李作標 蔣梁貴 李明意

顯齒蛇葡萄為葡萄科的木質(zhì)藤本植物，廣泛分布于我國多數(shù)地區(qū)，作為中草藥已有數(shù)百年歷史，其葉中主要有效成分為蛇葡萄素、二氫楊梅素（DMH）等［1］。而其中二氫楊梅素是一種較為特殊的黃酮類化合物，同時具有提高SOD活性、清除自由基、抗栓、降低血脂血糖、控制血壓及抗腫瘤等多種功效，尤其在維持肝臟正常功能、保護肝細胞及預(yù)防酒精肝等具有顯著效果［2-5］。近年來研究發(fā)現(xiàn)二氫楊梅素在多種腫瘤的作用上具有明顯的抑制效果，現(xiàn)對二氫楊梅素的抗腫瘤機制進行綜述。

1 DHM在阻滯腫瘤細胞周期中的作用與機制

細胞周期的進程分為間期（G1期、S期、G2期）、分裂期（M期）和靜止期（G0期），其周期的正常運作由多種作用機制調(diào)控以確保細胞分裂的有序進行，若此中任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常，則細胞周期的進程出現(xiàn)終止。細胞周期的調(diào)控中樞是通過Cyclin?CDK?CDI的機制調(diào)控來實現(xiàn)的，而CDK抑制因子（CKI）基因有cyclin、p16等正調(diào)控因子或P53、P21等負調(diào)控因子。正調(diào)控基因過度表達或負因子的缺失將造成細胞周期各檢驗點閾值下調(diào)及功能減弱，從而導(dǎo)致細胞對外源性調(diào)節(jié)信號反應(yīng)敏感性下降［6，7］。如今不少的研究表明，二氫楊梅素抗腫瘤機制大多是以抑制腫瘤細胞周期于G2/M期、G1/S期，從而抑制其細胞增殖實現(xiàn)的。黃海麗等通過實驗，以濃度梯度的DHM（0、2、10、50、100、200 μm）分別作用HepG2、Hep3B兩種細胞48 h，用流式分析儀分別測得兩種肝癌細胞在不同濃度DHM培養(yǎng)下，兩株肝癌細胞的G2/M期細胞比例不斷增高，細胞有絲分裂在G2/M期被明顯抑制，而其實驗進一步證實二氫楊梅素可以使CDKl/cyclin B1聚合體失活，進而導(dǎo)致腫瘤細胞停止增殖［8］。而岑鈞華等研究也表明肝癌細胞HepG2在DHM的作用下其G2/M期細胞比例顯著上升、S期細胞比例下降［9］。因此，DHM的具體機制可能與多種參與細胞凋亡、氧化應(yīng)激和炎癥的分子有關(guān)，如AMP活化蛋白激酶（AMPK）、有絲分裂原活化蛋白激酶（MAPK）、蛋白激酶B（Akt）、核因子?κB（NF?κB）、核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）、ATP結(jié)合盒等轉(zhuǎn)運蛋白A1（ABCA1）、過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）等［10］。如DHM能使乳腺癌細胞周期阻滯于G2/M期［11］；用DHM對A549細胞處理后，不同作用時間檢測該細胞的細胞周期時，G2/M期的比率明顯增加［12］。

2 DHM抑制腫瘤細胞凋亡的信號通路

細胞凋亡途徑包括外源性及內(nèi)源性兩種途徑，前者是由TNF?α、FAS?L等受體所介導(dǎo)，而后者利用線粒體作為誘導(dǎo)細胞凋亡的主要場所，通過調(diào)控其外膜的通透性來進行介導(dǎo)。當(dāng)各種應(yīng)激反應(yīng)、DNA損傷、異常細胞信號出現(xiàn)時，會引起B(yǎng)ax的活化，在該蛋白的調(diào)控下，線粒體外膜的通透性增加，細胞色素C被釋放到胞質(zhì)中，在dATP的存在下，與Apaf?1結(jié)合，使Apaf?1暴露其Card結(jié)構(gòu)域，并與Procaspase?9的Card結(jié)合形成凋亡復(fù)合體，進而激活Caspase?9，后者進一步激活Caspase?3，從而引起細胞凋亡。而Bcl?2的作用與Bax則恰恰相反，以抑制細胞色素C釋放，從而切斷細胞凋亡的進程，所以控制Bcl?2的表達對腫瘤細胞的凋亡具有重要影響［13］。正因為Bcl?2與Bax的反向作用，當(dāng)細胞接受刺激后，二者的比率決定細胞的存亡［14］。左彥珍等研究發(fā)現(xiàn)DHM通過調(diào)控Bcl?2/Bax凋亡通路從而誘導(dǎo)人絨毛膜癌細胞（JAr）凋亡，DHM濃度越高，JAr細胞中Bax蛋白表達量越高，而Bcl?2蛋白表達則減少，從而引發(fā)JAR細胞發(fā)生凋亡［12］。舒洋研究發(fā)現(xiàn) DHM 能使HepG2，QGY7701，Hepal?6、MHcc97L四種肝癌細胞的p53蛋白表達明顯升高，從而激活bax與bak，并抑制Bcl?2的表達，進而激活caspase?3最終導(dǎo)致腫瘤細胞凋亡，且該調(diào)控作用具有劑量依賴性特點［14］。王滿英等人通過實驗研究發(fā)現(xiàn)用DHM處理人頭頸鱗癌SCC?25細胞，細胞的凋亡隨藥物濃度和反應(yīng)時間增加而增加，通過WB檢測發(fā)現(xiàn)，被DHM處理后的SCC?25細胞中，CL?PARP、Bax、CL?caspase3等蛋白表達水平增加，而Bcl?2則相反［15］。另外研究發(fā)現(xiàn)DHM可以在體外通過激活Bax/Bcl?2參與調(diào)控的凋亡通路，從而誘導(dǎo)非小細胞肺癌A549細胞的凋亡［12］。

3 DHM抑制腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移機制

根據(jù)目前病例統(tǒng)計有80%以上的癌癥患者死于腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，是癌癥患者致死的主要原因［16］。腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程主要有：①腫瘤細胞粘附性下降，從原病灶中游離；②腫瘤細胞與ECM粘附性提高；③腫瘤細胞分泌降解酶降解ECM，形成細胞轉(zhuǎn)移通道，從而誘導(dǎo)血管生成；④腫瘤移動性提高，穿透ECM，通過血管基底膜侵入體內(nèi)循環(huán)；⑤在循環(huán)中躲避免疫系統(tǒng)殺滅；⑥轉(zhuǎn)移到新的器官組織后，在新血管形成的基礎(chǔ)下分裂生長，進而完成侵襲轉(zhuǎn)移。ECM作為腫瘤細胞遷移的天然屏障，從原位灶增殖到轉(zhuǎn)移的進程須具有降解ECM的能力，而ECM降解酶類分為MMPs家族、絲氨酸蛋白酶、天冬門氨酸蛋白酶、caspase家族。如今MMPs的研究結(jié)果證實其是以降解ECM及細胞基底膜，從而使癌細胞獲機從基底膜破潰處、基質(zhì)之間的空缺侵襲到周圍組織器官。有研究表明，DHM可通過對TNF?α/P38MAPK/MMP?2信號通路的阻制，從而使骨肉瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移受阻［17］。DHM對人視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細胞（ARPE?19）遷移和轉(zhuǎn)移促進蛋白的影響。研究結(jié)果顯示DHM通過減少基質(zhì)金屬蛋白酶?2（MMP?2）的表達來抑制人視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細胞（ARPE?19）的侵襲和遷移，這個過程是通過降低磷酸化c?Jun N末端激酶1/2的水平，認為DHM通過抑制MMP?2的表達抑制RPE細胞的遷移［18］。周防震等也通過研究證實，DHM以不同梯度濃度的方式（0、20、40、80mg/L）作用于乳腺癌腫瘤細胞（MDA?MB?231），可以使胞內(nèi)MMP?2/?9蛋白的表達均明顯下降，進而抑制腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移，但是其研究也表明了隨著DHM濃度升高時，MMP?2/?9 mRNA表達出現(xiàn)先下降后升高，提示MMP?2/?9蛋白表達和其mRNA表達可能通過負反饋調(diào)節(jié)機制而起作用［19］。邱志東等研究報告DHM可通過抑制肝癌細胞MHCC97L的MMP?9蛋白表達，使降解細胞外基質(zhì)和基底膜的途徑受阻，同時抑制VEGF蛋白的表達，使繼發(fā)灶新血管的生成受阻，另有研究認為DHM通過上調(diào)E?cadherin的表達，維持腫瘤細胞的完整性，從而抑制肝癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移［20］。而張慶余等人發(fā)現(xiàn)DHM通過降低MMP?9蛋白的表達，顯著抑制肝癌SK?Hep?1和MHCC97L細胞的遷移侵襲，而MMP?9蛋白表達下調(diào)則與SK?Hep?1和MHCC97L細胞內(nèi)PKC?δ蛋白質(zhì)水平的增加及p38、ERK1/2和JNK的磷酸化被抑制密切相關(guān)［21］。同時二氫楊梅素還能通過調(diào)控JNK通路抑制MMP?2的表達及逆轉(zhuǎn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，進而抑制人胃癌MKN45細胞的侵襲與轉(zhuǎn)移［22］。

4 DHM在聯(lián)合用藥中的作用

二氫楊梅素來自植物成分，作為抗腫瘤藥物，具有高效、低毒、低副作用的特點，目前研究的側(cè)重點對其聯(lián)合用藥抗腫瘤機制有更深層次的探究。多項研究表明，二氫楊梅素多藥聯(lián)合應(yīng)用較單藥應(yīng)用的抗腫瘤效果更強。王進峰等研究發(fā)現(xiàn)，單獨使用DHM對前列腺癌的抑制作用較弱，在高藥物濃度下，仍不能達到明顯的抑癌效果，然而在聯(lián)合順鉑后，即使在低濃度的DHM（10μmol/L）作用下，也可顯著提高各濃度順鉑的抗腫瘤敏感性，使低濃度下的順鉑（2μmol/L）也能對前列腺癌細胞產(chǎn)生明顯的殺傷效果［23］。Jiang L等研究發(fā)現(xiàn)DHM通過P53/BCL?2通路增強奈達鉑在肝癌細胞系中化學(xué)敏感性，同時減少奈達鉑對正常肝細胞的損傷進而起到保護正常肝細胞的功能［24］。吳明彩等也通過實驗證實，二氫楊梅素聯(lián)合絲裂霉素對胃癌細胞SCG?7901的生長具有更明顯的抑癌作用，其機制是通過下調(diào)Bcl?2和Survivin兩種蛋白的表達來實現(xiàn)［25］。另有研究發(fā)現(xiàn)，DHM通過對p38?STAT1信號通路的調(diào)控，增強ATRA（全反式維甲酸）的對白血病NB4細胞的化學(xué)敏感度，進而加強對癌細胞生長的抑制［26］。

5 總結(jié)與展望

二氫楊梅素是從藤茶的莖葉中提取出來的黃酮類化學(xué)物，其抗腫瘤機制繁多且十分復(fù)雜，如今對于二氫楊梅素抑制細胞凋亡的研究目前仍較少，且也多停留于實驗階段，缺少相關(guān)活體動物實驗，同時臨床藥物應(yīng)用研究也缺乏。中藥的應(yīng)用是我國數(shù)千年的智慧沉淀，尤其在2019年爆發(fā)的新型冠狀病毒，對中草藥的應(yīng)用更上一個臺階，故今后對二氫楊梅素應(yīng)進一步加強其相關(guān)臨床藥物研究，在提高其溶解性、儲存穩(wěn)定性的同時，也要側(cè)重于對其結(jié)構(gòu)修飾，從而提高其藥物活性，以期得到臨床與實驗相一致的結(jié)果。