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；淋巴細胞計數(shù)（LY）均小幅度增加，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；中性粒細胞計數(shù)（NEUT）均有所增加，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表3。

表2 不同程序采集效果

表3 不同程序采集結(jié)束后部分血常規(guī)指標的變化值

2.3 不良反應(yīng)情況觀察 66例患者在PBSC采集過程中，均未出現(xiàn)嚴重的不良反應(yīng)；其中5例出現(xiàn)程度不一的低鈣反應(yīng)，表現(xiàn)為口唇、面部麻木，給予口服或靜脈滴注10%葡萄糖酸鈣后癥狀緩解或消失，所有患者均順利采集完成。兩種采集程序的不良反應(yīng)的發(fā)生率無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。

3 討論

采集物中的單個核細胞計數(shù)MNC和CD34+細胞計數(shù)是判斷采集效果的重要指標，但有研究表明，CD34+細胞的計數(shù)受流式細胞儀操作人員和不同檢測機構(gòu)檢測水平的影響較大，對同一樣本的檢測結(jié)果可能存在較大偏差［5］。因此，本研究中主要以單個核細胞計數(shù)MNC是否達標作為采集結(jié)束的標志。目前臨床上用于采集PBSC的血細胞分離機主要有COBE Spectra、Spectra Optia、Baxter CS3000和Haemonetics MCS+［6］，而國內(nèi)目前COBE Spectra和Spectra Optia血細胞分離機最為常見。有研究表明不同血細胞分離機對PBSC的采集效果存在一定的差異［7-8］。目前對COBE Spectra血細胞分離機不同采集程序?qū)BHSC的采集效果、不良反應(yīng)發(fā)生率和對血常規(guī)部分指標影響的報道并不多見。本研究回顧性分析了66例患者149次PBSC的采集效果。結(jié)果顯示：在采集效果方面COBE Spectra血細胞分離機的Auto程序與MNC程序在PBHSC的采集過程中，兩者的血液總循環(huán)量基本在12500mL左右，無顯著性差異。但Auto程序采集后相比MNC程序，終產(chǎn)物體積減小約53.1%；抗凝劑用量增加約30.1%；采集時間延長約15.5%；MNC數(shù)減少約15.0%，這與曾豐等［9］的研究結(jié)果一致。單從采集效果方面來看，MNC程序抗凝劑用量少，可以減少患者因枸櫞酸鹽引起低鈣反應(yīng)的概率；采集時間較短，可以減少患者因長時間保持一個姿勢采集而引起的肌肉酸痛或煩躁焦慮等情況；MNC計數(shù)較多，增加了PBSC采集的有效率，減少了因采集量不夠而繼續(xù)采集的頻率；終產(chǎn)物體積雖然是Auto程序采集后體積的兩倍，但是我科在凍存干細胞過程中采用低溫離心濃縮技術(shù)，去除了多余的血漿，兩種采集程序采集的PBSC經(jīng)過離心濃縮后終體積只與MNC計數(shù)相關(guān)。MNC程序采集后經(jīng)過低溫離心完全可以避免因凍存劑（二甲基亞砜）過量導致的不良反應(yīng)。因此，從PBSC的采集效果來看，MNC程序要優(yōu)于Auto程序，但是需要工作人員目測比色，隨時調(diào)節(jié)血漿泵流速控制采集效果，對采集人員的技術(shù)和經(jīng)驗要求較高。

從對患者血常規(guī)部分指標的影響來看：采用Auto程序和MNC程序采集結(jié)束后，患者白細胞計數(shù)小幅度升高，血紅蛋白小幅度減少，紅細胞壓積小幅度減少，淋巴細胞計數(shù)小幅度增加，中性粒細胞計數(shù)小幅度增加，差異均無統(tǒng)計學意義；表明兩種采集程序在采集和回輸過程中紅細胞沒有明顯的損失，在后續(xù)采集過程中，參數(shù)WBC、Hb、HCT、LY和NEUT的設(shè)置沒有大幅度的波動，采集結(jié)果相對穩(wěn)定。但使用MNC程序采集后，患者PLT的降低程度明顯高于Auto程序，血小板丟失率高，表明Auto程序更適合于采集血小板較低患者的PBSC，可以避免因血小板的過度丟失而引起的繼發(fā)性出血威脅患者生命。

從發(fā)生不良反應(yīng)的情況來看：66例患者在PBSC采集過程中，均未出現(xiàn)嚴重的不良反應(yīng)；對少數(shù)患者出現(xiàn)的低鈣反應(yīng)給予口服或靜脈滴注10%葡萄糖酸鈣后癥狀緩解或消失，所有患者均能夠順利完成采集，兩種采集程序的不良反應(yīng)的發(fā)生率無統(tǒng)計學差異。

血液科患者多數(shù)為貧血或血小板計數(shù)低，因此在選擇管路時需要綜合考慮患者血小板的計數(shù)的高低、患者可能耐受的采集時間以及工作人員的實際情況等多方面的因素，盡可能為不同的患者選擇最合適的采集程序，在保證采集效果和患者安全的條件下，優(yōu)化采集次數(shù)，降低患者經(jīng)濟負擔，為不同的患者選擇合適的采集程序，以達到最佳采集結(jié)果。本研究不足是病例數(shù)據(jù)較少，還需要我們收集更多資料，進行前瞻性研究，為優(yōu)化PBSC的采集提供一定的數(shù)據(jù)支持。