陳求芳，郭麗冰，蔡東鵬，劉澤德，周麗莎，王熙文

（廣東藥科大學(xué)中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006）

多枝霧水葛Pouzolzia zeylanica（L.）Benn.var.microphylla（Wedd.）W.T.Wang.為蕁麻科霧水葛屬植物，為我國南方地區(qū)一種常用民族傳統(tǒng)藥物，主要用于急性乳腺炎及各種化膿性皮膚感染的治療。前期研究結(jié)果表明，多枝霧水葛總黃酮提取物能抑制皮下膿腫增長，促進(jìn)傷口愈合，是該植物活性部位［1］，故本實(shí)驗(yàn)以其為原料研制一種治療化膿性皮膚感染的凝膠膏劑，以載藥量大的水溶性高分子材料為基質(zhì)，可減小對皮膚過敏刺激反應(yīng)，并能提高藥物局部生物利用度。然后，選擇初黏力、持黏力、外觀、膜殘留性等作為評價(jià)指標(biāo)，正交試驗(yàn)優(yōu)化基質(zhì)配方，結(jié)合多枝霧水葛總黃酮提取物溶解性能，并針對交聯(lián)速度、藥粉用量、交聯(lián)時(shí)間、干燥時(shí)間等因素通過均勻設(shè)計(jì)優(yōu)化成型工藝，并建立HPLC 法測定總黃酮含有量，為其凝膠膏劑制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究提供依據(jù)。

1 材料

初黏力測試儀（華國精密檢測設(shè)備廠）；DK-5 膠帶持黏性測試儀（深圳衛(wèi)力實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；JJ-1 精密增力電動(dòng)攪拌器（金壇區(qū)西城新精密儀器廠）；SPD-20A 檢測器、LC-20AT 高效液相色譜儀（日本島津企業(yè)管理有限公司）。

多枝霧水葛總黃酮提取物（自制，總黃酮含有量58%）。聚丙烯酸鈉（分子量500 萬～700 萬，上海阿拉丁生化科技有限公司）；甘油、1，2-丙二醇、聚乙二醇800、羧甲基纖維素為分析純（天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；D-山梨醇（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；聚乙烯醇、氫氧化鋁、三氯化鋁、高嶺土（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；卡波姆980（路博潤特種化工有限公司）；甘羥鋁（日本協(xié)和化學(xué)株式會社）。芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-葡萄糖苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、槲皮素-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、山柰酚-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）對照品均為自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 含藥凝膠膏劑制備 取總黃酮提取物1 g，超聲分散于10.44 g 蒸餾水中，加入卡波姆980 攪勻，作為A 相；另取聚丙烯酸鈉、甘羥鋁、高嶺土分散于甘油，攪拌，作為B 相，將A 相加到B 相中，攪拌均勻使其充分交聯(lián)后均勻涂展于4 塊5 cm×5 cm 無紡紗布背襯層，50 ℃烘箱中烘6 h，放冷，蓋膜，鋁塑薄膜袋封袋包裝，即得。

2.2 質(zhì)量評價(jià)

2.2.1 初黏力測定［2］采用初黏力測定儀。將供試品置于傾斜板（傾斜角30°）中央，膏面向上，斜面上部10 cm、下部15 cm 用0.025 mm 厚滌綸薄膜覆蓋，中間留出5 cm，記錄供試品能黏住的鋼球號碼。初黏力最強(qiáng)的為13 號小球，設(shè)定為100 分，12 號為90 分，11 號為80 分，以此類推，重復(fù)3 次，取平均值。

2.2.2 持黏力測定 將凝膠膏裁剪成8.0 cm×3.8 cm 的塊狀，除去薄膜，將凝膠膏防黏層平行于板的方向粘貼在緊挨著的試驗(yàn)板和加載板中部（兩者均為已清潔的不銹鋼板，厚1.5 mm，長125 mm，寬50 mm，表面粗糙度不大于0.4 μm），壓輥（為橡膠包裹的鋼軸，重2 000 g）來回滾動(dòng)壓緊，確保粘接處無氣泡，垂直懸掛放置，并于底端自由端懸100 g 砝碼，用手托住，放開砝碼的同時(shí)記錄下凝膠膏滑移與試驗(yàn)板完全脫離的時(shí)間，重復(fù)3 次，取平均值。

2.2.3 綜合感官評分［3］從均勻性、涂展性、膜殘留性、滲出性、皮膚追隨性5 個(gè)方面進(jìn)行評估，每個(gè)方面占20分，滿分100 分。

2.2.3.1 均勻性 膏體是否均勻，稠度是否適宜，涂布在無紡布后是否無顆粒狀或氣泡，是否細(xì)膩，分為差、較差、一般、較 好、好5 個(gè)級別，分別對應(yīng)0、5、10、15、20 分。

2.2.3.2 涂展性 基質(zhì)利于展開涂布，方便成型，膠體均勻，分為差、較差、一般、較好、好5 個(gè)級別，分別對應(yīng)0、5、10、15、20 分。

2.2.3.3 膜殘留性 膏體揭離皮膚時(shí)無殘留并能保持凝膠膏劑性狀，反復(fù)揭開，黏貼于手腕背部，重復(fù)3 次，揭開或黏貼的間隔時(shí)間5 min，末次觀察有無殘留，分為大量殘留、殘留、少量殘留、極少量殘留、無殘留5 個(gè)等級，分別對應(yīng)0、5、10、15、20 分。

2.2.3.4 滲出性 膏體有少量液體滲出，較多液體滲出為差，分為差、較差、一般、較好、好5 個(gè)級別，分別對應(yīng)0、5、10、15、20 分。

2.2.3.5 皮膚追隨性 將成型凝膠膏劑貼于手腕背部，用力甩10 下不脫落，分為差、較差、一般、較好、好5 個(gè)級別，分別對應(yīng)0、5、10、15、20 分。

2.3 基質(zhì)處方篩選 在查閱文獻(xiàn)［4］、預(yù)實(shí)驗(yàn)、單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以初黏力、持黏力、綜合感官（均勻性、涂展性、膜殘留性、滲出性、皮膚追隨性）為評價(jià)指標(biāo)，考察對凝膠基質(zhì)影響較大的卡波姆980 與聚丙烯酸鈉比例（A）及甘羥鋁（B）、高嶺土（C）、甘油（D）用量，正交試驗(yàn)篩選基質(zhì)處方，因素水平見表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平

然后，賦予3 個(gè)評價(jià)指標(biāo)加權(quán)值分別為40、30、30［5］，計(jì)算綜合評分，公式為綜合評分＝初黏力／最大值×0.4＋持黏力／最大值×0.3＋綜合感官／最大值×0.3，結(jié)果見表2，方差分析見表3。由此可知，各因素影響程度依次為B＞D＞A＞C，其中因素B（甘羥鋁用量）有顯著影響（P＜0.05），其他因素?zé)o顯著影響（P＞0.05），最優(yōu)基質(zhì)處方為A2B3C1D2，即卡波姆980-聚丙烯酸鈉-甘羥鋁-高嶺土-甘油＝1.5%∶2.5%∶0.8%∶3%∶40%。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

表3 正交試驗(yàn)方差分析

2.4 成型工藝優(yōu)化 在正交試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以攪拌頻率（X1）、藥粉用量（X2）、交聯(lián)時(shí)間（X3）、干燥時(shí)間（X4）為影響因素，評價(jià)指標(biāo)同“2.3”項(xiàng)，U6（64）均勻設(shè)計(jì)表優(yōu)化制備工藝，因素水平見表4，結(jié)果見表5。

然后，通過SPSS21.0 軟件進(jìn)行逐步回歸，得方程為綜合評分Y＝85.790＋8.968X2＋0.104X3－1.462X4，相關(guān)指數(shù)R＝0.877，F(xiàn)＝2.227，P＜0.000 5，表明模型具有顯著性，而且攪拌頻率（X1）不在方程中，故不予以考慮。由此可知，最優(yōu)成型工藝為干燥時(shí)間為3 h，藥粉用量1 g，交聯(lián)時(shí)間15 min。

表4 均勻試驗(yàn)因素水平

表5 均勻試驗(yàn)因素水平

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn) 綜合上述結(jié)果，確定最優(yōu)制備工藝為1 g總黃酮提取物超聲分散于10.44 g 蒸餾水中，加入0.3 g 卡波姆980 攪勻；另取0.5 g 聚丙烯酸鈉、0.16 g 甘羥鋁、0.6 g 高嶺土分散于8 g 甘油中攪拌，再將藥物溶液加到甘油溶液中，混合攪拌均勻使其充分交聯(lián)15 min，再將混合物均勻涂展于4 塊5 cm×5 cm 無紡紗布背襯層，于50 ℃烘箱中烘3 h，即得凝膠膏劑，放冷，蓋膜，鋁塑薄膜袋封袋包裝，于干燥器中儲藏。然后，按上述工藝制備3 批樣品，進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見表6，可知所制得凝膠膏劑黏性和內(nèi)聚力好，外觀光滑均勻，基質(zhì)柔軟適中，皮膚追隨性好，工藝可靠，質(zhì)量穩(wěn)定。

表6 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）

2.6 含有量測定

2.6.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性考察 ACQUITY UPLC BEH SHIELD RP18 色譜柱（21 mm×150 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相0.2%甲酸（A）-乙腈（B）［6］，梯度洗脫（0 min，10%B；25 min，20%B；45 min，30%B；50 min，60%B）；體積流量0.8 mL／min；檢測波長330 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量5 μL，色譜圖見圖1。由此可知，各成分均能在40 min 內(nèi)洗脫出峰，與相鄰峰分離度均大于1.5，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6.2 對照品溶液制備 分別精密稱取芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、山柰酚-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷對照品8.0、10.8、9.2 mg 于10 mL量瓶中，70%乙醇定容至刻度，即得（每1 mL 分別含三者800、1 080、920 μg／mL）。

2.6.3 陰性樣品溶液制備 按“2.5”項(xiàng)下優(yōu)化工藝制備空白凝膠膏劑（5 cm×5 cm）1 片，刮取膏體，剪碎，置于錐形瓶中，加200 mL 70%乙醇超聲30 min，放冷，濾過，70%乙醇少量多次洗滌殘?jiān)?，合并洗滌液，靜置過濾，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，定容至250 mL，密塞搖勻，即得。

2.6.4 供試品溶液制備 取凝膠膏劑（5 cm×5 cm）1 片，刮取膏體，精密稱定質(zhì)量，置于錐形瓶中，200 mL 70%乙醇超聲30 min，放冷，浸泡至膏體變白色，濾過，70% 乙醇少量多次洗滌殘?jiān)?，合并洗滌液，靜置過濾，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，定容至250 mL，密塞搖勻，即得。

2.6.5 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.6.2”項(xiàng)下對照品溶液0.1、0.15、0.2、0.5、1.0、2.0、2.5 mL 于10 mL 量瓶中，70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，在“2.6.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行回歸，得芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、山柰酚-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷方程分別為Y＝5 777.5X－1 507.1（R2＝0.999 3）、Y＝5 585.1X＋1 543.2（R2＝0.999 5）、Y＝2 958.7X－1 071.5（R2＝0.999 0），分別在0.8～20、10.8～27、0.9～22.5 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對照品溶液，在“2.6.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定5 次，每次10 μL，測得芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、山柰酚-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷峰面積RSD 分別為1.65%、2.08%、1.39%，表明儀器精密度良好。

圖1 各成分HPLC 色譜圖

2.6.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液1 份，于0、4、8、12、24 h 在“2.6.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定，每次5 μL，測得芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、山柰酚-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷峰面積RSD 分別為0.47%、5.19%、0.85%，表明溶液在24 h 內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6.8 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.6.4”項(xiàng)下方法制備6 份供試品溶液，在“2.6.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定，測得芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3，7-2-Oα-L-吡喃鼠李糖苷、山柰酚-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷含有量RSD 分別為0.26%、3.80%、0.75%，表明該方法重復(fù)性較好。

2.6.9 加樣回收率試驗(yàn) 制備含有量已知的凝膠膏劑6 份，每份取樣約2.5 g，加入對照品溶液適量，按“2.6.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.6.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率。結(jié)果，芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、山柰酚-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷平均加樣回收率分別為97.69%、100.71%、99.01%，RSD 分別為3.44%、1.64%、2.30%。

2.6.10 樣品含有量測定 取3 批凝膠膏劑，每批3 份，精密稱定膏體質(zhì)量，按“2.6.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.6.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定，計(jì)算含有量。結(jié)果，芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、山柰酚-3，7-2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷平均含有量分別為0.41、4.23、0.74 mg／g，RSD分別為4.72%、3.57%、2.91%。

3 討論

目前，凝膠膏劑中基質(zhì)大多僅加入部分被中和的聚丙烯酸鈉NP700，依靠其與鋁離子結(jié)合后凝膠化提供黏附力，而加入中藥浸膏后黏附力往往會更低［7］。本實(shí)驗(yàn)在聚丙烯酸鈉NP700 中加入卡波姆980，具有耐離子性及耐剪切的特點(diǎn)，適用于離子較多的中藥凝膠膏劑及水溶性基質(zhì)，可無需另外使用糯米膠［8］、聚乙烯吡咯烷酮k90［9］等增黏劑，而且兩者交聯(lián)后基質(zhì)含水量高，穩(wěn)定性好，黏性適中，剝離時(shí)無明顯痛感，無殘留，使用順應(yīng)度高。預(yù)實(shí)驗(yàn)也同期比較了聚丙烯酸鈉NP800，發(fā)現(xiàn)其初黏力與NP700 差別不大，但持黏力和綜合感官仍以后者為佳［10］。

交聯(lián)時(shí)間過長時(shí)，會導(dǎo)致膏體延展性差，內(nèi)聚力過強(qiáng)，不易涂布；若交聯(lián)時(shí)間過短，則會攪拌不均，無法產(chǎn)生足夠的內(nèi)聚力。交聯(lián)速度過快時(shí)，會引起剪切力過大，會引起卡波姆980 分子鏈斷裂，而且易卷入大量氣泡；若交聯(lián)速度過慢，則會導(dǎo)致黏力不足，藥粉與基質(zhì)混合不均勻。藥粉用量過高時(shí)，會影響凝膠膏劑膜殘留性、成型、整體穩(wěn)定性［11］。干燥時(shí)間過短時(shí)，會使凝膠膏劑滲出過大，彈性差，膜殘留性差；若干燥時(shí)間過長，則會使背襯布粘黏不牢，藥物滲透性差，皮膚舒適度低。因此，本實(shí)驗(yàn)按照2015 年版《中國藥典》附錄中貼膏劑黏附力測定方法［12］選取儀器，并結(jié)合感官評價(jià)，綜合加權(quán)評分，優(yōu)化多枝霧水葛凝膠膏劑成型工藝，該方法簡便易行，數(shù)據(jù)可靠，重復(fù)性好，能客觀控制其質(zhì)量。

預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，多枝霧水葛凝膠膏劑中總黃酮提取率隨著溶液轉(zhuǎn)移次數(shù)增加而降低，而且使用多種溶劑進(jìn)行處理時(shí)也會使其提取率減少，同時(shí)水或稀醇不能使骨架溶散，基質(zhì)材料遇水呈膠黏性，藥物成分提取回收率低［13］，最終確定，采用70%乙醇超聲處理，此時(shí)提取較完全。然后，比較了流動(dòng)相體積流量0.4、0.6、0.8 mL／min，發(fā) 現(xiàn)0.8 mL／min 時(shí)分離效果最好。