劉 成，張書(shū)玉，袁艷麗，蔡英杰，李新麗

(江蘇省理化測(cè)試中心，江蘇 南京 210042)

消旋卡多曲作為一種新作用機(jī)制的抗腹瀉藥，直接抑制腸道過(guò)度分泌，快速改善腹瀉癥狀，能明顯縮短病程、減少患兒的痛苦，適用于成人及1月以上嬰兒和兒童的急性腹瀉[1]。消旋卡多曲生產(chǎn)工藝線路長(zhǎng)，在藥物生產(chǎn)過(guò)程中使用了對(duì)甲苯磺酸鹽、甲醇、乙醇和異丙醇等有毒有害試劑，產(chǎn)品中容易有對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯、對(duì)甲苯磺酸異丙酯等雜質(zhì)的殘留。由于對(duì)甲苯磺酸酯類被視為潛在基因毒性雜質(zhì)，可與DNA發(fā)生烷基化反應(yīng)[2-3]，從而可能成為引發(fā)癌癥的誘因[4-5]，因此要嚴(yán)格控制消旋卡多曲中對(duì)甲苯磺酸酯類的含量。本試驗(yàn)采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)消旋卡多曲中對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯和對(duì)甲苯磺酸異丙酯的含量，為消旋卡多曲藥物生產(chǎn)中雜質(zhì)的檢測(cè)提供技術(shù)依據(jù)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890B-5977A GC/MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國(guó)安捷倫；BT25S電子天平，德國(guó)賽多利斯。

消旋卡多曲，對(duì)甲苯磺酸甲酯(分析純，純度≥99%)，對(duì)甲苯磺酸乙酯(分析純，純度≥99%)，對(duì)甲苯磺酸異丙酯(分析純，純度≥99%)。

1.2 色譜質(zhì)譜條件

色譜柱：HP-5ms，固定相為5%苯基-甲基聚硅氧烷氣相毛細(xì)管柱(長(zhǎng)：30 m，內(nèi)徑：0.25 mm，膜厚：0.5 μm)。

載氣：氦氣。流速：0.8 mL/min。進(jìn)樣口溫度：300 ℃。

程序升溫：初始柱溫80 ℃，保持2 min，以20 ℃/min的速度升到160 ℃，以3 ℃/min的速度升到180 ℃，再以20 ℃/min的速度升到320 ℃，保持15 min。

質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)：電子轟擊(EI)離子源，電離能量70 eV，離子源溫度230 ℃，SIM掃描模式，分別選擇質(zhì)荷比(m/z)為65、91、92、107、155、172、186的離子進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

稀釋劑：乙腈。供試品溶液：取本品適量，精密稱定溶于乙腈中。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別精密稱取對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯和對(duì)甲苯磺酸異丙酯標(biāo)準(zhǔn)樣品，用乙腈稀釋至濃度為10 μg/mL。分別精密量取對(duì)照品貯備液50、100、200、300、400、500 μL于10 mL容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，得線性溶液，濃度為0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 μg/mL。取上述線性溶液各 1 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 專屬性驗(yàn)證

配制對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯、對(duì)甲苯磺酸異丙酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣。專屬性考察結(jié)果表明，各目標(biāo)峰(見(jiàn)圖1)之間分離度良好，無(wú)其他分子量相同的雜質(zhì)干擾測(cè)定，該方法專屬性強(qiáng)。

圖1 對(duì)甲苯磺酸酯類雜質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流譜圖

2.2 檢出限

表1 檢測(cè)限試驗(yàn)結(jié)果

取標(biāo)準(zhǔn)溶液適量逐級(jí)稀釋成0.005 μg/mL的溶液并進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣3針，記錄離子流圖，計(jì)算得信噪比(S/N)(見(jiàn)表1)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示：對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯和對(duì)甲苯磺酸異丙酯檢出限濃度分別為0.05 mg/kg、0.067 mg/kg和0.070 mg/kg。

2.3 線性范圍

分別配置不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，與樣品空白溶液同時(shí)進(jìn)行測(cè)定，以各組分的峰面積與其對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)甲苯磺酸甲酯在0.050～0.50 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性方程：y=6.366×105x+9159，相關(guān)系數(shù)：r=0.9992；對(duì)甲苯磺酸乙酯在0.05～0.50 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性方程：y=2.915×105x-405.3，相關(guān)系數(shù)：r=0.9991；對(duì)甲苯磺酸異丙酯在0.05～0.50 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性方程：y=9.753×104x+200.9，相關(guān)系數(shù)：r=0.9995。

2.4 方法精密度和準(zhǔn)確度

分別配制相當(dāng)于進(jìn)樣濃度0.10 μg/mL、0.40 μg/mL的加標(biāo)供試品溶液，平行進(jìn)樣6次檢測(cè)，計(jì)算各目標(biāo)化合物的含量，回收率及回收率的RSD。確定該色譜方法的測(cè)定結(jié)果與真實(shí)值(加入量)的差異，從而確認(rèn)該方法是否可以獲得準(zhǔn)確的測(cè)試結(jié)果。三種化合物的準(zhǔn)確度測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表2。對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯和對(duì)甲苯磺酸異丙酯平均回收率分別為93.0%、94.0%、94.3%。各基因毒性雜質(zhì)的精密度結(jié)果分別為對(duì)甲苯磺酸甲酯3.5%，對(duì)甲苯磺酸乙酯2.7%，對(duì)甲苯磺酸異丙酯2.6%，測(cè)定結(jié)果的RSD 均≤10.0%。各雜質(zhì)的加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果良好。該方法準(zhǔn)確度和精密度良好。

表2 對(duì)甲苯磺酸酯類準(zhǔn)確度測(cè)試結(jié)果

2.5 樣品檢測(cè)

消旋卡多曲供試品溶液：精密稱定供試品各1 g(精確到0.0001 g)，置于10 mL的量瓶中，搖勻，進(jìn)樣測(cè)試。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品檢測(cè)結(jié)果

3 結(jié) 論

本試驗(yàn)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定消旋卡多曲中的對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯、對(duì)甲苯磺酸異丙酯，本方法前處理簡(jiǎn)單、所得數(shù)據(jù)準(zhǔn)確,可用于消旋卡多曲中基因毒性雜質(zhì)的定量。